Terapia de combinação de aerossol de ácido retinóico all-trans e isotretinoína como um novo tratamento para induzir anticorpos neutralizantes em pacientes infectados com COVID-19 melhor que a vacina: um tratamento inovador (Antibodies)

Este é um estudo de Fase 2, randomizado (1:1:1), controlado por placebo, de 2 semanas, de prova de conceito para avaliar a segurança e a tolerabilidade, bem como o efeito mecanicista da administração oral de potente inibidor de neutrófilos elastase (ácido trans-retinóico inalado e isotretinoína inalada em indivíduos infectados com COVID-19

Infelizmente, todos os macacos vacinados tratados com a vacina de Oxford, conhecida como ChAdOx1 nCoV-19, estão passando por testes em humanos na Grã-Bretanha. infectados quando desafiados, a julgar pela recuperação do RNA genômico do vírus a partir de secreções nasais", disse o Dr. e, em geral, a vacinação futura contra COVID-19, que depende da vacina viral inativada, será restrita a pessoas saudáveis ​​com imunidade forte e não será administrada a pacientes com histórico de contato com infecção por SARS-CoV-2 (positivo no teste de ácido nucleico) . Além dos antígenos virais do COVID-19, estimulam a formação de anticorpos do tipo IgM na fase aguda e do tipo IgG na fase crônica, o que facilita a entrada viral e a fusão com a célula infectada por meio da captação do complexo vírus-IgG via família de receptores Fc e fusão viral posterior com células apresentadoras de antígeno como macrófagos, células B, monócitos via família FcR e endotélio vascular através do receptor Fc neonatal (nFcR) em vez de aglutinação viral induzida por anticorpos e isso é conhecido como aumento dependente de anticorpo (ADE) (2).

Existem várias hipóteses sobre como o ADE acontece e existe a probabilidade de que exista mais de um mecanismo. Em uma dessas vias, algumas células do sistema imunológico não possuem os receptores usuais em suas superfícies que o vírus usa para entrar, mas possuem receptores Fc que se ligam a uma extremidade dos anticorpos. O vírus se liga ao local de ligação do antígeno na outra extremidade e, dessa forma, consegue entrar e infectar a célula imune. O vírus da dengue pode usar esse mecanismo para infectar macrófagos humanos, se houver uma infecção anterior com uma cepa diferente do vírus, fazendo com que uma infecção viral normalmente leve se torne uma ameaça à vida.(3) Uma questão em andamento na pandemia de COVID-19 é se, e em caso afirmativo, até que ponto o COVID-19 recebe ADE de infecção anterior com outros coronavírus.

Os ADE podem dificultar o desenvolvimento de vacinas: os ADE podem dificultar o desenvolvimento de vacinas, pois uma vacina pode causar a produção de anticorpos que, via ADE, pioram a doença contra a qual a vacina se destina a proteger. As vacinas candidatas para o vírus da Dengue e o vírus da peritonite infecciosa felina (um coronavírus de gato) tiveram que ser interrompidas porque provocaram EAM.(4)

A ADE na infecção por coronavírus pode ser causada pela alta taxa de mutação do gene que codifica a proteína spike (S). Uma análise completa da variabilidade de aminoácidos nas proteínas do vírus SARS-CoV-2, que incluiu a proteína S, revelou que os aminoácidos menos conservadores estão nos fragmentos mais expostos da proteína S, incluindo o domínio de ligação ao receptor (RBD).(5) O atraso na resposta e secreção de anticorpos após o início dos sintomas de covid-19 é responsável pelo aumento dependente de anticorpos (ADE)

Um estudo mostra que o primeiro dia de soroconversão de IgA ocorreu 2 dias após o início dos sintomas iniciais, e o primeiro dia de soroconversão de IgM e IgG ocorreu 5 dias após o início. A taxa de positividade de anticorpos nas 183 amostras foi de 98,9%, 93,4% e 95,1%, para IgA, IgM e IgG, respectivamente. A taxa de soroconversão para IgA, IgM ou IgG foi de 100% 32 dias após o início dos sintomas. De acordo com a curva cumulativa de soroconversão, o tempo médio de conversão para IgA, IgM e IgG foi de 13, 14 e 14 dias, respectivamente. (6)

Como essa resposta imune demora um pouco para aparecer, os testes de anticorpos serão negativos para os recém-infectados com COVID-19, por isso não são usados ​​para diagnóstico.

