Aerozolowa terapia skojarzona kwasem all-trans-retinowym i izotretynoiną jako nowe leczenie indukujące przeciwciała neutralizujące u pacjentów zakażonych COVID-19 lepsze niż szczepionka: innowacyjne leczenie (Antibodies)

Jest to randomizowane (1:1:1), kontrolowane placebo, 2-tygodniowe badanie fazy 2, mające na celu ocenę bezpieczeństwa i tolerancji, a także mechanistycznego wpływu doustnego podawania silnego inhibitora neutrofili elastaza (wziewny kwas all trans retinowy i wziewna izotretynoina u osób zakażonych COVID-19

Niestety, wszystkie zaszczepione małpy leczone szczepionką oksfordzką znaną jako ChAdOx1 nCoV-19 przechodzą w Wielkiej Brytanii badania na ludziach. zainfekowany, gdy zostanie poddany prowokacji, co ocenia się na podstawie odzyskania genomowego RNA wirusa z wydzieliny z nosa” – powiedział dr William Haseltine, były profesor Harvard Medical School, który odegrał kluczową rolę w opracowaniu wczesnych metod leczenia HIV / AIDS. i generalnie przyszłe szczepienie przeciwko COVID-19, które polega na inaktywowanej szczepionce wirusowej, będzie ograniczone do osób zdrowych o silnej odporności i nie będzie podawane pacjentom z historią kontaktu z zakażeniem SARS-CoV-2 (dodatni w teście kwasu nukleinowego) . Oprócz antygenów wirusowych COVID-19 stymulują one tworzenie się przeciwciał typu IgM w fazie ostrej i IgG w fazie przewlekłej, co ułatwia wirusowi wejście i fuzję z zakażoną komórką poprzez wychwyt kompleksu wirus-IgG przez rodzinę receptorów Fc i późniejsza fuzja wirusa z komórkami prezentującymi antygen, takimi jak makrofagi, limfocyty B, monocyty za pośrednictwem rodziny FcR i śródbłonka naczyniowego za pośrednictwem noworodkowego receptora Fc (nFcR) zamiast przeciwciał indukowała aglutynację wirusa i jest to znane jako wzmocnienie zależne od przeciwciał (ADE) (2).

Istnieją różne hipotezy dotyczące przebiegu ADE i istnieje prawdopodobieństwo, że istnieje więcej niż jeden mechanizm. W jednym z takich szlaków niektóre komórki układu odpornościowego nie mają zwykłych receptorów na swojej powierzchni, których wirus używa do wniknięcia, ale mają receptory Fc, które wiążą się z jednym końcem przeciwciał. Wirus wiąże się z miejscem wiązania antygenu na drugim końcu i w ten sposób dostaje się do komórki odpornościowej i ją infekuje. Wirus dengi może wykorzystać ten mechanizm do infekowania ludzkich makrofagów, jeśli wcześniej doszło do zakażenia innym szczepem wirusa, co spowodowało, że zwykle łagodna infekcja wirusowa stała się zagrożeniem dla życia.(3) Nieustannym pytaniem w czasie pandemii COVID-19 jest to, czy – a jeśli tak, to w jakim stopniu – COVID-19 otrzymuje ADE z wcześniejszej infekcji innymi koronawirusami.

ADE może utrudniać opracowywanie szczepionek: ADE może utrudniać opracowywanie szczepionek, ponieważ szczepionka może powodować wytwarzanie przeciwciał, które za pośrednictwem ADE pogarszają chorobę, przed którą szczepionka ma chronić. Kandydaci na szczepionki przeciwko wirusowi dengi i wirusowi zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów (koci koronawirus) musieli zostać zatrzymani, ponieważ wywoływali ADE.(4)

ADE w zakażeniu koronawirusem może być spowodowane wysokim tempem mutacji genu kodującego białko spike (S). Dokładna analiza zmienności aminokwasów w białkach wirusa SARS-CoV-2, w tym białku S, wykazała, że ​​najmniej konserwatywne aminokwasy występują w najbardziej eksponowanych fragmentach białka S, w tym w domenie wiążącej receptor (RBD).(5) Opóźniona odpowiedź i wydzielanie przeciwciał po wystąpieniu objawów covid-19 jest odpowiedzialne za wzmocnienie zależne od przeciwciał (ADE)

Badanie pokazuje, że pierwszy dzień serokonwersji IgA miał miejsce 2 dni po wystąpieniu początkowych objawów, a pierwszy dzień serokonwersji IgM i IgG miał miejsce 5 dni po wystąpieniu. Odsetek przeciwciał dodatnich w 183 próbkach wynosił odpowiednio 98,9%, 93,4% i 95,1% dla IgA, IgM i IgG. Współczynnik serokonwersji dla IgA, IgM lub IgG wynosił 100% 32 dni po wystąpieniu objawów. Zgodnie z krzywą skumulowanej serokonwersji mediana czasu konwersji dla IgA, IgM i IgG wynosiła odpowiednio 13, 14 i 14 dni. (6)

Ponieważ ta odpowiedź immunologiczna pojawia się dopiero po pewnym czasie, testy na obecność przeciwciał będą ujemne u osób nowo zakażonych COVID-19, dlatego nie są one wykorzystywane do diagnozy.

