Aerosolkombinationsterapi af All-trans Retinoic Acid og Isotretinoin som en ny behandling til at inducere neutraliserende antistoffer hos COVID-19-inficerede patienter bedre end vaccine: En innovativ behandling (Antibodies)

Dette er en fase 2, , randomiseret (1:1:1), placebokontrolleret, 2-ugers, proof-of-concept undersøgelse for at evaluere sikkerheden og tolerabiliteten samt den mekanistiske effekt af oral administration af potent neutrofil hæmmer elastase (Inhaleret al transretinsyre og inhaleret isotretinoin hos forsøgspersoner inficeret med COVID-19

Desværre gennemgår alle de vaccinerede aber, der er behandlet med Oxford-vaccinen kendt som ChAdOx1 nCoV-19, menneskelige forsøg i Storbritannien. inficeret, når de udfordres, vurderet ud fra genvinding af virusgenomisk RNA fra nasale sekretioner," sagde Dr. William Haseltine, en tidligere Harvard Medical School-professor, som havde en central rolle i udviklingen af ​​tidlige HIV/Aids-behandlinger. og generelt vil fremtidig COVID-19-vaccination, som afhænger af inaktiveret viral vaccine, være begrænset til raske mennesker med stærk immunitet, og den vil ikke blive givet til patienter med historie med kontakt med en SARS-CoV-2-infektion (positiv i nukleinsyretest) . I tillæg til COVID-19 fører virale antigener til at stimulere antistofdannelsen af ​​IgM i akut fase og IgG-type i kronisk fase, hvilket letter viral indtræden og fusion med inficerede celler gennem optagelse af virus-IgG-komplekset via Fc-familien af ​​receptorer og senere viral fusion med antigenpræsenterende celler som makrofager, B-celler, monocytter via FcR-familien og vaskulært endotel gennem den neonatale Fc-receptor (nFcR) i stedet for antistoffer induceret viral agglutination, og dette er kendt som antistofafhængig forstærkning (ADE)(2).

Der er forskellige hypoteser om, hvordan ADE opstår, og der er en sandsynlighed for, at der eksisterer mere end én mekanisme. I en sådan vej mangler nogle celler i immunsystemet de sædvanlige receptorer på deres overflader, som virussen bruger til at få adgang til, men de har Fc-receptorer, der binder til den ene ende af antistoffer. Virusset binder sig til antigenbindingsstedet i den anden ende og får på denne måde adgang til og inficerer immuncellen. Dengue-virus kan bruge denne mekanisme til at inficere humane makrofager, hvis der var en forudgående infektion med en anden virusstamme, hvilket forårsager, at en normalt mild virusinfektion bliver livstruende.(3) Et løbende spørgsmål i COVID-19-pandemien er, om - og i givet fald i hvilket omfang - COVID-19 modtager ADE fra tidligere infektion med andre coronavirus.

ADE kan hæmme vaccineudvikling: ADE kan hæmme vaccineudvikling, da en vaccine kan forårsage produktion af antistoffer, som via ADE forværrer den sygdom, vaccinen er designet til at beskytte mod. Vaccinekandidater for dengue-virus og katte-infektiøs peritonitis-virus (en katte-coronavirus) måtte stoppes, fordi de fremkaldte ADE.(4)

ADE i coronavirus-infektion kan være forårsaget af høj mutationshastighed af genet, der koder for spike (S) protein. En grundig analyse af aminosyrevariabiliteten i SARS-CoV-2-virusproteiner, der inkluderede S-proteinet, afslørede, at mindst konservative aminosyrer er i de fleste eksponerede fragmenter af S-protein inklusive receptorbindingsdomæne (RBD).(5) Forsinket antistofrespons og sekretion efter covid-19 symptomer er ansvarlig for antistofafhængig forstærkning (ADE)

En undersøgelse viser, at den første serokonversionsdag for IgA var 2 dage efter debut af de første symptomer, og den første serokonversionsdag for IgM og IgG var 5 dage efter debut. Den positive andel af antistoffer i de 183 prøver var 98,9 %, 93,4 % og 95,1 % for henholdsvis IgA, IgM og IgG. Serokonverteringsraten for IgA, IgM eller IgG var 100 % 32 dage efter symptomdebut. Ifølge den kumulative serokonversionskurve var mediankonverteringstiden for IgA, IgM og IgG henholdsvis 13, 14 og 14 dage. (6)

Fordi dette immunrespons tager et stykke tid at vise sig, vil antistoftest være negative for dem, der nyligt er inficeret med COVID-19, hvorfor de ikke bruges til diagnose.