"Se é o começo da infecção, você não a pega, é algo que só se desenvolve mais tarde", Dra. Melanie Ott, virologista e imunologista dos Institutos Gladstone e professora da Universidade da Califórnia, em São Francisco. (7)

Assim, o investigador principal espera que a resposta tardia de anticorpos e a mudança tardia de classe de imunoglobulina sejam a principal razão para a infecciosidade e não especificidade dos anticorpos na infecção por covid-19 altamente mutante.

Anticorpos IgG de alta afinidade podem resolver eficientemente a infecção por Covid-19

As mais de 100 vacinas COVID-19 em desenvolvimento se concentram principalmente em outra resposta imune: os anticorpos. Essas proteínas são produzidas pelas células B e, idealmente, se ligam ao SARS-CoV-2 e impedem que ele entre nas células. As células T, em contraste, impedem as infecções de duas maneiras diferentes. As células T auxiliares estimulam as células B e outros defensores imunológicos a entrar em ação, enquanto as células T assassinas atacam e destroem as células infectadas. A gravidade da doença pode depender da força dessas respostas das células T(1).

Estudos sobre respostas humorais a infecções têm sido voltados principalmente para a produção de anticorpos IgG de alta afinidade que resolvem eficientemente uma infecção. Tem sido bem reconhecido, no entanto, que a resposta imune humoral à infecção pode ser uma faca de dois gumes que serve como um mecanismo protetor para resolver a infecção ou agrava a lesão tecidual, por exemplo, A resposta de IgG causa lesão pulmonar aguda fatal ao distorcer a resposta de resolução da inflamação na SARS.(8)

No caso de infecção respiratória, enquanto os isotipos IgM e IgG têm sido a principal ênfase na caracterização da imunidade, as respostas de IgA sistêmica e mucosa que podem desempenhar um papel crítico na patogênese da doença receberam muito menos atenção.(9),(11)

Neutrófilos elevados na infecção por covid-19 podem ser a razão da resposta tardia de anticorpos e complicações graves

A resposta imune humoral, especialmente a produção de anticorpos neutralizantes, desempenha um papel protetor ao limitar a infecção na fase posterior e prevenir a reinfecção no futuro. No SARS-CoV, os epítopos das células T e B foram extensivamente mapeados para as proteínas estruturais, proteínas S, N, M e E.(12) Foram relatados detalhes serológicos limitados do SARS-CoV-2. Em um estudo preliminar, um paciente apresentou IgM específico de pico no dia 9 após o início da doença e a mudança para IgG na semana 2.25 Curiosamente, os soros de 5 pacientes com COVID-19 confirmado mostram alguma reação cruzada com SARS-CoV, mas não com outros coronavírus . Além disso, todos os soros dos pacientes foram capazes de neutralizar o SARS-CoV-2 em um ensaio de placa in vitro, sugerindo uma possível montagem bem-sucedida das respostas humorais.(13) Se a cinética/título do anticorpo específico se correlaciona com a gravidade da doença ainda precisa ser investigado.(14)

Em casos graves da doença de coronavírus 2019 (COVID-19), a pneumonia viral progride para insuficiência respiratória. Armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) são teias extracelulares de cromatina, proteínas microbicidas e enzimas oxidantes que são liberadas por neutrófilos para conter infecções. No entanto, quando não devidamente regulados, os NETs têm potencial para propagar inflamação e trombose microvascular - inclusive nos pulmões de pacientes com síndrome do desconforto respiratório agudo. Embora níveis elevados de neutrófilos no sangue prevejam resultados piores no COVID-19, o papel dos NETs não foi investigado. Agora relatamos que os soros de pacientes com COVID-19 (n = 50 pacientes, n = 84 amostras) têm níveis elevados de DNA livre de células, mieloperoxidase (MPO)-DNA e histona citrulinada H3 (Cit-H3); os dois últimos são marcadores altamente específicos de TNEs.(15)

Os neutrófilos são células sofisticadas capazes de se adaptar às mudanças na inflamação

Os neutrófilos não são simples bolsas de enzimas enviadas para matar patógenos antes que as células imunes adaptativas se movam. Na verdade, eles são capazes de responder ao estado inflamatório alterado; os neutrófilos podem produzir citocinas, alterar sua expressão gênica durante a inflamação e ao longo do "envelhecimento" e sobreviver por muito mais tempo do que se pensava tradicionalmente, com um estudo colocando o tempo de vida da medula óssea em 5,4 dias. Como consequência, os neutrófilos são capazes de se adaptar às mudanças nas condições e direcionar o comportamento de outras células - uma tarefa que eles podem realizar com alguma sofisticação.