„Jeśli to początek infekcji, nie wykryjesz jej, to coś, co rozwija się dopiero później” – dr Melanie Ott, wirusolog i immunolog z Gladstone Institutes oraz profesor na Uniwersytecie Kalifornijskim w San Francisco. (7)

Tak więc główny badacz spodziewa się, że opóźniona odpowiedź przeciwciał i opóźniona zmiana klas immunoglobulin są głównym powodem zakaźności i nieswoistości przeciwciał w wysoce zmutowanej infekcji covid-19

Przeciwciała IgG o wysokim powinowactwie mogą skutecznie rozwiązać infekcję Covid-19

Ponad 100 opracowywanych szczepionek przeciwko COVID-19 koncentruje się głównie na innej odpowiedzi immunologicznej: przeciwciałach. Białka te są wytwarzane przez komórki B i idealnie przyczepiają się do SARS-CoV-2 i zapobiegają przedostawaniu się go do komórek. Limfocyty T natomiast udaremniają infekcje na dwa różne sposoby. Pomocnicze limfocyty T pobudzają do działania limfocyty B i innych obrońców układu odpornościowego, podczas gdy zabójcze limfocyty T atakują i niszczą zainfekowane komórki. Nasilenie choroby może zależeć od siły odpowiedzi limfocytów T(1).

Badania nad odpowiedziami humoralnymi na infekcje były ukierunkowane głównie na wytwarzanie przeciwciał IgG o wysokim powinowactwie, które skutecznie usuwają infekcję. Jednak dobrze wiadomo, że humoralna odpowiedź immunologiczna na infekcję może być mieczem obosiecznym, który albo służy jako mechanizm ochronny w celu wyeliminowania infekcji, albo pogarsza uszkodzenie tkanki, np. Odpowiedź IgG powoduje śmiertelne ostre uszkodzenie płuc poprzez zniekształcenie odpowiedzi zapalnej w SARS.(8)

W przypadku infekcji dróg oddechowych, podczas gdy izotypy IgM i IgG były głównym celem charakteryzowania odporności, znacznie mniej uwagi poświęcono śluzówkowej i ogólnoustrojowej odpowiedzi IgA, która może odgrywać kluczową rolę w patogenezie choroby.(9),(11)

Wysoka liczba neutrofili w zakażeniu covid-19 może być przyczyną opóźnionej odpowiedzi przeciwciał i ciężkich powikłań

Humoralna odpowiedź immunologiczna, zwłaszcza wytwarzanie przeciwciał neutralizujących, pełni rolę ochronną, ograniczając infekcję w późniejszej fazie i zapobiegając ponownemu zakażeniu w przyszłości. W SARS-CoV epitopy obu komórek T i B zostały obszernie zmapowane pod kątem białek strukturalnych, białek S, N, M i E.(12) Zgłoszono ograniczone szczegóły serologiczne SARS-CoV-2. We wstępnym badaniu jeden pacjent wykazywał szczyt swoistej IgM w dniu 9 po wystąpieniu choroby i przejście na IgG do tygodnia 2.25. Co ciekawe, surowice od 5 pacjentów z potwierdzonym COVID-19 wykazują pewną reaktywność krzyżową z SARS-CoV, ale nie z innym koronawirusem . Ponadto wszystkie surowice od pacjentów były w stanie zneutralizować SARS-CoV-2 w teście łysinkowym in vitro, co sugeruje możliwy pomyślny montaż odpowiedzi humoralnych.(13) To, czy kinetyka/miano swoistych przeciwciał koreluje z ciężkością choroby, pozostaje do zbadania.(14)

W ciężkich przypadkach choroby koronawirusowej 2019 (COVID-19) wirusowe zapalenie płuc przechodzi w niewydolność oddechową. Zewnątrzkomórkowe pułapki neutrofili (NET) to pozakomórkowe sieci chromatyny, białek bakteriobójczych i enzymów utleniających, które są uwalniane przez neutrofile w celu powstrzymania infekcji. Jednakże, jeśli nie są odpowiednio uregulowane, NET mogą potencjalnie rozprzestrzeniać stany zapalne i zakrzepicę naczyń mikrokrążenia – w tym w płucach pacjentów z zespołem ostrej niewydolności oddechowej. Podczas gdy podwyższone poziomy neutrofili we krwi przewidują gorsze wyniki w COVID-19, rola NET nie została zbadana. Obecnie informujemy, że surowice od pacjentów z COVID-19 (n = 50 pacjentów, n = 84 próbki) mają podwyższone poziomy bezkomórkowego DNA, mieloperoksydazy (MPO)-DNA i cytrulinowanego histonu H3 (Cit-H3); dwa ostatnie są wysoce specyficznymi markerami NET.(15)

Neutrofile to wyrafinowane komórki zdolne do przystosowania się do zmieniającego się stanu zapalnego