"Hvis det er begyndelsen af ​​infektionen, tager du den ikke op, det er noget, der først udvikler sig senere," Dr. Melanie Ott, en virolog og immunolog ved Gladstone Institutes og professor ved University of California, San Francisco. (7)

Så den primære efterforsker forventer, at forsinket antistofrespons og forsinket immunglobulinklasseskift er hovedårsagen til antistoffers infektivitet og ikke-specificitet i den stærkt muterede covid-19-infektion

IgG-antistoffer med høj affinitet kan effektivt løse Covid-19-infektion

De mere end 100 COVID-19-vacciner under udvikling fokuserer hovedsageligt på et andet immunrespons: antistoffer. Disse proteiner er lavet af B-celler og hænger ideelt på SARS-CoV-2 og forhindrer det i at trænge ind i cellerne. T-celler derimod modvirker infektioner på to forskellige måder. Hjælper-T-celler ansporer B-celler og andre immunforsvarere til handling, hvorimod dræber-T-celler målretter mod og ødelægger inficerede celler. Sværhedsgraden af ​​sygdommen kan afhænge af styrken af ​​disse T-celle-responser(1).

Undersøgelser af humorale reaktioner på infektioner har hovedsageligt været rettet mod produktionen af ​​IgG-antistoffer med høj affinitet, som effektivt løser en infektion. Det har imidlertid været velkendt, at humoral immunrespons på infektion kan være et tveægget sværd, der enten tjener som en beskyttende mekanisme til at løse infektionen eller forværrer vævsskaden, f.eks. IgG-respons forårsager fatal akut lungeskade ved skævvridning af betændelsesopløsende respons ved SARS.(8)

I tilfælde af luftvejsinfektion, mens IgM- og IgG-isotyper har været den primære vægt i karakteriseringen af ​​immunitet, har slimhinde- og systemiske IgA-responser, der kan spille en kritisk rolle i sygdomspatogenesen, fået meget mindre opmærksomhed.(9),(11).

Høje neutrofiler i covid-19-infektion kan være årsagen til forsinket antistofrespons og alvorlige komplikationer

Humoral immunrespons, især produktion af neutraliserende antistof, spiller en beskyttende rolle ved at begrænse infektion i senere fase og forhindrer geninfektion i fremtiden. I SARS-CoV blev både T- og B-celleepitoper i vid udstrækning kortlagt for de strukturelle proteiner, S-, N-, M- og E-protein.(12) Der blev rapporteret begrænsede serologiske detaljer om SARS-CoV-2. I en foreløbig undersøgelse viste en patient topspecifik IgM på dag 9 efter sygdomsdebut og skiftet til IgG i uge 2.25 Interessant nok viser sera fra 5 patienter med bekræftet COVID-19 en vis krydsreaktivitet med SARS-CoV, men ikke andre coronavirus . Desuden var alle sera fra patienter i stand til at neutralisere SARS-CoV-2 i en in vitro plaque-analyse, hvilket tyder på en mulig succesfuld opbygning af de humorale responser.(13) Hvorvidt kinetikken/titeren af ​​specifikt antistof korrelerer med sygdommens sværhedsgrad, mangler at blive undersøgt.(14)

I alvorlige tilfælde af coronavirus sygdom 2019 (COVID-19), udvikler viral lungebetændelse sig til respirationssvigt. Neutrofile ekstracellulære fælder (NET'er) er ekstracellulære væv af kromatin, mikrobicidproteiner og oxiderende enzymer, der frigives af neutrofiler for at indeholde infektioner. Men når de ikke er ordentligt reguleret, har NET potentiale til at udbrede inflammation og mikrovaskulær trombose - herunder i lungerne hos patienter med akut respiratorisk distress syndrom. Mens forhøjede niveauer af blodneutrofiler forudsiger værre udfald i COVID-19, er NETs rolle ikke blevet undersøgt. Vi rapporterer nu, at sera fra patienter med COVID-19 (n = 50 patienter, n = 84 prøver) har forhøjede niveauer af cellefrit DNA, myeloperoxidase(MPO)-DNA og citrullineret histon H3 (Cit-H3); de to sidstnævnte er meget specifikke markører for NET.(15)

Neutrofiler er sofistikerede celler, der er i stand til at tilpasse sig skiftende inflammation

Neutrofiler er ikke simple poser med enzymer, der sendes for at dræbe patogener, før de adaptive immunceller flytter ind. Faktisk er de i stand til at reagere på ændret inflammatorisk status; neutrofiler kan producere cytokiner, ændre deres genekspression under inflammation og gennem "aldring" og overleve betydeligt længere end traditionelt troet, med en undersøgelse, der placerer levetiden fra knoglemarv til 5,4 dage. Som en konsekvens heraf er neutrofiler i stand til at tilpasse sig ændrede forhold og styre andre cellers adfærd - en opgave, som de kan udføre med en vis sofistikering.