Existem vários modelos murinos nos quais as respostas das células T podem ser exacerbadas pela depleção de neutrófilos, o que implica que eles têm um papel regulador. Essa supressão das respostas das células T pelos neutrófilos requer contato próximo e desenvolvimento de uma sinapse imunológica - talvez como os mediadores pensavam ser responsáveis, espécies reativas de oxigênio e H2O2 não se difundem muito. A absorção de neutrófilos apoptóticos ou necróticos também inibe a apresentação e coestimulação do antígeno DC, resultando em respostas reduzidas de células T - uma situação que pode ser explorada por patógenos. Por exemplo, os neutrófilos capturam L. major e são subseqüentemente engolfados por DCs, suprimindo a apresentação de antígenos e o priming de células T

NE também demonstrou inibir a maturação e a função das células dendríticas, incluindo a expressão das moléculas co-estimuladoras CD40, CD80 e CD86. As secreções pulmonares inflamatórias inibem a maturação e a função das células dendríticas via elastase de neutrófilos.

Inibidor da elastase na infecção por covid-19:

1. Alvelestat foi desenvolvido como tratamento para doenças pulmonares como a Doença Pulmonar Obstrutiva Crônica. Alevelestat funciona bloqueando certas proteínas no corpo que são responsáveis ​​pela inflamação e danos aos pulmões que podem levar a sintomas de DPOC.

   Alvelestat Inhibitor of elastase estimula a diferenciação de linfócitos B murinos em células produtoras de IgG e IgA por meio de troca de classe de imunoglobulina e indução também conhecida como troca de isotipo, comutação isotípica ou recombinação de troca de classe (CSR), é um mecanismo biológico que altera a produção de uma célula B de imunoglobulina de um tipo para outro, como do isotipo IgM para o isotipo IgG

   Um estudo demonstrou que a depleção de neutrófilos melhora a produção de IgA e IgG da mucosa após a imunização sublingual com a toxina do edema de Bacillus anthracis como adjuvante. Esses estudos anteriores também demonstraram que existe uma correlação inversa entre o número de neutrófilos e a produção de IgA pelas células B. Utilizando inibidores específicos da elastase, questionamos se a atividade elastase dos neutrófilos poderia ser o fator que interfere na produção de IgA e possivelmente de outros isotipos de imunoglobulinas. Descobrimos que esplenócitos murinos e células de linfonodos mesentéricos cultivados por 5 dias na presença de inibidores de elastase de neutrófilos secretam níveis mais altos de IgG e IgA do que células cultivadas na ausência de inibidores e também, Este tratamento, no entanto, aumentou a frequência de células T CD4+ .(17) Como um vírus direcionado à mucosa, seria esperado que o SARS-CoV-2 gerasse IgA secretora (sIgA) e induzisse forte imunidade da mucosa. De fato, foi demonstrado que a imunidade antiviral da mucosa resulta em parte das interações mediadas por IgA com os microrganismos patogênicos para evitar que os patógenos adiram à superfície celular.(17) A produção aumentada de IgA pode ser o resultado de níveis aumentados de TGF-β e IL-10 que promovem a troca de anticorpos na infecção por SARS-CoV-2.(17) Um estudo relatou que a depleção de neutrófilos antes da injeção sistêmica de vacinas aumentou a magnitude das respostas de células T CD4+ específicas de antígeno e os níveis de respostas de IgG sérica específicas de antígeno.(18)