Neutrofile nie są zwykłymi workami enzymów wysłanymi w celu zabicia patogenów, zanim wkroczą adaptacyjne komórki odpornościowe. W rzeczywistości są w stanie zareagować na zmieniony stan zapalny; neutrofile mogą wytwarzać cytokiny, zmieniać ekspresję swoich genów podczas stanu zapalnego i podczas „starzenia się” i przeżywać znacznie dłużej niż tradycyjnie sądzono, przy czym w jednym badaniu długość życia ze szpiku kostnego wynosiła 5,4 dnia. W rezultacie neutrofile są w stanie przystosować się do zmieniających się warunków i kierować zachowaniem innych komórek – zadanie, które mogą wykonywać przy pewnym wyrafinowaniu.

Istnieje wiele mysich modeli, w których odpowiedzi limfocytów T mogą być zaostrzone przez wyczerpanie neutrofili, co sugeruje, że pełnią one rolę regulacyjną. To tłumienie odpowiedzi limfocytów T przez neutrofile wymaga bliskiego kontaktu i rozwoju synapsy immunologicznej - być może, ponieważ mediatorzy uważali za odpowiedzialne, reaktywne formy tlenu i H2O2 nie dyfundują daleko. Wychwyt apoptotycznych lub nekrotycznych neutrofili również hamuje prezentację antygenu DC i kostymulację, co skutkuje zmniejszoną odpowiedzią komórek T - sytuację, którą mogą wykorzystać patogeny. Na przykład neutrofile wychwytują L. major, a następnie są pochłaniane przez DC, hamując prezentację antygenu i pobudzanie limfocytów T

Wykazano również, że NE hamuje dojrzewanie i funkcję komórek dendrytycznych, w tym ekspresję cząsteczek kostymulujących CD40, CD80 i CD86 Zapalne wydzieliny w płucach hamują dojrzewanie i funkcję komórek dendrytycznych poprzez elastazę neutrofilową.(16)

Inhibitor elastazy w zakażeniu covid-19 :

1. Alvelestat został opracowany jako lek na choroby płuc, takie jak przewlekła obturacyjna choroba płuc. Alelevelestat działa poprzez blokowanie pewnych białek w organizmie, które są odpowiedzialne za zapalenie i uszkodzenie płuc, które mogą prowadzić do objawów POChP.

   Alwelestat Inhibitor elastazy stymuluje różnicowanie mysich limfocytów B w komórki wytwarzające IgG i IgA poprzez przełączanie klas immunoglobulin i indukowanie, znane również jako przełączanie izotypów, komutacja izotypowa lub rekombinacja przełączania klas (CSR), jest mechanizmem biologicznym, który zmienia produkcję limfocytów B immunoglobuliny z jednego typu na inny, na przykład z izotypu IgM na izotyp IgG

   Badanie wykazało, że zmniejszenie liczby neutrofili poprawia wytwarzanie błon śluzowych IgA i IgG po podjęzykowej immunizacji toksyną obrzęku Bacillus anthracis jako adiuwantem. Te wcześniejsze badania wykazały również, że istnieje odwrotna korelacja między liczbą neutrofili a wytwarzaniem IgA przez limfocyty B. Używając specyficznych inhibitorów elastazy, zbadaliśmy, czy aktywność elastazy neutrofili może być czynnikiem zakłócającym wytwarzanie IgA i prawdopodobnie innych izotypów immunoglobulin. Stwierdziliśmy, że mysie splenocyty i komórki krezkowych węzłów chłonnych hodowane przez 5 dni w obecności inhibitorów elastazy neutrofilowej wydzielały wyższe poziomy IgG i IgA niż komórki hodowane bez inhibitorów, a także to traktowanie zwiększało częstość limfocytów T CD4+ .(17) Oczekuje się, że SARS-CoV-2, jako wirus ukierunkowany na błonę śluzową, będzie generował wydzielniczą IgA (sIgA) i indukował silną odporność śluzówkową. Rzeczywiście, wykazano, że odporność przeciwwirusowa błony śluzowej wynika częściowo z interakcji, w których pośredniczy IgA z patogennymi mikroorganizmami, aby zapobiec przyleganiu patogenów do powierzchni komórki.(17) Zwiększona produkcja IgA może być wynikiem zwiększonych poziomów TGF-β i IL-10, które sprzyjają przełączaniu przeciwciał w zakażeniu SARS-CoV-2.(17) Badanie wykazało, że zmniejszenie liczby neutrofili przed ogólnoustrojowym wstrzyknięciem szczepionki zwiększyło wielkość odpowiedzi limfocytów T CD4+ swoistych dla antygenu oraz poziom odpowiedzi IgG swoistych dla antygenu w surowicy.(18)

