Аэрозольная комбинированная терапия полностью транс-ретиноевой кислотой и изотретиноином как новое средство для индукции нейтрализующих антител у пациентов, инфицированных COVID-19, лучше, чем вакцина: инновационное лечение (Antibodies)

Это фаза 2, рандомизированное (1:1:1), плацебо-контролируемое, 2-недельное исследование для подтверждения концепции для оценки безопасности и переносимости, а также механистического эффекта перорального введения мощного ингибитора нейтрофилов. эластаза (вдыхаемая полностью транс-ретиноевая кислота и вдыхаемый изотретиноин у субъектов, инфицированных COVID-19

К сожалению, все вакцинированные обезьяны, получавшие оксфордскую вакцину, известную как ChAdOx1 nCoV-19, проходят испытания на людях в Великобритании. инфицированы при заражении, судя по извлечению геномной РНК вируса из носовых выделений», — сказал доктор Уильям Хазелтин, бывший профессор Гарвардской медицинской школы, сыгравший ключевую роль в разработке ранних методов лечения ВИЧ/СПИДа. и в целом будущая вакцинация против COVID-19, которая зависит от инактивированной вирусной вакцины, будет ограничена здоровыми людьми с сильным иммунитетом и не будет проводиться пациентам с историей контакта с инфекцией SARS-CoV-2 (положительный результат теста на нуклеиновые кислоты) . В дополнение к вирусным антигенам COVID-19 стимулируют образование антител типа IgM в острой фазе и типа IgG в хронической фазе, что облегчает проникновение вируса и слияние с инфицированной клеткой за счет поглощения комплекса вирус-IgG через семейство рецепторов Fc и более позднее слияние вируса с антигенпрезентирующими клетками, такими как макрофаги, В-клетки, моноциты через семейство FcR и эндотелий сосудов через неонатальный Fc-рецептор (nFcR) вместо антител, индуцировало вирусную агглютинацию, и это известно как антителозависимое усиление (ADE) (2).

Существуют различные гипотезы о том, как происходит ADE, и есть вероятность, что существует более одного механизма. В одном из таких путей у некоторых клеток иммунной системы отсутствуют обычные рецепторы на их поверхности, которые вирус использует для проникновения, но у них есть рецепторы Fc, которые связываются с одним концом антител. Вирус связывается с антигенсвязывающим участком на другом конце и, таким образом, проникает в иммунную клетку и инфицирует ее. Вирус денге может использовать этот механизм для заражения макрофагов человека, если ранее была инфекция другим штаммом вируса, в результате чего обычно легкая вирусная инфекция становится опасной для жизни. (3) Постоянный вопрос в связи с пандемией COVID-19 заключается в том, получает ли COVID-19 ADE от предшествующего заражения другими коронавирусами, и если да, то в какой степени.

ADE может препятствовать разработке вакцины: ADE может препятствовать разработке вакцины, поскольку вакцина может вызвать выработку антител, которые через ADE усугубляют заболевание, от которого предназначена вакцина. Вакцины-кандидаты против вируса денге и вируса инфекционного перитонита кошек (кошачий коронавирус) пришлось остановить, потому что они вызывали ADE. (4)

ADE при коронавирусной инфекции может быть вызван высокой частотой мутаций гена, кодирующего белок шипа (S). Тщательный анализ вариабельности аминокислот в белках вируса SARS-CoV-2, включая S-белок, показал, что наименее консервативные аминокислоты находятся в наиболее открытых фрагментах S-белка, включая рецептор-связывающий домен (RBD) (5). Отсроченный ответ и секреция антител после появления симптомов covid-19 ответственны за антителозависимое усиление (ADE)

Исследование показывает, что первый день сероконверсии IgA наступил через 2 дня после появления начальных симптомов, а первый день сероконверсии IgM и IgG - через 5 дней после появления. Положительный уровень антител в 183 образцах составил 98,9%, 93,4% и 95,1% для IgA, IgM и IgG соответственно. Уровень сероконверсии для IgA, IgM или IgG составил 100% через 32 дня после появления симптомов. Согласно кумулятивной кривой сероконверсии среднее время конверсии для IgA, IgM и IgG составило 13, 14 и 14 дней соответственно. (6)

Поскольку этот иммунный ответ проявляется через некоторое время, тесты на антитела будут отрицательными для тех, кто недавно заразился COVID-19, поэтому они не используются для диагностики.