   Verificou-se que o alvelestat e o sivelestat estimulam a síntese de ARNm da AID. Os inibidores de NE também induziram a expressão de BAFF, APRIL e IL-10 mRNA de maneira dose-dependente. Foi demonstrado que a elastase de neutrófilos e as serina proteases relacionadas, catepsina G e proteinase 3, regulam as respostas de citocinas por meio da ativação ou degradação de citocinas, receptores de citocinas ou receptores do tipo toll.(18) Isso é consistente com nosso achado de que os inibidores de NE estimulam a expressão de IL-10, mas também BAFF e APRIL em culturas de esplenócitos. Foi relatado que IL-10 regula a expressão de AID para indução de Ig CSR. (19) e está bem estabelecido que a IL-10 facilita a troca de classes de Ig para a produção de IgA (20). Assim, esses dados sugerem que os inibidores da NE estimulam a produção de anticorpos por meio da estimulação da AID e inibição da ativação/degradação de citocinas e receptores de citocinas pela elastase. A NE também mostrou inibir a maturação e a função das células dendríticas, incluindo a expressão das moléculas co-estimuladoras CD40, CD80 e CD86 .(21). Assim, a presença de inibidores de neutrófilos pode ter promovido a maturação de células dendríticas e sua expressão BAFF e APRIL e talvez moléculas co-estimuladoras (ou seja, CD40) para produção aumentada de anticorpos. Embora Alvelestat e Sivelestat sejam inibidores específicos de NE, deve-se considerar que eles também podem inibir enzimas semelhantes à elastase relacionadas. A este respeito, foi relatado que células B humanas ativadas expressam uma serina protease semelhante à tripsina na superfície celular.(22) Observações finais Foi demonstrado anteriormente que as defensinas de peptídeos neutrófilos aumentam as respostas de IgG, mas não de IgA contra antígenos vacinais administrados concomitantemente por via nasal.(23) Aqui, o estudo mostrou que a atividade da serina protease da elastase de neutrófilos, e possivelmente outra serina protease, como a elastase de células B, também participa da regulação da biologia das células B e da imunidade adaptativa. No entanto, ao contrário das defensinas peptídicas de neutrófilos, a NE regula negativamente a diferenciação de linfócitos B em células secretoras de IgG e IgA. A presença de AID geralmente melhora a imunidade baseada em anticorpos.(24).

   Neutrófilos elevados em pacientes infectados com COVID-19 são capazes de causar danos graves ao tecido pulmonar, liberando proteases tóxicas e espécies reativas de oxigênio, se não forem contrabalançados pelas antiproteases.

2. O ácido all-trans retinóico (AR) tem efeitos benéficos quando usado em uma variedade de condições inflamatórias da pele. Em um estudo, os autores descobriram que o RA inibiu a produção de ânion superóxido e a liberação de enzimas proteolíticas por neutrófilos humanos e de ratos. Concomitantemente, os autores descobriram que os neutrófilos tratados com RA eram menos capazes do que os neutrófilos não tratados de ferir células endoteliais em cultura, embora a adesão dos neutrófilos tratados com RA às monocamadas de células endoteliais não fosse diminuída. A inibição da citotoxicidade ocorreu na mesma faixa de concentrações que inibiu a formação de radicais de oxigênio e a liberação de protease. Em estudos adicionais, observou-se que o pré-tratamento de células endoteliais com resistência induzida por AR à lesão subsequente por neutrófilos ativados. Finalmente, estudos in vivo mostraram que o pré-tratamento de ratos por 3 dias com AR (1-10 mg/dia, IP) reduziu o grau de lesão nos pulmões e nos locais da pele após o tratamento com albumina de soro bovino e anticorpos para albumina de soro bovino no reação de Arthus passiva reversa. Assim, a RA pode modular a lesão celular endotelial mediada por neutrófilos por um efeito tanto nos neutrófilos quanto nas suas células-alvo. Juntos, esses efeitos podem estar por trás da redução da lesão mediada por imunocomplexos observada em animais experimentais. Os efeitos benéficos que os retinóides têm em uma variedade de doenças inflamatórias da pele também podem ser um reflexo de seus efeitos na fisiologia dos neutrófilos e das células endoteliais.

Palmitato de retinil oral ou ácido retinóico corrige as respostas de IgA da mucosa a uma vacina intranasal contra o vírus influenza em camundongos deficientes em vitamina a. Os retinóides inibem as respostas inflamatórias de células T TH17, promovem respostas de células T regulatórias (Treg) e regulam a expressão de receptores semelhantes a toll (TLRs).(57)

Assim, o investigador principal espera que o ácido retinóico seja eficaz em pacientes com covid-19 melhor do que o outro inibidor de elastase de neutrófilos como Alvelestat porque Attia et al (2018) demonstraram que Sivelestat reduziu a secreção de IgM de maneira dependente da dose, tipo IgM de anticorpos que é muito importante na neutralização viral e, por outro lado, o ácido retinóico interrompe a lesão das células endoteliais mediada por neutrófilos por um efeito nos neutrófilos e em suas células-alvo.