Der er en række murine modeller, hvor T-celleresponserne kan forværres ved at udtømme neutrofiler, hvilket antyder, at de har en regulerende rolle. Denne undertrykkelse af T-celle-responser af neutrofiler kræver tæt kontakt og udvikling af en immunologisk synapse - måske som mediatorerne troede ansvarlige, diffunderer reaktive oxygenarter og H2O2 ikke langt. Optagelse af apoptotiske eller nekrotiske neutrofiler inhiberer også DC-antigenpræsentation og co-stimulering, hvilket resulterer i reducerede T-celleresponser - en situation, som kan udnyttes af patogener. For eksempel fanger neutrofiler L. major og opsluges efterfølgende af DC'er, hvilket undertrykker antigenpræsentation og T-celle-priming

NE viste sig også at hæmme modning og funktion af dendritiske celler, herunder ekspression af de costimulerende molekyler CD40, CD80 og CD86. Inflammatorisk lungesekret hæmmer dendritiske cellers modning og funktion via neutrofil elastase.(16)

Elastasehæmmer ved covid-19 infektion:

1. Alvelestat blev udviklet til behandling af lungesygdomme som kronisk obstruktiv lungesygdom. Alevelestat virker ved at blokere visse proteiner i kroppen, der er ansvarlige for betændelse og skader på lungerne, som kan føre til KOL-symptomer.

   Alvelestat Elastasehæmmer stimulerer murine B-lymfocytdifferentiering til IgG- og IgA-producerende celler via immunoglobulinklasseskift og -inducering også kendt som isotypeskift, isotypisk kommutation eller klasseskiftrekombination (CSR), er en biologisk mekanisme, der ændrer en B-celles produktion af immunoglobulin fra en type til en anden, såsom fra isotypen IgM til isotypen IgG

   En undersøgelse viste, at udtømning af neutrofiler forbedrer produktionen af ​​slimhinde-IgA og IgG efter sublingual immunisering med Bacillus anthracis-ødemtoksin som adjuvans. Disse tidligere undersøgelser viste også, at der eksisterer en omvendt korrelation mellem antallet af neutrofiler og produktion af IgA af B-celler. Ved at bruge specifikke inhibitorer af elastase, behandlede vi, om elastaseaktiviteten af ​​neutrofil kunne være den faktor, der interfererer med produktionen af ​​IgA og muligvis andre immunoglobulinisotyper. Vi fandt, at murine splenocytter og mesenteriske lymfeknudeceller dyrket i 5 dage i nærvær af neutrofile elastasehæmmere udskilte højere niveauer af IgG og IgA end celler dyrket i fravær af inhibitorer, og også denne behandling øgede imidlertid hyppigheden af ​​CD4+ T-celler .(17) Som en slimhindemålrettet virus forventes SARS-CoV-2 at generere sekretorisk IgA (sIgA) og inducere stærk slimhindeimmunitet. Det har faktisk vist sig, at den slimhinde-anti-virale immunitet delvis skyldes de IgA-medierede interaktioner med de patogene mikroorganismer for at forhindre patogener i at klæbe til celleoverfladen.(17) Opreguleret IgA-produktion kan være resultatet af øgede niveauer af TGF-β og IL-10, der fremmer antistofskifte ved SARS-CoV-2-infektion.(17) En undersøgelse rapporterede, at udtømning af neutrofiler før systemisk injektion af vacciner øgede omfanget af antigenspecifikke CD4+ T-celleresponser og niveauerne af antigenspecifikke serum IgG-responser.(18)