«Если это начало инфекции, вы не подхватываете ее, это то, что развивается позже», — говорит доктор Мелани Отт, вирусолог и иммунолог из Института Гладстона и профессор Калифорнийского университета в Сан-Франциско. (7)

Таким образом, главный исследователь ожидает, что отсроченный ответ антител и отсроченное переключение класса иммуноглобулина являются основной причиной инфекционности и неспецифичности антител при высокомутантной инфекции covid-19.

Высокоаффинные антитела IgG могут эффективно бороться с инфекцией Covid-19

Более 100 разрабатываемых вакцин против COVID-19 в основном сосредоточены на другом иммунном ответе: антителах. Эти белки вырабатываются В-клетками и идеально фиксируются на SARS-CoV-2 и предотвращают его проникновение в клетки. Т-клетки, напротив, предотвращают инфекции двумя разными способами. Т-клетки-хелперы побуждают к действию В-клетки и других иммунных защитников, тогда как Т-клетки-киллеры нацелены на инфицированные клетки и уничтожают их. Тяжесть заболевания может зависеть от силы этих Т-клеточных ответов (1).

Исследования гуморальных реакций на инфекции в основном были направлены на выработку высокоаффинных IgG-антител, которые эффективно устраняют инфекцию. Однако хорошо известно, что гуморальный иммунный ответ на инфекцию может быть обоюдоострым мечом, который либо служит защитным механизмом для устранения инфекции, либо усугубляет повреждение тканей, например, Реакция IgG вызывает фатальное острое повреждение легких, искажая реакцию, разрешающую воспаление, при SARS (8).

В случае респираторной инфекции, в то время как изотипы IgM и IgG были основным акцентом при характеристике иммунитета, реакциям слизистых оболочек и системным IgA, которые могут играть критическую роль в патогенезе заболевания, уделялось гораздо меньше внимания (9), (11).

Высокий уровень нейтрофилов при инфекции covid-19 может быть причиной замедленного ответа антител и тяжелых осложнений

Гуморальный иммунный ответ, особенно выработка нейтрализующих антител, играет защитную роль, ограничивая инфекцию на более поздних стадиях и предотвращая повторное инфицирование в будущем. В случае SARS-CoV эпитопы как Т-, так и В-клеток были тщательно картированы для структурных белков, белков S, N, M и E. (12) Сообщалось об ограниченных деталях серологии SARS-CoV-2. В предварительном исследовании у одного пациента был обнаружен пик специфического IgM на 9-й день после начала заболевания и переход на IgG к 2-й неделе. Интересно, что сыворотки 5 пациентов с подтвержденным COVID-19 демонстрируют некоторую перекрестную реактивность с SARS-CoV, но не с другим коронавирусом. . Кроме того, все сыворотки пациентов были способны нейтрализовать SARS-CoV-2 в анализе бляшек in vitro, что свидетельствует о возможном успешном развитии гуморальных реакций (13). Вопрос о том, коррелирует ли кинетика/титр специфических антител с тяжестью заболевания, еще предстоит выяснить. (14)

В тяжелых случаях коронавирусной болезни 2019 (COVID-19) вирусная пневмония прогрессирует до дыхательной недостаточности. Нейтрофильные внеклеточные ловушки (NET) представляют собой внеклеточные сети хроматина, микробицидных белков и окислительных ферментов, которые высвобождаются нейтрофилами для сдерживания инфекций. Однако при отсутствии надлежащего регулирования НЭО могут способствовать распространению воспаления и микроваскулярного тромбоза, в том числе в легких пациентов с острым респираторным дистресс-синдромом. Хотя повышенные уровни нейтрофилов в крови предсказывают худшие исходы при COVID-19, роль НЭО не исследовалась. Теперь мы сообщаем, что сыворотки пациентов с COVID-19 (n = 50 пациентов, n = 84 образца) имеют повышенные уровни внеклеточной ДНК, миелопероксидазы (МПО)-ДНК и цитруллинированного гистона H3 (Cit-H3); последние два являются высокоспецифичными маркерами NET (15).