O medicamento indicado é a isotretinoína (13cis RA) e o ATRA pode ser capaz de inibir a infecção por COVID 2019 por meio da indução da imunidade antiviral e isso é discutido a seguir:

Um estudo demonstrou que o 13 cis retinóico é usado no tratamento do enfisema (enfisema é uma condição pulmonar que causa falta de ar), uma vez que uma resposta imune eficaz contra infecções virais depende da ativação de células T citotóxicas que podem eliminar a infecção matando os vírus infectados células, aumentar o número e a função das células T em pacientes com COVID-19 é fundamental para uma recuperação bem-sucedida. Um estudo recente relatou que 82,1% dos casos de COVID-19 apresentavam baixa contagem de linfócitos circulantes. Um CoV infecta macrófagos e, em seguida, os macrófagos apresentam antígenos CoV às células T. Esse processo leva à ativação e diferenciação de células T, incluindo a produção de citocinas associadas aos diferentes subconjuntos de células T (Th17), seguidas por uma liberação maciça de citocinas para amplificação da resposta imune. A produção contínua desses mediadores devido à persistência viral tem um efeito negativo na ativação de NK e células T CD8.(25)

Estudo recente de 522 pacientes com COVID e 40 controles saudáveis ​​de dois hospitais em Wuhan, China, demonstrou que os números de células T estão negativamente correlacionados com a concentração sérica de IL-6, IL-10 e TNF-α, com pacientes em período de declínio apresentando redução de IL-6 , concentrações de IL-10 e TNF-α e contagens de células T restauradas. As células T de pacientes com COVID-19 têm níveis significativamente mais altos da proteína de morte celular programada do marcador esgotado (PD-1) em comparação com os controles de saúde. Além disso, o aumento da expressão de PD-1 e Tim-3 nas células T pode ser visto à medida que os pacientes progridem de estágios prodrômicos para abertamente sintomáticos, indicativo adicional de exaustão de células T. A exaustão das células T é uma perda progressiva da função efetora devido à estimulação prolongada do antígeno, característica de infecções crônicas. A inibição das células dendríticas está ligada ao esgotamento da polifuncionalidade das células T CD8+ durante a infecção crônica pelo vírus da hepatite C. As células T CD8 produzem mediadores muito eficazes para eliminar o nCoV2019.(26)

As células dendríticas (DCs) desempenham um papel fundamental nas respostas imunes inata e adaptativa. Como as células apresentadoras de antígenos mais fortes do organismo, elas estimulam efetivamente a ativação de linfócitos T e linfócitos B, combinando assim a imunidade inata e adaptativa. As DCs imaturas têm forte capacidade de migração e as DCs maduras podem efetivamente ativar as células T no elo central de inicialização, regulação e manutenção das respostas imunes. Assim, uma vez que o processo de maturação das DCs é bloqueado, ele afeta diretamente o início da resposta imune adaptativa subsequente. MERS-CoV-2 é capaz de afetar células dendríticas humanas e macrófagos in vitro. A replicação produtiva do coronavírus da síndrome respiratória do Oriente Médio em células dendríticas derivadas de monócitos modula a resposta imune inata.(27)

Outro estudo propôs que o receptor de quimiocina C -C tipo 4 (CCR4) contribui para o imprinting pulmonar das células T. Verificou-se que as DC pulmonares induzem a expressão de CCR4 nas células T. As células T ativadas por DCs pulmonares trafegam de forma mais eficiente para o pulmão e protegem contra a gripe de forma mais eficaz em comparação com as células T ativadas por DCs de outros tecidos. Lim e colegas sugeriram que o CXCR4 desempenha um papel na migração de células T CD8+ para os tecidos das vias aéreas.(28)

A inibição das células dendríticas está ligada ao esgotamento da polifuncionalidade das células T CD8+ durante a infecção crônica pelo vírus da hepatite C. As células T CD8 produzem mediadores muito eficazes para eliminar o nCoV2019.(29)