   Alvelestat og Sivelestat blev fundet at stimulere AID-mRNA-syntese. NE-inhibitorerne inducerede også ekspression af BAFF, APRIL og IL-10 mRNA på en dosisafhængig måde. Neutrofil elastase og de beslægtede serinproteaser cathepsin G og proteinase 3 blev vist at regulere cytokinresponser gennem aktivering eller nedbrydning af cytokiner, cytokinreceptorer eller toll-lignende receptor.(18) Dette er i overensstemmelse med vores opdagelse af, at NE-hæmmere stimulerer IL-10-ekspression, men også BAFF og APRIL i kulturer af splenocytter. IL-10 blev rapporteret at regulere ekspression af AID til induktion af Ig CSR. (19), og det er veletableret, at IL-10 letter Ig-klasseskift til produktion af IgA (20). Disse data tyder således på, at NE-hæmmere stimulerer antistofproduktion gennem stimulering af AID og hæmning af aktivering/nedbrydning af cytokiner og cytokinreceptorer med elastase. NE blev også vist at hæmme modning og funktion af dendritiske celler, herunder ekspression af de costimulerende molekyler CD40, CD80 og CD86.(21). Tilstedeværelsen af ​​neutrofile inhibitorer kan således have fremmet modningen af ​​dendritiske celler og deres ekspression af BAFF og APRIL og måske costimulerende molekyler (dvs. CD40) til øget antistofproduktion. Selvom Alvelestat og Sivelestat er specifikke NE-hæmmere, bør man overveje, at de også kan hæmme relaterede elastase-lignende enzymer. I denne henseende blev aktiverede humane B-celler rapporteret at udtrykke en trypsinlignende serinprotease på celleoverfladen.(22) Afsluttende bemærkninger Det er tidligere vist, at neutrofile peptiddefensiner forstærker IgG, men ikke IgA-responser mod nasalt co-administrerede vaccineantigener.(23) Her har undersøgelsen vist, at serinproteaseaktiviteten af ​​neutrofil elastase, og muligvis anden serinprotease såsom B-celle-elastase, også deltager i reguleringen af ​​B-cellebiologi og adaptiv immunitet. Men i modsætning til neutrofile peptiddefensiner regulerer NE negativt differentiering af B-lymfocytter til IgG- og IgA-udskillende celler. Tilstedeværelsen af ​​AID forbedrer generelt antistof-baseret immunitet.(24).

   Høje neutrofiler hos COVID-19-inficerede patienter er i stand til at forårsage alvorlig skade på lungevævet ved at frigive toksiske proteaser og reaktive oxygenarter, hvis de ikke modsvares af antiproteaserne.

2. All-trans retinsyre (RA) har gavnlige virkninger, når det bruges i en række forskellige inflammatoriske hudtilstande. I en undersøgelse fandt forfatterne ud af, at RA hæmmede superoxidanionproduktion og proteolytisk enzymfrigivelse af neutrofiler fra mennesker og rotter. Samtidig fandt forfatterne ud af, at RA-behandlede neutrofiler var mindre i stand til end ubehandlede neutrofiler til at skade endotelceller i kultur, selvom adhæsionen af ​​de RA-behandlede neutrofiler til endotelcellemonolag ikke var formindsket. Hæmning af cytotoksicitet forekom over det samme koncentrationsområde, som inhiberede oxygenradikaldannelse og proteasefrigivelse. I yderligere undersøgelser blev det observeret, at forbehandling af endotelceller med RA-induceret resistens over for efterfølgende skade af aktiverede neutrofiler. Endelig viste in vivo undersøgelser, at forbehandling af rotter i 3 dage med RA (1-10 mg/dag, IP) reducerede graden af ​​skade i lungerne og huden efter behandling med bovint serumalbumin og antistoffer mod bovint serumalbumin i omvendt-passiv Arthus reaktion. Således kan RA modulere neutrofil-medieret endotelcelleskade ved en effekt på både neutrofilerne og deres målceller. Tilsammen kan disse virkninger ligge til grund for reduktionen i immunkompleksmedieret skade set hos forsøgsdyr. De gavnlige virkninger, som retinoider har i en række inflammatoriske hudsygdomme, kan ligeledes være en afspejling af deres virkninger på fysiologien af ​​både neutrofiler og endotelceller.