Нейтрофилы — сложные клетки, способные адаптироваться к изменяющемуся воспалению

Нейтрофилы — это не просто набор ферментов, посланных для уничтожения патогенов до того, как в них войдут адаптивные иммунные клетки. Фактически, они способны реагировать на измененный воспалительный статус; нейтрофилы могут продуцировать цитокины, изменять экспрессию своих генов во время воспаления и во время «старения» и выживать значительно дольше, чем традиционно считалось: в одном исследовании продолжительность жизни из костного мозга составила 5,4 дня. Как следствие, нейтрофилы способны приспосабливаться к меняющимся условиям и управлять поведением других клеток — задача, которую они могут выполнять с некоторой сложностью.

Существует ряд мышиных моделей, в которых ответы Т-клеток могут усугубляться истощением нейтрофилов, что подразумевает, что они играют регулирующую роль. Это подавление ответа Т-клеток нейтрофилами требует тесного контакта и развития иммунологического синапса - возможно, поскольку медиаторы считали ответственными, активные формы кислорода и H2O2 не диффундируют далеко. Поглощение апоптотических или некротических нейтрофилов также ингибирует презентацию DC-антигена и костимуляцию, что приводит к снижению Т-клеточного ответа — ситуации, которую могут использовать патогены. Например, нейтрофилы захватывают L. major и впоследствии поглощаются ДК, подавляя презентацию антигена и примирование Т-клеток.

Также было показано, что НЭ ингибирует созревание и функцию дендритных клеток, включая экспрессию костимулирующих молекул CD40, CD80 и CD86. Воспалительные выделения легких ингибируют созревание и функцию дендритных клеток посредством нейтрофильной эластазы.(16)

Ингибитор эластазы при инфекции covid-19:

1. Альвелестат был разработан для лечения заболеваний легких, таких как хроническая обструктивная болезнь легких. Alevelestat работает, блокируя определенные белки в организме, которые ответственны за воспаление и повреждение легких, что может привести к симптомам ХОБЛ.

   Альвелестат Ингибитор эластазы стимулирует дифференцировку мышиных В-лимфоцитов в IgG- и IgA-продуцирующие клетки посредством переключения класса иммуноглобулина и индукции, также известной как переключение изотипа, изотипическая коммутация или рекомбинация переключения класса (CSR), представляет собой биологический механизм, который изменяет продукцию В-клеток иммуноглобулина от одного типа к другому, например, от изотипа IgM к изотипу IgG

   Исследование показало, что истощение нейтрофилов улучшает выработку слизистых IgA и IgG после сублингвальной иммунизации токсином отека Bacillus anthracis в качестве адъюванта. Эти прошлые исследования также показали, что существует обратная корреляция между количеством нейтрофилов и продукцией IgA В-клетками. Используя специфические ингибиторы эластазы, мы решили, может ли эластазная активность нейтрофилов быть фактором, который мешает продукции IgA и, возможно, других изотипов иммуноглобулинов. Мы обнаружили, что мышиные спленоциты и клетки брыжеечных лимфатических узлов, культивированные в течение 5 дней в присутствии ингибиторов нейтрофильной эластазы, секретировали более высокие уровни IgG и IgA, чем клетки, культивируемые в отсутствие ингибиторов, а также, однако, эта обработка увеличивала частоту CD4+ Т-клеток. .(17) Ожидается, что в качестве вируса, нацеленного на слизистые оболочки, SARS-CoV-2 будет генерировать секреторный IgA (sIgA) и индуцировать сильный иммунитет слизистых оболочек. Действительно, было показано, что противовирусный иммунитет слизистых оболочек частично является результатом IgA-опосредованных взаимодействий с патогенными микроорганизмами для предотвращения прилипания патогенов к клеточной поверхности (17). Повышенная продукция IgA может быть результатом повышенных уровней TGF-β и IL-10, которые способствуют переключению антител при инфекции SARS-CoV-2 (17). В исследовании сообщалось, что истощение нейтрофилов перед системным введением вакцин увеличивает величину антиген-специфического ответа CD4+ Т-клеток и уровни антиген-специфического ответа IgG в сыворотке (18).