A presença de AR em diferentes tecidos é muito importante para a indução imune e combate à infecção viral, por exemplo, o RA está presente em altas concentrações no intestino delgado devido ao metabolismo da vitamina A dietética pelas células epiteliais do intestino. Neste ambiente local, RA ativa e prepara células dendríticas (DCs) para se tornarem CD103+ DCs que produzem RA.3, 4CD103+ DCs são células migratórias que ativam células T virgens em linfonodos mesentéricos para se tornarem células T efetoras que contribuem para a homeostase intestinal e imunidade.e também RA é um sinal importante que induz células B produtoras de IgA. As células T homing do intestino e as células B desempenham papéis essenciais na proteção do trato digestivo contra patógenos.(30) O ácido retinóico (atRA) pode inibir a apoptose espontânea de linfócitos T humanos ativados in vitro. 13-cis RA ativa a produção de citocinas Th2 Aumenta o número de células dendríticas circulantes.(40)

Assim, de acordo com esses estudos anteriores, o investigador principal sugere que a linfopenia e a exaustão das células T podem ser resultado da infecção e inibição das células dendríticas (DCs) pelo MERS-CoV-2.

O ácido retinóico tem efeitos profundos na proliferação e diferenciação celular. Além disso, foi relatado que o ATRA exibe efeitos anti-inflamatórios e imunorreguladores. Estudos recentes mostraram que a expressão de FOXP3 e a função imune de células T reguladoras (Tregs) podem ser aumentadas por ATRA no sistema imunológico de pacientes e mic.13 O ácido retinóico (RA) é produzido por vários tipos de células, incluindo macrófagos e células dendríticas, que expressam desidrogenases da retina que convertem a vitamina A em seu principal metabólito biologicamente ativo, o all-trans RA. All-trans RA liga-se aos seus receptores nucleares de ácido retinóico que são expressos em células linfóides e atuam como fatores de transcrição para regular o homing e a diferenciação celular. A produção de AR por células dendríticas CD103+ e macrófagos alveolares funciona com TGF-b para promover a conversão de células T virgens em células T reguladoras Foxp3+ e, assim, manter a tolerância da mucosa.(50) Assim, o investigador principal espera alta indução de células dendríticas (DCs) pelo tratamento com ácido retinóico, o que levará à ativação e migração de células T com menos fenômeno de exaustão.

Pesquisadores de Wenzhou, na China, analisaram características laboratoriais clínicas, incluindo níveis lipídicos de pacientes com COVID 19. Eles encontraram reduções dramáticas nos níveis de colesterol de pacientes infectados com COVID 19, em comparação com controles saudáveis. O estudo fornece dados que sugerem que os níveis de colesterol diminuem rapidamente durante os estágios iniciais da infecção e aumentam quando o paciente começa a se recuperar. Portanto, indicando que o colesterol pode ter um papel importante a desempenhar na defesa do corpo contra tais infecções. De acordo com nosso protocolo, dependendo de estudos anteriores, o investigador principal demonstrou que existe uma forte relação entre o sistema imunológico e os níveis de colesterol. :-

O colesterol celular é um componente da membrana plasmática e também é essencial na proliferação celular. A regulação dos níveis de colesterol intracelular tem sido proposta como um mecanismo para regular a proliferação de células T e macrófagos. O nível de colesterol intracelular é regulado por duas vias concorrentes, captação e efluxo de colesterol, e ABCA1 desempenha um papel importante na via de efluxo de colesterol. O ATRA induz a expressão de ABCA1 e o efluxo de colesterol dependente de ABCA1 em células T CD4+ humanas primárias ativadas, o que implica que a RA pode afetar as funções das células T regulando os níveis de colesterol celular.(51) ATRA regula positivamente a expressão de ABCA1 apenas em células T CD4+ ativadas, indicando que a indução de ABCA1 por ATRA e ácido retinóico 13 cis pode desempenhar um papel importante na resposta imune.