Oral retinylpalmitat eller retinsyre korrigerer slimhinde-IgA-responser mod en intranasal influenzavirusvaccine i mus med mangel på vitamin a. Retinoider hæmmer inflammatoriske TH17 T-celleresponser, fremmer regulatoriske T-celleresponser (Treg) og regulerer ekspression af toll-lignende receptorer (TLR'er).(57)

Så den primære investigator forventer, at retinsyre vil være effektiv i covid -19-patienter bedre end den anden neutrofile elastasehæmmer som Alvelestat, fordi Attia et al (2018) påviste, at Sivelestat reducerede sekretionen af ​​IgM på en dosisafhængig måde, IgM-typen af antistoffer som er meget vigtige ved viral neutralisering og på den anden side stopper retinsyre neutrofil-medieret endotelcelleskade ved en effekt på både neutrofilerne og deres målceller.

Second drug er Isotretinoin(13cis RA), og ATRA kan muligvis hæmme COVID 2019-infektion ved at inducere den antivirale immunitet, og dette diskuteres som følger:

En undersøgelse viste, at 13 cis retinoic anvendes til behandling af emfysem (emfysem er en lungesygdom, der forårsager åndenød), da et effektivt immunrespons mod virusinfektioner afhænger af aktiveringen af ​​cytotoksiske T-celler, der kan fjerne infektion ved at dræbe virusinficerede celler, at booste antallet og funktionen af ​​T-celler hos COVID-19-patienter er afgørende for vellykket bedring. En nylig undersøgelse rapporterede, at 82,1 % af COVID-19-tilfældene viste lave cirkulerende lymfocyttal. En CoV inficerer makrofager, og derefter præsenterer makrofager CoV-antigener til T-celler. Denne proces fører til T-celleaktivering og -differentiering, herunder produktionen af ​​cytokiner forbundet med de forskellige T-celleundersæt (Th17), efterfulgt af en massiv frigivelse af cytokiner til immunresponsamplifikation. Den fortsatte produktion af disse mediatorer på grund af viral persistens har en negativ effekt på NK og CD8 T-celleaktivering.(25)

Nylig undersøgelse af 522 COVID-patienter og 40 raske kontroller fra to hospitaler i Wuhan, Kina viste, at antallet af T-celler er negativt korreleret til serum IL-6-, IL-10- og TNF-α-koncentrationen, hvor patienter i tilbagegangsperiode viser reduceret IL-6 koncentrationer af IL-10 og TNF-a og genoprettede T-celletal. T-celler fra COVID-19-patienter har signifikant højere niveauer af det udmattede markørprogrammerede celledødsprotein (PD-1) sammenlignet med sundhedskontroller. Desuden kunne øget PD-1- og Tim-3-ekspression på T-celler ses, efterhånden som patienter udviklede sig fra prodromale til åbenlyst symptomatiske stadier, hvilket yderligere indikerer T-celleudmattelse. T-celleudmattelse er et progressivt tab af effektorfunktion på grund af langvarig antigenstimulering, karakteristisk for kroniske infektioner. Dendritisk cellehæmning er forbundet med udmattelse af CD8+ T-cellepolyfunktionalitet under kronisk hepatitis C-virusinfektion. CD8 T-celler producerer meget effektive mediatorer til at fjerne nCoV2019.(26)

Dendritiske celler (DC'er) spiller en nøglerolle i medfødte immun- og adaptive immunresponser. Som de stærkeste antigenpræsenterende celler i organismen stimulerer de effektivt aktiveringen af ​​T-lymfocytter og B-lymfocytter og kombinerer dermed medfødt og adaptiv immunitet. Umodne DC'er har stærk migrationsevne, og modne DC'er kan effektivt aktivere T-celler i det centrale led for opstart, regulering og vedligeholdelse af immunresponser. Således, når modningsprocessen af ​​DC'er er blokeret, påvirker det direkte initieringen af ​​efterfølgende adaptiv immunrespons. MERS-CoV-2 er i stand til at påvirke humane dendritiske celler og makrofager in vitro. Produktiv replikation af koronavirus i Mellemøstens respiratoriske syndrom i monocyt-afledte dendritiske celler modulerer medfødt immunrespons.(27)

En anden undersøgelse foreslog, at C-C kemokin receptor type 4 (CCR4) bidrager til T-celle lunge homing imprinting. Det blev fundet, at lunge-DC'er inducerer ekspressionen af ​​CCR4 på T-celler. Lunge DCs-aktiverede T-celler transporteres mere effektivt ind i lungerne og beskytter mod influenza mere effektivt sammenlignet med T-celler aktiveret af DC'er fra andre væv. Lim og kolleger foreslog, at CXCR4 spiller en rolle i CD8+ T-cellemigration til luftvejsvæv.(28)