   Stwierdzono, że alwelestat i siwelestat stymulują syntezę mRNA AID. Inhibitory NE indukowały również ekspresję mRNA BAFF, APRIL i IL-10 w sposób zależny od dawki. Wykazano, że elastaza neutrofilowa i pokrewne proteazy serynowe, katepsyna G i proteinaza 3, regulują odpowiedzi cytokin poprzez aktywację lub degradację cytokin, receptorów cytokin lub receptora toll-podobnego.(18) Jest to zgodne z naszym odkryciem, że inhibitory NE stymulują ekspresję IL-10, ale także BAFF i APRIL w hodowlach splenocytów. Doniesiono, że IL-10 reguluje ekspresję AID dla indukcji Ig CSR. (19) i dobrze wiadomo, że IL-10 ułatwia zmianę klasy Ig w celu produkcji IgA (20). Zatem dane te sugerują, że inhibitory NE stymulują wytwarzanie przeciwciał poprzez stymulację AID i hamowanie aktywacji/degradacji cytokin i receptorów cytokin przez elastazę. Wykazano również, że NE hamuje dojrzewanie i funkcję komórek dendrytycznych, w tym ekspresję cząsteczek kostymulujących CD40, CD80 i CD86.(21). Zatem obecność inhibitorów neutrofili mogła sprzyjać dojrzewaniu komórek dendrytycznych i ich ekspresji BAFF i APRIL oraz być może cząsteczek kostymulujących (tj. CD40) w celu zwiększenia produkcji przeciwciał. Chociaż Alvelestat i Sivelestat są specyficznymi inhibitorami NE, należy wziąć pod uwagę, że mogą one również hamować pokrewne enzymy podobne do elastazy. Pod tym względem stwierdzono, że aktywowane ludzkie komórki B wykazują ekspresję trypsynopodobnej proteazy serynowej na powierzchni komórki.(22) Uwagi końcowe Wcześniej wykazano, że defensyny peptydów neutrofilowych wzmacniają odpowiedź IgG, ale nie IgA, na antygeny szczepionkowe podawane donosowo.(23) Tutaj badanie wykazało, że aktywność proteazy serynowej elastazy neutrofili i prawdopodobnie innej proteazy serynowej, takiej jak elastaza komórek B, również uczestniczy w regulacji biologii komórek B i odporności nabytej. Jednak w przeciwieństwie do defensyn peptydowych neutrofili, NE negatywnie reguluje różnicowanie limfocytów B w komórki wydzielające IgG i IgA. Obecność AID generalnie poprawia odporność opartą na przeciwciałach.(24).

   Wysoki poziom neutrofilów u pacjentów zakażonych COVID-19 może powodować poważne uszkodzenia tkanki płucnej poprzez uwalnianie toksycznych proteaz i reaktywnych form tlenu, jeśli nie są one zrównoważone przez antyproteazy.

2. Kwas all-trans-retinowy (RA) ma korzystne działanie, gdy jest stosowany w różnych stanach zapalnych skóry. W badaniu autorzy stwierdzili, że RZS hamuje produkcję anionów nadtlenkowych i uwalnianie enzymów proteolitycznych przez neutrofile ludzkie i szczurze. Jednocześnie autorzy stwierdzili, że neutrofile leczone RZS były mniej zdolne do uszkadzania komórek śródbłonka w hodowli niż nieleczone neutrofile, mimo że adhezja neutrofili traktowanych RZS do pojedynczych warstw komórek śródbłonka nie była zmniejszona. Hamowanie cytotoksyczności zachodziło w tym samym zakresie stężeń, które hamowały tworzenie rodników tlenowych i uwalnianie proteazy. W dodatkowych badaniach zaobserwowano, że wstępne traktowanie komórek śródbłonka indukowaną przez RZS odpornością na późniejsze uszkodzenie przez aktywowane neutrofile. Wreszcie, badania in vivo wykazały, że wstępne podawanie szczurom RZS przez 3 dni (1-10 mg/dobę, dootrzewnowo) zmniejszało stopień uszkodzenia płuc i skóry po leczeniu albuminą surowicy bydlęcej i przeciwciałami przeciwko albuminie surowicy bydlęcej w odwrotna pasywna reakcja Arthusa. Zatem RA może modulować uszkodzenie komórek śródbłonka, w którym pośredniczą neutrofile, poprzez wpływ zarówno na neutrofile, jak i na ich komórki docelowe. Razem efekty te mogą leżeć u podstaw zmniejszenia uszkodzeń wywołanych przez kompleksy immunologiczne obserwowanych u zwierząt doświadczalnych. Korzystne działanie retinoidów w różnych zapalnych chorobach skóry może również odzwierciedlać ich wpływ na fizjologię zarówno neutrofili, jak i komórek śródbłonka.

Doustny palmitynian retinylu lub kwas retinowy koryguje odpowiedzi śluzówkowe IgA na donosową szczepionkę przeciw wirusowi grypy u myszy z niedoborem witaminy A. Retinoidy hamują zapalne odpowiedzi limfocytów T TH17, promują odpowiedzi regulatorowych limfocytów T (Treg) i regulują ekspresję receptorów toll-podobnych (TLR).(57)

Tak więc główny badacz spodziewa się, że kwas retinowy będzie skuteczniejszy u pacjentów z COVID-19 niż inny inhibitor elastazy neutrofili, taki jak Alvelestat, ponieważ Attia i wsp. (2018) wykazali, że Sivelestat zmniejsza wydzielanie IgM w sposób zależny od dawki, przeciwciała, które są bardzo ważne w neutralizacji wirusa, az drugiej strony kwas retinowy zatrzymuje uszkodzenie komórek śródbłonka, w którym pośredniczą neutrofile, poprzez wpływ zarówno na neutrofile, jak i na komórki docelowe.