O ácido retinóico e o agonista do receptor X do fígado inibem sinergicamente a infecção pelo HIV nas células T CD4+ por meio da regulação positiva do efluxo de colesterol mediado por ABCA1.(52)(53)

A AR também atua diretamente nos macrófagos em ambos os locais da mucosa e em outros locais imunológicos. AtRA modula a ativação de macrófagos peritoneais por endotoxina e IFN-γ suprimindo a produção de TNF e a síntese de óxido nítrico (NO). LPS) em macrófagos peritoneais murinos.(54)

Um estudo relatou recentemente que a substância (ATRA) tem efeitos preventivos na fibrose pulmonar por inibir a proliferação dependente de IL-6 e a diferenciação trans dependente de TGF-β1 de fibroblastos pulmonares. Além disso, outros estudos demonstraram que o ácido 13-cis-retinóico e outros análogos retinóides inibem a produção de IL-6 induzida por IL-1 e que esse efeito é específico do análogo e, pelo menos parcialmente, mediado transcricionalmente. Este efeito foi dependente da dose com um IC50 de 10(-7) M RA e inibição significativa sendo observada com doses de RA tão baixas quanto 10(-8) M. A produção de IL-10 foi inibida pela administração de ATRA.(55)

Um estudo demonstrou que camundongos TLR3(-/-), TLR4(-/-) e TRAM(-/-) são mais suscetíveis ao SARS-CoV do que camundongos do tipo selvagem, mas experimentam apenas perda de peso transitória sem mortalidade em resposta a infecção. Em contraste, camundongos deficientes no adaptador TLR3/TLR4 TRIF são altamente suscetíveis à infecção por SARS-CoV, apresentando aumento da perda de peso, mortalidade, função pulmonar reduzida, patologia pulmonar aumentada e títulos virais mais altos. Novos estudos mostraram que o alto nível de IFN-α/β produzido a partir da via TLR3-IRF3/IRF7 e IFN-β é o motivo da inibição da replicação do DENV. O ácido 13Cis retinóico induziu uma regulação positiva significativa do receptor toll-like 3 (TLR3), resultando em uma resposta imune ao dsRNA intermediário que pode ser parcialmente gerado durante a replicação de CoV-2TLR3 sensibilizado por dsRNA e cascatas de vias de sinalização (ativação de IRFs e NFκB, respectivamente) são ativado para produzir IFNs tipo I.(56)

.

Palmitato de retinil oral ou ácido retinóico corrige as respostas de IgA da mucosa a uma vacina intranasal contra o vírus influenza em camundongos deficientes em vitamina a. Os retinóides inibem as respostas inflamatórias de células T TH17, promovem respostas de células T regulatórias (Treg) e regulam a expressão de receptores semelhantes a toll (TLRs).(57) O tratamento in vitro de monócitos humanos normais com ácido all-trans retinóico (ATRA) diminui a expressão de TLR-2 (58), mas esse efeito não foi examinado em pacientes tratados com retinóides sistêmicos. A isotretinoína (ácido 13-cis retinóico; 13-cis RA) é o único fármaco capaz de induzir uma remissão duradoura ou permanente da acne; no entanto, os mecanismos que levam a essa resposta duradoura são desconhecidos. Dado o papel de TLR-2 em iniciar respostas imunes a P. acnes, levantamos a hipótese de que a regulação negativa de TLR-2 em monócitos e/ou a indução de respostas Treg in vivo podem representar mecanismos pelos quais a isotretinoína exerce seus efeitos a longo prazo .

A isotretinoína (13cis RA) pode ser capaz de inibir a entrada de COVID 2019 por meio da regulação negativa da proteína ACE2, AT1 e liberação de cálcio intracelular mediada por Ang II, em vez da inibição da interleucina-6 (IL-6) e isso é discutido a seguir:

Muitos autores não entendem a diferença entre os BRAs, que bloqueiam os receptores ATR1 e a droga hipotética que poderia bloquear o sítio de ligação do COVID-19 no receptor ACE2, que é totalmente diferente do ATR1 e 2.