Dendritisk cellehæmning er forbundet med udmattelse af CD8+ T-cellepolyfunktionalitet under kronisk hepatitis C-virusinfektion. CD8 T-celler producerer meget effektive mediatorer til at fjerne nCoV2019.(29)

Tilstedeværelse af RA i forskellige væv er meget vigtig for immuninduktion og bekæmpelse af virusinfektion, for eksempel er RA til stede i høje koncentrationer i tyndtarmen på grund af metabolisering af vitamin A i kosten af ​​tarmepitelceller. I dette lokale miljø aktiverer og primer RA dendritiske celler (DC'er) til at blive CD103+ DC'er, der producerer RA.3, 4CD103+ DC'er er migrerende celler, der aktiverer naive T-celler i mesenteriske lymfeknuder til at blive effektor-T-celler, der bidrager til både intestinal homeostase og immunitet.og også RA er et vigtigt signal, der inducerer IgA-producerende B-celler. Tarmsøgende T-celler og B-celler spiller væsentlige roller i at beskytte fordøjelseskanalen mod patogener.(30) Retinsyre (atRA) kan hæmme den spontane apoptose af aktiverede humane T-lymfocytter in vitro. 13-cis RA aktiverer Th2 cytokinproduktion Forbedret cirkulerende dendritiske celleantal.(40)

Så ifølge disse tidligere undersøgelser antyder hovedforskeren, at T-cellers lymfopeni og udmattelse kan være et resultat af dendritiske celler (DC'er) infektion og hæmning af MERS-CoV-2.

Retinsyre har dybtgående virkninger på cellulær proliferation og differentiering. Desuden er det blevet rapporteret, at ATRA udviser både antiinflammatoriske og immunregulerende virkninger. Nylige undersøgelser har vist, at FOXP3-ekspression og immunfunktionen af ​​Regulatory T-celler (Tregs) kan forstærkes af ATRA i immunsystemet hos både patienter og mic.13Retinsyre (RA) produceres af en række celletyper, herunder makrofager og dendritiske celler, som udtrykker retinale dehydrogenaser, der omdanner vitamin A til dets biologisk aktive hovedmetabolit, all-trans RA. All-trans RA binder til dets nukleare retinsyrereceptorer, der udtrykkes i lymfoide celler og fungerer som transkriptionsfaktorer for at regulere cellesøgning og differentiering. RA-produktion af CD103+ dendritiske celler og alveolære makrofager fungerer sammen med TGF-b for at fremme omdannelse af naive T-celler til Foxp3+ regulatoriske T-celler og derved opretholde slimhindetolerance.(50) Så hovedforsker forventer høj inducering af dendritiske celler (DC'er) ved retinsyrebehandling, hvilket vil føre til T-cellers aktivering og migration med mindre udmattelsesfænomen.

Forskere fra Wenzhou, Kina så på kliniske laboratoriefunktioner, herunder lipidniveauer hos patienter med COVID 19. De fandt dramatiske reduktioner i kolesterolniveauerne hos patienter inficeret med COVID 19 sammenlignet med raske kontroller. Undersøgelsen giver data, der tyder på, at kolesterolniveauet falder ret hurtigt i de tidlige stadier af infektionen og stiger, efterhånden som patienten begynder at komme sig. Derfor indikerer det, at kolesterol kan spille en vigtig rolle i at forsvare kroppen mod sådanne infektioner. Ifølge vores protokol, afhængigt af tidligere undersøgelser, viste hovedforskeren, at der er en stærk sammenhæng mellem immunsystem og kolesterolniveauer. :-

Cellulært kolesterol er en bestanddel af plasmamembranen og er også essentiel i celleproliferation. Regulering af intracellulære kolesterolniveauer er blevet foreslået som en mekanisme til at regulere T-celle- og makrofagproliferation. Intracellulært kolesterolniveau reguleres af to konkurrerende veje, kolesteroloptagelse og efflux, og ABCA1 spiller en stor rolle i kolesteroludstrømningsvejen. ATRA inducerer ABCA1-ekspression og ABCA1-afhængig kolesterol efflux i aktiverede primære humane CD4+ T-celler, hvilket antyder, at RA kunne påvirke T-cellefunktioner ved at regulere de cellulære kolesterolniveauer.(51) ATRA opregulerer kun ABCA1-ekspression i aktiverede CD4+ T-celler, hvilket indikerer, at induktion af ABCA1 af ATRA og 13 cis-retinsyre kan spille en vigtig rolle i immunrespons.