Sekonowanym lekiem jest izotretynoina (13cis RA), a ATRA może być w stanie zahamować infekcję COVID 2019 poprzez indukcję odporności przeciwwirusowej, co omówiono w następujący sposób:

Badanie wykazało, że retinol 13 cis jest stosowany w leczeniu rozedmy płuc (rozedma płuc jest stanem płuc powodującym duszność), ponieważ skuteczna odpowiedź immunologiczna przeciwko infekcjom wirusowym zależy od aktywacji cytotoksycznych limfocytów T, które mogą usuwać infekcję poprzez zabijanie zakażonych wirusem komórek , zwiększenie liczby i funkcji komórek T u pacjentów z COVID-19 ma kluczowe znaczenie dla pomyślnego powrotu do zdrowia. Niedawne badanie wykazało, że 82,1% przypadków COVID-19 wykazywało niską liczbę krążących limfocytów. CoV infekuje makrofagi, a następnie makrofagi prezentują antygeny CoV limfocytom T. Proces ten prowadzi do aktywacji i różnicowania komórek T, w tym produkcji cytokin związanych z różnymi podzbiorami komórek T (Th17), po czym następuje masowe uwalnianie cytokin w celu wzmocnienia odpowiedzi immunologicznej. Ciągłe wytwarzanie tych mediatorów z powodu przetrwania wirusa ma negatywny wpływ na aktywację limfocytów T NK i CD8.(25)

Niedawne badanie 522 pacjentów z COVID i 40 zdrowych osób z dwóch szpitali w Wuhan w Chinach wykazało, że liczba limfocytów T jest ujemnie skorelowana ze stężeniem IL-6, IL-10 i TNF-α w surowicy, przy czym pacjenci w okresie spadku wykazywali zmniejszoną IL-6 , IL-10 i TNF-α oraz przywrócono liczbę limfocytów T. Limfocyty T od pacjentów z COVID-19 mają znacznie wyższy poziom białka programowanej śmierci komórkowej (PD-1) markera wyczerpania w porównaniu z grupą kontrolną. Co więcej, wzrost ekspresji PD-1 i Tim-3 na komórkach T można było zaobserwować, gdy pacjenci przechodzili od stadiów prodromalnych do jawnie objawowych, co dodatkowo wskazuje na wyczerpanie komórek T. Wyczerpanie limfocytów T to postępująca utrata funkcji efektorowych z powodu przedłużonej stymulacji antygenem, charakterystyczna dla przewlekłych infekcji. Hamowanie komórek dendrytycznych wiąże się z wyczerpaniem wielofunkcyjności limfocytów T CD8+ podczas przewlekłego zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu C. Komórki T CD8 wytwarzają bardzo skuteczne mediatory do usuwania nCoV2019.(26)

Komórki dendrytyczne (DC) odgrywają kluczową rolę we wrodzonej i nabytej odpowiedzi immunologicznej. Jako najsilniejsze komórki prezentujące antygen w organizmie, skutecznie stymulują aktywację limfocytów T i limfocytów B, łącząc w ten sposób odporność wrodzoną i nabytą. Niedojrzałe DC mają silną zdolność migracji, a dojrzałe DC mogą skutecznie aktywować komórki T w centralnym ogniwie uruchamiania, regulacji i utrzymywania odpowiedzi immunologicznych. Tak więc zablokowanie procesu dojrzewania DC bezpośrednio wpływa na zapoczątkowanie późniejszej adaptacyjnej odpowiedzi immunologicznej. MERS-CoV-2 może wpływać in vitro na ludzkie komórki dendrytyczne i makrofagi. Produktywna replikacja bliskowschodniego koronawirusa zespołu oddechowego w komórkach dendrytycznych pochodzących z monocytów moduluje wrodzoną odpowiedź immunologiczną.(27)

W innym badaniu zaproponowano, że receptor C-C chemokin typu 4 (CCR4) przyczynia się do imprintingu komórek T w płucach. Stwierdzono, że DC płuc indukują ekspresję CCR4 na limfocytach T. Limfocyty T aktywowane przez DC w płucach wydajniej przemieszczają się do płuc i skuteczniej chronią przed grypą w porównaniu z komórkami T aktywowanymi przez DC z innych tkanek. Lim i współpracownicy zasugerowali, że CXCR4 odgrywa rolę w migracji limfocytów T CD8+ do tkanek dróg oddechowych.(28)

Hamowanie komórek dendrytycznych wiąże się z wyczerpaniem wielofunkcyjności limfocytów T CD8+ podczas przewlekłego zakażenia wirusem zapalenia wątroby typu C. Komórki T CD8 wytwarzają bardzo skuteczne mediatory do usuwania nCoV2019.(29)