   Было обнаружено, что альвелестат и сивелестат стимулируют синтез мРНК AID. Ингибиторы NE также индуцировали экспрессию мРНК BAFF, APRIL и IL-10 дозозависимым образом. Было показано, что нейтрофильная эластаза и родственные сериновые протеазы катепсин G и протеиназа 3 регулируют цитокиновый ответ посредством активации или деградации цитокинов, цитокиновых рецепторов или толл-подобных рецепторов (18). Это согласуется с нашими выводами о том, что ингибиторы NE стимулируют экспрессию IL-10, а также BAFF и APRIL в культурах спленоцитов. Сообщалось, что IL-10 регулирует экспрессию AID для индукции CSR Ig. (19) и хорошо известно, что IL-10 способствует переключению класса Ig на продукцию IgA (20). Таким образом, эти данные свидетельствуют о том, что ингибиторы NE стимулируют выработку антител за счет стимуляции AID и ингибирования активации/деградации цитокинов и рецепторов цитокинов эластазой. Также было показано, что НЭ ингибирует созревание и функцию дендритных клеток, включая экспрессию костимулирующих молекул CD40, CD80 и CD86 (21). Таким образом, присутствие ингибиторов нейтрофилов могло способствовать созреванию дендритных клеток и их экспрессии BAFF и APRIL и, возможно, костимулирующих молекул (например, CD40) для усиленной продукции антител. Хотя альвелестат и сивелестат являются специфическими ингибиторами норадреналина, следует учитывать, что они могут также ингибировать родственные эластазоподобные ферменты. В связи с этим сообщалось, что активированные В-клетки человека экспрессируют на клеточной поверхности трипсиноподобную сериновую протеазу (22). Заключительные замечания Ранее было показано, что пептидные дефензины нейтрофилов усиливают IgG, но не IgA ответы против интраназально вводимых вакцинных антигенов (23). Здесь исследование показало, что активность сериновой протеазы нейтрофильной эластазы и, возможно, другой сериновой протеазы, такой как эластаза В-клеток, также участвует в регуляции биологии В-клеток и адаптивного иммунитета. Однако, в отличие от пептидных дефенсинов нейтрофилов, НЭ негативно регулируют дифференцировку В-лимфоцитов в клетки, секретирующие IgG и IgA. Наличие AID обычно улучшает иммунитет на основе антител (24).

   Высокий уровень нейтрофилов у пациентов, инфицированных COVID-19, способен вызывать серьезное повреждение легочной ткани за счет высвобождения токсичных протеаз и активных форм кислорода, если их не уравновешивают антипротеазы.