Retinsyre og lever X-receptoragonist hæmmer synergistisk HIV-infektion i CD4+ T-celler ved at opregulere ABCA1-medieret kolesteroludstrømning.(52)(53)

RA virker også direkte på makrofager på både slimhindesteder og andre immunologiske steder. AtRA modulerer peritoneal makrofagaktivering af endotoksin og IFN-γ ved at undertrykke TNF-produktion og nitrogenoxid (NO) syntese. Desuden hæmmer RA ekspressionen af ​​PGE2 og COX-2 og frigivelsen af ​​TNF, som induceres af bakterielt lipopolysaccharid ( LPS) i murine peritoneale makrofager.(54)

En undersøgelse rapporterede for nylig, at stoffet (ATRA) har forebyggende virkninger på lungefibrose ved at hæmme IL-6-afhængig proliferation og TGF-β1-afhængig transdifferentiering af lungefibroblaster. Også andre undersøgelser viste, at 13-cis-retinsyre og andre retinoidanaloger inhiberer IL-1-induceret IL-6-produktion, og at denne effekt er analog-specifik og, i det mindste delvist, transkriptionelt medieret. Denne effekt var dosisafhængig med en IC50 på 10(-7) M RA og signifikant hæmning blev noteret med doser af RA så lave som 10(-8) M. IL-10-produktion blev hæmmet af ATRA-administration.(55)

En undersøgelse viste, at TLR3(-/-), TLR4(-/-) og TRAM(-/-) mus er mere modtagelige for SARS-CoV end vildtype mus, men oplever kun forbigående vægttab uden dødelighed som reaktion på infektion. I modsætning hertil er mus, der mangler TLR3/TLR4-adapteren TRIF, meget modtagelige for SARS-CoV-infektion, hvilket viser øget vægttab, dødelighed, nedsat lungefunktion, øget lungepatologi og højere virale titre. Nye undersøgelser viste, at det høje niveau af IFN-α/β produceret fra TLR3-IRF3/IRF7-vejen og IFN-β er årsagen til inhibering af DENV-replikation. 13Cis retinsyre induceret signifikant opregulering af toll-lignende receptor 3 (TLR3), hvilket resulterer i et immunrespons på dsRNA-mellemprodukt, som delvist kan genereres under CoV-2-replikation. aktiveret til at producere type I IFN'er.(56)

.

Oral retinylpalmitat eller retinsyre korrigerer slimhinde-IgA-responser mod en intranasal influenzavirusvaccine i mus med mangel på vitamin a. Retinoider hæmmer inflammatoriske TH17 T-celleresponser, fremmer regulatoriske T-celleresponser (Treg) og regulerer ekspression af toll-lignende receptorer (TLR'er).(57) In vitro behandling af normale humane monocytter med all-trans retinsyre (ATRA) nedregulerer TLR-2 ekspression (58), men denne effekt er ikke undersøgt hos patienter behandlet med systemiske retinoider. Isotretinoin (13-cis retinsyre; 13-cis RA) er det eneste lægemiddel, der er i stand til at fremkalde en langvarig eller permanent remission af acne; mekanismerne, der fører til denne varige respons, er dog ukendte. I betragtning af TLR-2's rolle i initiering af immunresponser på P. acnes antog vi, at nedregulering af TLR-2 på monocytter og/eller induktionen af ​​Treg-responser in vivo kan repræsentere mekanismer, hvorved isotretinoin udøver sine langsigtede virkninger .

Isotretinoin(13cis RA) kan muligvis hæmme COVID 2019-indtrængen via nedregulering af ACE2, AT1-protein og Ang II-medieret intracellulær calciumfrigivelse snarere end hæmning af interleukin-6 (IL-6), og dette diskuteres som følger:

Mange forfattere misforstår forskellen mellem ARB'er, som blokerer ATR1-receptorer, og det hypoteserede lægemiddel, der kunne blokere COVID-19-bindingsstedet på ACE2-receptoren, som er totalt forskellig fra ATR1 og 2.