Obecność RZS w różnych tkankach jest bardzo ważna dla indukcji odporności i zwalczania infekcji wirusowych, na przykład RZS występuje w wysokich stężeniach w jelicie cienkim z powodu metabolizowania witaminy A w diecie przez komórki nabłonka jelit. W tym lokalnym środowisku RZS aktywuje i pobudza komórki dendrytyczne (DC), aby stały się CD103+ DC, które wytwarzają RA.3, 4CD103+ DC to komórki migrujące, które aktywują naiwne limfocyty T w krezkowych węzłach chłonnych, aby stały się efektorowymi komórkami T, które przyczyniają się zarówno do homeostazy jelitowej, jak i immunitet.i również RA jest ważnym sygnałem, który indukuje komórki B wytwarzające IgA. Zasiedlające jelita limfocyty T i komórki B odgrywają zasadniczą rolę w ochronie przewodu pokarmowego przed patogenami.(30) Kwas retinowy (atRA) może hamować spontaniczną apoptozę aktywowanych ludzkich limfocytów T in vitro. 13-cis RA aktywuje produkcję cytokin Th2 Zwiększona liczba krążących komórek dendrytycznych.(40)

Tak więc, zgodnie z tymi wcześniejszymi badaniami, główny badacz sugeruje, że limfopenia i wyczerpanie limfocytów T mogą być spowodowane infekcją komórek dendrytycznych (DC) i hamowaniem przez MERS-CoV-2.

Kwas retinowy ma głęboki wpływ na proliferację i różnicowanie komórek. Ponadto doniesiono, że ATRA wykazuje zarówno działanie przeciwzapalne, jak i immunoregulacyjne. Ostatnie badania wykazały, że ekspresja FOXP3 i funkcja immunologiczna regulatorowych limfocytów T (Tregs) mogą być wzmocnione przez ATRA w układzie odpornościowym zarówno pacjentów, jak i mic.13Kwas retinowy (RA) jest wytwarzany przez wiele typów komórek, w tym makrofagi i komórki dendrytyczne, które wyrażają dehydrogenazy siatkówkowe, które przekształcają witaminę A w jej główny biologicznie aktywny metabolit, all-trans RA. All-trans RA wiąże się z jądrowymi receptorami kwasu retinowego, które ulegają ekspresji w komórkach limfoidalnych i działają jako czynniki transkrypcyjne regulujące zasiedlanie i różnicowanie komórek. Wytwarzanie RZS przez komórki dendrytyczne CD103+ i makrofagi pęcherzykowe współdziała z TGF-b w celu promowania konwersji naiwnych limfocytów T w regulatorowe limfocyty T Foxp3+, a tym samym utrzymania tolerancji błony śluzowej.(50) Tak więc główny badacz spodziewa się silnej indukcji komórek dendrytycznych (DC) przez traktowanie kwasem retinowym, co doprowadzi do aktywacji i migracji limfocytów T przy mniejszym zjawisku wyczerpania.

Naukowcy z Wenzhou w Chinach przyjrzeli się cechom laboratoriów klinicznych, w tym poziomom lipidów u pacjentów z COVID 19. Odkryli dramatyczne obniżenie poziomu cholesterolu u pacjentów zakażonych COVID 19 w porównaniu ze zdrowymi kontrolami. Badanie dostarcza danych sugerujących, że poziom cholesterolu spada dość szybko we wczesnych stadiach infekcji i wzrasta, gdy pacjent zaczyna wracać do zdrowia. Tym samym wskazując, że cholesterol może odgrywać ważną rolę w obronie organizmu przed takimi infekcjami Zgodnie z naszym protokołem, w oparciu o wcześniejsze badania, główny badacz wykazał, że istnieje silna zależność między układem odpornościowym a poziomem cholesterolu. :-

Cholesterol komórkowy jest składnikiem błony plazmatycznej i jest również niezbędny w proliferacji komórek. Zaproponowano regulację wewnątrzkomórkowego poziomu cholesterolu jako mechanizm regulujący proliferację limfocytów T i makrofagów. Poziom cholesterolu wewnątrzkomórkowego jest regulowany przez dwa konkurujące ze sobą szlaki, wychwyt i wypływ cholesterolu, a ABCA1 odgrywa główną rolę w szlaku wypływu cholesterolu. ATRA indukuje ekspresję ABCA1 i zależny od ABCA1 wypływ cholesterolu w aktywowanych pierwotnych ludzkich limfocytach T CD4+, co sugeruje, że RZS może wpływać na funkcje limfocytów T poprzez regulację poziomów cholesterolu w komórkach.(51) ATRA zwiększa ekspresję ABCA1 tylko w aktywowanych limfocytach T CD4+, co wskazuje, że indukcja ABCA1 przez ATRA i kwas 13 cis retinowy może odgrywać ważną rolę w odpowiedzi immunologicznej.