2. Полностью транс-ретиноевая кислота (RA) оказывает благотворное воздействие при использовании при различных воспалительных состояниях кожи. В исследовании авторы обнаружили, что РА ингибирует выработку супероксидных анионов и высвобождение протеолитических ферментов нейтрофилами человека и крысы. Одновременно авторы обнаружили, что обработанные RA нейтрофилы были менее способны, чем необработанные нейтрофилы, повреждать эндотелиальные клетки в культуре, хотя адгезия обработанных RA нейтрофилов к монослоям эндотелиальных клеток не уменьшалась. Ингибирование цитотоксичности происходило в том же диапазоне концентраций, что и ингибирование образования кислородных радикалов и высвобождения протеазы. В дополнительных исследованиях было замечено, что предварительная обработка эндотелиальных клеток с РА индуцировала устойчивость к последующему повреждению активированными нейтрофилами. Наконец, исследования in vivo показали, что предобработка крыс в течение 3 дней РА (1-10 мг/сут, внутрибрюшинно) снижала степень поражения легких и участков кожи после обработки бычьим сывороточным альбумином и антителами к бычьему сывороточному альбумину в обратно-пассивная реакция Артюса. Таким образом, RA может модулировать опосредованное нейтрофилами повреждение эндотелиальных клеток путем воздействия как на нейтрофилы, так и на их клетки-мишени. Вместе эти эффекты могут лежать в основе уменьшения повреждений, опосредованных иммунными комплексами, наблюдаемых у экспериментальных животных. Благоприятные эффекты, которые ретиноиды оказывают при различных воспалительных заболеваниях кожи, также могут быть отражением их воздействия на физиологию как нейтрофилов, так и эндотелиальных клеток.

Пероральный прием ретинилпальмитата или ретиноевой кислоты корректирует IgA-ответы слизистых оболочек на интраназальную вакцину против вируса гриппа у мышей с дефицитом витамина А. Ретиноиды ингибируют воспалительные ответы Т-клеток TH17, стимулируют ответы регуляторных Т-клеток (Treg) и регулируют экспрессию толл-подобных рецепторов (TLR) (57).

Таким образом, главный исследователь ожидает, что ретиноевая кислота будет эффективнее у пациентов с covid-19, чем другой ингибитор нейтрофильной эластазы, такой как алвелестат, поскольку Attia et al (2018) продемонстрировали, что сивелестат снижает секрецию IgM дозозависимым образом. антитела, которые очень важны для нейтрализации вируса, а с другой стороны, ретиноевая кислота останавливает опосредованное нейтрофилами повреждение эндотелиальных клеток, воздействуя как на нейтрофилы, так и на их клетки-мишени.

Вторым препаратом является изотретиноин (13 цис RA), и ATRA может ингибировать инфекцию COVID 2019 путем индукции противовирусного иммунитета, и это обсуждается следующим образом:

Исследование показало, что 13-цис-ретиноевая кислота используется при лечении эмфиземы (эмфизема — это заболевание легких, вызывающее одышку), поскольку эффективный иммунный ответ против вирусных инфекций зависит от активации цитотоксических Т-клеток, которые могут устранять инфекцию, убивая инфицированные вирусом клетки, повышение количества и функции Т-клеток у пациентов с COVID-19 имеет решающее значение для успешного выздоровления. Недавнее исследование показало, что в 82,1% случаев COVID-19 наблюдается низкое количество циркулирующих лимфоцитов. CoV заражает макрофаги, а затем макрофаги представляют антигены CoV Т-клеткам. Этот процесс приводит к активации и дифференцировке Т-клеток, включая выработку цитокинов, связанных с различными субпопуляциями Т-клеток (Th17), с последующим массивным высвобождением цитокинов для усиления иммунного ответа. Продолжающееся производство этих медиаторов из-за персистенции вируса оказывает негативное влияние на активацию NK и CD8 T-клеток (25).

Недавнее исследование 522 пациентов с COVID и 40 здоровых людей из двух больниц в Ухане, Китай, показало, что количество Т-клеток отрицательно коррелирует с концентрацией IL-6, IL-10 и TNF-α в сыворотке, при этом у пациентов в период снижения наблюдается снижение IL-6. , концентрации IL-10 и TNF-α и восстановленное количество Т-клеток. Т-клетки от пациентов с COVID-19 имеют значительно более высокие уровни истощенного маркера запрограммированного белка клеточной смерти (PD-1) по сравнению с контрольной группой. Более того, увеличение экспрессии PD-1 и Tim-3 на Т-клетках можно было наблюдать по мере того, как пациенты прогрессировали от продромальных до явно симптоматических стадий, что еще больше указывает на истощение Т-клеток. Истощение Т-клеток представляет собой прогрессирующую потерю эффекторной функции из-за длительной стимуляции антигеном, характерную для хронических инфекций. Ингибирование дендритных клеток связано с истощением полифункциональности CD8+ Т-клеток при хронической инфекции вируса гепатита С. Т-клетки CD8 продуцируют очень эффективные медиаторы для элиминации nCoV2019 (26).