COVID-19-pandemien forårsaget af SARS-COV-2 har inficeret over 2.000.000 mennesker og forårsaget over 150.000 dødsfald.(59) Et nøgleværtscellulært protein, der kræves til virusindtrængning, er angiotensin-konverterende enzym 2 (ACE2), hvis ekspression er blevet påvist i mange væv, herunder alveolære epiteltype II-celler i lunger, mundslimhinde og tarm, hjerte, nyre, endotel og hud. ACE2-udtrykkende celler kan fungere som hjemmeceller og er tilbøjelige til SARS-CoV-2-infektion, da ACE2-receptor letter cellulær viral indtræden og replikation.(60) En undersøgelse viste, at patienter med hypertension og diabetes mellitus kan have højere risiko for SARS-CoV-2-infektion, da disse patienter ofte behandles med ACE-hæmmere (ACEI) eller angiotensin II type-I-receptorblokkere (ARB), som er blevet tidligere foreslået at øge ACE2-ekspression.(61) I en anden undersøgelse af Sinha et al, der analyserede et offentligt tilgængeligt Connectivity Map (CMAP) datasæt af præ/post transkriptomiske profiler til lægemiddelbehandling i cellelinjer for over 20.000 små molekyler, var isotretinoin den stærkeste nedregulator af ACE 2 receptorer. På den anden side fandt de 6 lægemidler i CMAP, som i øjeblikket undersøges i kliniske forsøg til behandling af COVID-19 (chloroquin, thalidomid, methylprednisolon, losartan, lopinavir og ritonavir, fra clinicaltrials.gov). ingen af ​​dem viste sig at ændre ACE2-ekspression signifikant (P>0,1) Desuden viste en anden undersøgelse, at isotretinoin er en potentiel papain-lignende protease (PLpro)-hæmmer, som er et protein kodet af SARS-CoV-2-gener og betragtes som et af de proteiner, der bør målrettes i COVID-19-behandling ved at udføre målbaseret virtuel ligandscreening. Som Principal Investigator diskuterede før, er (13cRA) den stærkeste nedregulator af ACE2.

Hovedforskeren forventer, at 13cRA kan hæmme eller nedsætte ACE2 ved direkte interaktion og binding med den transmembrane ACE2, hvilket tyder på dets terapeutiske potentiale til at forhindre indtrængen af ​​COVID 2019 til værtscellen.

Tidligere undersøgelser af det relaterede alvorlige akutte respiratoriske syndrom coronavirus (SARS-CoV) og SARS-CoV FP FP har vist, at calcium (Ca2+) spiller en vigtig rolle for fusogen aktivitet via en Ca2+-bindingslomme med konserveret glutaminsyre (E) og asparaginsyre (D) rester demonstrerede, at intracellulær Ca2+ øger MERS-CoV WT PPs-infektion med cirka to gange, og at E891 er en afgørende rest for Ca2+-interaktion. Elektronspinresonans afslørede, at denne forbedring kunne tilskrives Ca2+ stigende MERS-CoV FP-fusionsrelevant membranbestilling. Spændende nok viste isotermisk kalorimetrititrering, at MERS-CoV FP binder én Ca2+, i modsætning til SARS-CoV FP, der binder til to Ca2+ ioner.(62)

Angiotensin II øger den intracellulære calciumaktivitet i podocytter af den intakte glomerulus. L-type Ca2+-kanalblokkeren nicardipin påvirkede ikke den Ang II-medierede [Ca2+]-stigning, og det er blevet postuleret, at SARS-CoV-2-binding til ACE2 kan svække resterende ACE2-aktivitet, hvilket skævvrider ACE/ACE2-balancen til en tilstand på øget angiotensin II-aktivitet, der fører til pulmonal vasokonstriktion og inflammatorisk og oxidativ organskade, hvilket øger risikoen for akut lungeskade (ALI). AngII via AT1-receptorer opregulerer mange proinflammatoriske gener, såsom vaskulært celleadhæsionsmolekyle-1 (VCAM-1), intercellulært adhæsionsmolekyle-1 (ICAM-1), interleukin-6 (IL-6).30 men 13cis RA nedregulerede specifikt AT1-proteinet på en dosis- og tidsafhængig måde. Nedregulering af AT1-ekspressionen fører til reduceret AngII-medieret intracellulær calciumfrigivelse Ligesom receptornedregulering resulterede Behandling med 13cRA i en signifikant reduktion i AT1-mRNA.(63)

Endelig forventer hovedefterforskeren, at isotretinoin vil hjælpe med antistofinduktion mod COVID-19 ved at inducere forskellige typer antivirale immunfaktorer og også reducere COVID-19 hypermutation ved at blokere dets ACE2-receptorer og forhindre virussen i at trænge ind og replikere celler. dette vil give immunsystemet tid til at genkende COVID-19.