Kwas retinowy i agonista receptora wątrobowego X synergistycznie hamują infekcję HIV w limfocytach T CD4+ poprzez regulację w górę wypływu cholesterolu za pośrednictwem ABCA1.(52)(53)

RA działa również bezpośrednio na makrofagi zarówno w miejscach śluzówki, jak i innych miejscach immunologicznych. AtRA moduluje aktywację makrofagów otrzewnowych przez endotoksyny i IFN-γ poprzez hamowanie produkcji TNF i syntezy tlenku azotu (NO). Ponadto, AtRA hamuje ekspresję PGE2 i COX-2 oraz uwalnianie TNF, które są indukowane przez bakteryjny lipopolisacharyd ( LPS) w mysich makrofagach otrzewnowych.(54)

W niedawno przeprowadzonym badaniu wykazano, że substancja (ATRA) ma zapobiegawczy wpływ na zwłóknienie płuc poprzez hamowanie zależnej od IL-6 proliferacji i różnicowania trans zależnego od TGF-β1 fibroblastów płuc. Również inne badania wykazały, że kwas 13-cis-retinowy i inne analogi retinoidów hamują wytwarzanie IL-6 indukowane przez IL-1 i że efekt ten jest specyficzny dla analogu i przynajmniej częściowo pośredniczy w transkrypcji. Efekt ten był zależny od dawki przy IC50 wynoszącym 10(-7) M RA i znaczące hamowanie odnotowano przy dawkach RA tak niskich jak 10(-8) M. Wytwarzanie IL-10 było hamowane przez podawanie ATRA.(55)

Badanie wykazało, że myszy TLR3(-/-), TLR4(-/-) i TRAM(-/-) są bardziej podatne na SARS-CoV niż myszy typu dzikiego, ale doświadczają jedynie przejściowej utraty wagi bez śmiertelności w odpowiedzi na infekcja. Natomiast myszy z niedoborem adaptera TLR3 / TLR4 TRIF są bardzo podatne na zakażenie SARS-CoV, wykazując zwiększoną utratę masy ciała, śmiertelność, zmniejszoną czynność płuc, zwiększoną patologię płuc i wyższe miana wirusa. Nowe badania wykazały, że wysoki poziom IFN-α/β wytwarzanego ze szlaku TLR3-IRF3/IRF7 oraz IFN-β jest przyczyną hamowania replikacji DENV. Kwas retinowy 13Cis indukował znaczną regulację w górę receptora toll-podobnego 3 (TLR3), co skutkowało odpowiedzią immunologiczną na pośredni dsRNA, który może być częściowo generowany podczas replikacji CoV-2 TLR3 uczulony przez dsRNA i kaskady szlaków sygnałowych (odpowiednio aktywacja IRF i NFκB) aktywowany do produkcji IFN typu I.(56)

.

Doustny palmitynian retinylu lub kwas retinowy koryguje odpowiedzi śluzówkowe IgA na donosową szczepionkę przeciw wirusowi grypy u myszy z niedoborem witaminy A. Retinoidy hamują zapalne odpowiedzi limfocytów T TH17, promują odpowiedzi regulatorowych limfocytów T (Treg) i regulują ekspresję receptorów toll-podobnych (TLR).(57) Leczenie in vitro normalnych ludzkich monocytów kwasem all-trans-retinowym (ATRA) obniża ekspresję TLR-2 (58), ale tego efektu nie badano u pacjentów leczonych układowymi retinoidami. Izotretynoina (kwas 13-cis retinowy; 13-cis RA) jest jedynym lekiem zdolnym do wywołania długotrwałej lub trwałej remisji trądziku; jednak mechanizmy prowadzące do tej trwałej odpowiedzi są nieznane. Biorąc pod uwagę rolę TLR-2 w inicjowaniu odpowiedzi immunologicznej na P. acnes, postawiliśmy hipotezę, że obniżenie poziomu TLR-2 na monocytach i/lub indukcja odpowiedzi Treg in vivo może reprezentować mechanizmy, dzięki którym izotretynoina wywiera swoje długoterminowe efekty .

Izotretynoina (13cis RA) może być w stanie hamować wejście COVID 2019 poprzez regulację w dół ACE2, białka AT1 i wewnątrzkomórkowego uwalniania wapnia, w którym pośredniczy Ang II, zamiast hamowania interleukiny-6 (IL-6), co omówiono w następujący sposób:

Wielu autorów błędnie rozumie różnicę między ARB, które blokują receptory ATR1, a hipotetycznym lekiem, który mógłby blokować miejsce wiązania COVID-19 na receptorze ACE2, który jest zupełnie inny niż ATR1 i 2.