Дендритные клетки (ДК) играют ключевую роль во врожденных и адаптивных иммунных реакциях. Являясь наиболее сильными антигенпрезентирующими клетками организма, они эффективно стимулируют активацию Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, сочетая врожденный и адаптивный иммунитет. Незрелые ДК обладают сильной миграционной способностью, а зрелые ДК могут эффективно активировать Т-клетки в центральном звене запуска, регуляции и поддержания иммунного ответа. Таким образом, как только процесс созревания ДК блокируется, это напрямую влияет на инициацию последующего адаптивного иммунного ответа. MERS-CoV-2 способен воздействовать на дендритные клетки и макрофаги человека in vitro. Продуктивная репликация коронавируса ближневосточного респираторного синдрома в дендритных клетках, происходящих из моноцитов, модулирует врожденный иммунный ответ (27).

В другом исследовании было высказано предположение, что хемокиновый рецептор C-C типа 4 (CCR4) способствует импринтингу легких Т-клеток. Было обнаружено, что легочные ДК индуцируют экспрессию CCR4 на Т-клетках. Т-клетки, активированные легочными ДК, более эффективно перемещаются в легкие и более эффективно защищают от гриппа по сравнению с Т-клетками, активированными ДК из других тканей. Лим и его коллеги предположили, что CXCR4 играет роль в миграции CD8+ Т-клеток в ткани дыхательных путей (28).

Ингибирование дендритных клеток связано с истощением полифункциональности CD8+ Т-клеток при хронической инфекции вируса гепатита С. Т-клетки CD8 продуцируют очень эффективные медиаторы для элиминации nCoV2019 (29).

Присутствие RA в различных тканях очень важно для индукции иммунитета и борьбы с вирусной инфекцией, например, RA присутствует в высоких концентрациях в тонком кишечнике из-за метаболизма пищевого витамина А эпителиальными клетками кишечника. В этой локальной среде RA активирует и подготавливает дендритные клетки (ДК) к превращению в CD103+ ДК, которые продуцируют RA.3, 4CD103+ ДК представляют собой мигрирующие клетки, которые активируют наивные Т-клетки в мезентериальных лимфатических узлах, чтобы стать эффекторными Т-клетками, которые способствуют как кишечному гомеостазу, так и иммунитет.и также RA является важным сигналом, который индуцирует В-клетки, продуцирующие IgA. Самонаводящиеся Т-клетки и В-клетки кишечника играют важную роль в защите пищеварительного тракта от патогенов. (30) Ретиноевая кислота (атРА) может ингибировать спонтанный апоптоз активированных Т-лимфоцитов человека in vitro. 13-cis RA активирует продукцию цитокинов Th2 Увеличение количества циркулирующих дендритных клеток (40).

Итак, согласно этим предыдущим исследованиям, главный исследователь предполагает, что лимфопения и истощение Т-клеток могут быть результатом инфекции дендритных клеток (ДК) и ингибирования MERS-CoV-2.

Ретиноевая кислота оказывает сильное влияние на клеточную пролиферацию и дифференцировку. Кроме того, сообщалось, что ATRA проявляет как противовоспалительное, так и иммунорегуляторное действие. Недавние исследования показали, что экспрессия FOXP3 и иммунная функция регуляторных Т-клеток (Treg) могут быть усилены ATRA в иммунной системе как пациентов, так и mic.13 Ретиноевая кислота (RA) продуцируется рядом типов клеток, включая макрофаги и дендритные клетки, которые экспрессируют ретинальные дегидрогеназы, превращающие витамин А в его основной биологически активный метаболит, all-trans RA. All-trans RA связывается со своими ядерными рецепторами ретиноевой кислоты, которые экспрессируются в лимфоидных клетках и действуют как факторы транскрипции, регулирующие самонаведение и дифференцировку клеток. Продукция RA дендритными клетками CD103+ и альвеолярными макрофагами функционирует с TGF-b, чтобы способствовать превращению наивных Т-клеток в регуляторные Т-клетки Foxp3+ и, таким образом, поддерживать толерантность слизистой оболочки. (50) Таким образом, главный исследователь ожидает высокой индукции дендритных клеток (ДК) при обработке ретиноевой кислотой, что приведет к активации и миграции Т-клеток с меньшим явлением истощения.