A pandemia de COVID-19 causada pelo SARS-COV-2 infectou mais de 2.000.000 de pessoas, causando mais de 150.000 mortes.(59) Uma proteína celular hospedeira chave necessária para a entrada do vírus é a enzima conversora de angiotensina 2 (ACE2), cuja expressão foi demonstrada em muitos tecidos, incluindo células epiteliais alveolares tipo II nos pulmões, mucosa oral e intestino, coração, rim, endotélio e pele. As células que expressam ACE2 podem atuar como células domésticas e são propensas à infecção por SARS-CoV-2, pois o receptor ACE2 facilita a entrada e a replicação viral celular.(60) Um estudo demonstrou que pacientes com hipertensão e diabetes mellitus podem estar em maior risco de infecção por SARS-CoV-2, pois esses pacientes são frequentemente tratados com inibidores da ECA (IECAs) ou bloqueadores dos receptores tipo I da angiotensina II (BRAs), que foram sugerido anteriormente para aumentar a expressão de ACE2.(61) Em outro estudo de Sinha et al, que analisaram um conjunto de dados do Connectivity Map (CMAP) publicamente disponível de perfis pré/pós transcriptômicos para tratamento medicamentoso em linhagens de células para mais de 20.000 moléculas pequenas, a isotretinoína foi o regulador negativo mais forte dos receptores ACE 2. Por outro lado, eles encontraram 6 medicamentos no CMAP que estão atualmente sendo investigados em ensaios clínicos para o tratamento de COVID-19 (cloroquina, talidomida, metilprednisolona, ​​losartan, lopinavir e ritonavir, de Clinicaltrials.gov), nenhum dos quais alterou significativamente a expressão de ACE2 (P>0,1) Além disso, outro estudo demonstrou que a isotretinoína é um potencial inibidor da papaína como protease (PLpro), que é uma proteína codificada pelos genes SARS-CoV-2 e considerada uma das proteínas que deve ser direcionada no tratamento de COVID-19, realizando testes virtuais baseados em alvos. triagem de ligantes. Como o investigador principal discutiu antes disso (13cRA) é o regulador negativo mais forte de ACE2.

O investigador principal espera que o 13cRA possa inibir ou diminuir o ACE2 por interação direta e ligação com o transmembrana ACE2, sugerindo seu potencial terapêutico na prevenção da entrada de COVID 2019 na célula hospedeira.

Estudos anteriores sobre o coronavírus relacionado à síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV) e SARS-CoV FP FP mostraram que o cálcio (Ca2+) desempenha um papel importante para a atividade fusogênica por meio de um bolso de ligação de Ca2+ com ácido glutâmico (E) e ácido aspártico conservados (D) os resíduos demonstraram que o Ca2+ intracelular aumenta a infecção por MERS-CoV WT PPs em aproximadamente duas vezes e que o E891 é um resíduo crucial para a interação do Ca2+. A ressonância de spin do elétron revelou que esse aprimoramento pode ser atribuído ao aumento da ordem de membrana relevante para a fusão MERS-CoV FP de Ca2+. Curiosamente, a titulação de calorimetria isotérmica mostrou que o MERS-CoV FP se liga a um Ca2+, ao contrário do SARS-CoV FP, que se liga a dois íons Ca2+.(62)

A angiotensina II aumenta a atividade do cálcio intracelular nos podócitos do glomérulo intacto. O bloqueador de canal de Ca2+ tipo L nicardipina não influenciou o aumento mediado por Ang II [Ca2+] e foi postulado que a ligação de SARS-CoV-2 a ACE2 pode atenuar a atividade residual de ACE2, distorcendo o equilíbrio ACE/ACE2 para um estado de aumento da atividade da angiotensina II, levando à vasoconstrição pulmonar e danos inflamatórios e oxidativos aos órgãos, o que aumenta o risco de lesão pulmonar aguda (ALI). A AngII via receptores AT1 regula positivamente muitos genes pró-inflamatórios, como a molécula-1 de adesão celular vascular (VCAM-1), molécula-1 de adesão intercelular (ICAM-1), interleucina-6 (IL-6).30 mas o 13cis RA reduziu especificamente a proteína AT1 de maneira dependente da dose e do tempo. A regulação negativa da expressão de AT1 leva à redução da liberação de cálcio intracelular mediada por AngII Da mesma forma que a regulação negativa do receptor, o tratamento com 13cRA resultou em uma redução significativa no mRNA de AT1.(63)

Finalmente, o investigador principal espera que a isotretinoína ajude na indução de anticorpos contra o COVID-19 através da indução de diferentes tipos de fatores imunológicos antivirais e também na diminuição da hipermutação do COVID-19 bloqueando seus receptores ACE2 e impedindo a entrada e replicação do vírus nas células e isso dará ao sistema imunológico tempo para reconhecer o COVID-19.