Pandemia COVID-19 spowodowana przez SARS-COV-2 zainfekowała ponad 2 000 000 osób, powodując ponad 150 000 zgonów.(59) Kluczowym białkiem komórkowym gospodarza wymaganym do wniknięcia wirusa jest enzym konwertujący angiotensynę 2 (ACE2), którego ekspresję wykazano w wielu tkankach, w tym w komórkach nabłonka pęcherzyków płucnych typu II w płucach, błonie śluzowej jamy ustnej i jelitach, sercu, nerkach, śródbłonku i skórze. Komórki wykazujące ekspresję ACE2 mogą działać jak komórki domowe i są podatne na zakażenie SARS-CoV-2, ponieważ receptor ACE2 ułatwia wnikanie i replikację wirusa komórkowego.(60) Badanie wykazało, że pacjenci z nadciśnieniem i cukrzycą mogą być bardziej narażeni na zakażenie SARS-CoV-2, ponieważ ci pacjenci są często leczeni inhibitorami ACE (ACEI) lub blokerami receptora angiotensyny II typu I (ARB), które zostały wcześniej sugerowano zwiększenie ekspresji ACE2.(61) W innym badaniu przeprowadzonym przez Sinha i wsp., którzy przeanalizowali publicznie dostępny zestaw danych Connectivity Map (CMAP) profili przed/potranskryptomicznych do leczenia farmakologicznego w liniach komórkowych dla ponad 20 000 małych cząsteczek, izotretynoina była najsilniejszym regulatorem w dół receptorów ACE 2. Z drugiej strony znaleźli 6 leków w CMAP, które są obecnie badane w badaniach klinicznych pod kątem leczenia COVID-19 (chlorochina, talidomid, metyloprednizolon, losartan, lopinawir i rytonawir, z Clinicaltrials.gov), żaden z nich nie zmienił znacząco ekspresji ACE2 (P>0,1) Co więcej, inne badanie wykazało, że izotretynoina jest potencjalnym inhibitorem proteazy papainopodobnej (PLpro), która jest białkiem kodowanym przez geny SARS-CoV-2 i jest uważana za jedno z białek, które powinny być celem leczenia COVID-19 poprzez wykonywanie wirtualnych skrining ligandów. Jak główny badacz omówił to wcześniej, (13cRA) jest najsilniejszym regulatorem w dół ACE2.

Główny badacz spodziewa się, że 13cRA może hamować lub osłabiać ACE2 poprzez bezpośrednią interakcję i wiązanie z transbłonowym ACE2, co sugeruje jego potencjał terapeutyczny w zapobieganiu wnikaniu COVID 2019 do komórki gospodarza.

Poprzednie badania nad powiązanym koronawirusem zespołu ostrej niewydolności oddechowej (SARS-CoV) i SARS-CoV FP FP wykazały, że wapń (Ca2+) odgrywa ważną rolę w aktywności fuzogennej poprzez kieszeń wiążącą Ca2+ z konserwowanym kwasem glutaminowym (E) i kwasem asparaginowym (D) pozostałości wykazały, że wewnątrzkomórkowy Ca2+ zwiększa infekcję MERS-CoV WT PP około dwukrotnie i że E891 jest kluczową resztą dla interakcji Ca2+. Rezonans spinowy elektronów ujawnił, że to wzmocnienie można przypisać zwiększonemu uporządkowaniu błon MERS-CoV FP związanemu z fuzją Ca2+. Co ciekawe, izotermiczne miareczkowanie kalorymetryczne wykazało, że MERS-CoV FP wiąże jeden Ca2+, w przeciwieństwie do SARS-CoV FP, który wiąże się z dwoma jonami Ca2+.(62)

Angiotensyna II zwiększa wewnątrzkomórkową aktywność wapnia w podocytach nienaruszonego kłębuszka. Nikardypina, bloker kanału Ca2+ typu L, nie wpływała na wzrost [Ca2+] za pośrednictwem Ang II i postulowano, że wiązanie SARS-CoV-2 z ACE2 może osłabiać resztkową aktywność ACE2, wypaczając równowagę ACE/ACE2 do stanu podwyższona aktywność angiotensyny II prowadząca do skurczu naczyń płucnych oraz zapalnych i oksydacyjnych uszkodzeń narządów, co zwiększa ryzyko ostrego uszkodzenia płuc (ALI). AngII poprzez receptory AT1 reguluje w górę wiele genów prozapalnych, takich jak cząsteczka adhezji komórek naczyniowych-1 (VCAM-1), cząsteczka adhezji międzykomórkowej-1 (ICAM-1), interleukina-6 (IL-6).30 ale 13cis RA specyficznie obniżał poziom białka AT1 w sposób zależny od dawki i czasu. Obniżenie ekspresji AT1 prowadzi do zmniejszenia wewnątrzkomórkowego uwalniania wapnia za pośrednictwem AngII. Podobnie w przypadku obniżenia poziomu receptora, leczenie 13cRA skutkowało znaczną redukcją mRNA AT1.(63)

Wreszcie główny badacz spodziewa się, że izotretynoina pomoże w indukcji przeciwciał przeciwko COVID-19 poprzez indukcję różnych typów przeciwwirusowych czynników odpornościowych, a także zmniejszenie hipermutacji COVID-19 poprzez blokowanie jego receptorów ACE2 i zapobieganie wnikaniu wirusa do komórek i replikacji oraz da to układowi odpornościowemu czas na rozpoznanie COVID-19.