Исследователи из Вэньчжоу, Китай, изучили клинические лабораторные показатели, включая уровни липидов у пациентов с COVID-19. Они обнаружили резкое снижение уровня холестерина у пациентов, инфицированных COVID-19, по сравнению со здоровыми людьми. Исследование предоставляет данные, позволяющие предположить, что уровни холестерина довольно быстро снижаются на ранних стадиях инфекции и увеличиваются по мере того, как пациент начинает выздоравливать. Следовательно, указание на то, что холестерин может играть важную роль в защите организма от таких инфекций. Согласно нашему протоколу, в зависимости от предыдущих исследований главный исследователь продемонстрировал сильную связь между иммунной системой и уровнями холестерина. :-

Клеточный холестерин является компонентом плазматической мембраны и также необходим для пролиферации клеток. Регуляция уровней внутриклеточного холестерина была предложена в качестве механизма регулирования пролиферации Т-клеток и макрофагов. Уровень внутриклеточного холестерина регулируется двумя конкурирующими путями: поглощением и оттоком холестерина, и ABCA1 играет главную роль в пути оттока холестерина. ATRA индуцирует экспрессию ABCA1 и ABCA1-зависимый отток холестерина в активированных первичных CD4+ T-клетках человека, что означает, что RA может влиять на функции T-клеток, регулируя уровень клеточного холестерина (51). ATRA повышает экспрессию ABCA1 только в активированных CD4+ Т-клетках, что указывает на то, что индукция ABCA1 с помощью ATRA и 13-цис-ретиноевой кислоты может играть важную роль в иммунном ответе.

Ретиноевая кислота и агонист Х-рецепторов печени синергически ингибируют ВИЧ-инфекцию в CD4+ Т-клетках, усиливая ABCA1-опосредованный отток холестерина (52) (53).

RA также действует непосредственно на макрофаги как на слизистых оболочках, так и на других иммунологических участках. AtRA модулирует активацию перитонеальных макрофагов эндотоксином и IFN-γ путем подавления продукции TNF и синтеза оксида азота (NO). LPS) в мышиных перитонеальных макрофагах (54).

В недавно проведенном исследовании сообщалось, что вещество (ATRA) оказывает профилактическое действие на легочный фиброз путем ингибирования IL-6-зависимой пролиферации и TGF-β1-зависимой трансдифференцировки легочных фибробластов. Кроме того, другие исследования показали, что 13-цис-ретиноевая кислота и другие аналоги ретиноидов ингибируют индуцированную ИЛ-1 продукцию ИЛ-6 и что этот эффект специфичен для аналога и, по крайней мере, частично опосредован транскрипцией. Этот эффект был дозозависимым с IC50 10 (-7) M RA, и значительное ингибирование было отмечено при таких низких дозах, как 10 (-8) M. Производство IL-10 ингибировалось введением ATRA (55).

Исследование показало, что мыши TLR3(-/-), TLR4(-/-) и TRAM(-/-) более восприимчивы к SARS-CoV, чем мыши дикого типа, но испытывают только временную потерю веса без смертности в ответ на инфекционное заболевание. Напротив, мыши с дефицитом адаптера TLR3/TLR4 TRIF очень восприимчивы к инфекции SARS-CoV, демонстрируя повышенную потерю веса, смертность, снижение функции легких, усиление патологии легких и более высокие титры вируса. Новые исследования показали, что причиной ингибирования репликации DENV является высокий уровень IFN-α/β, продуцируемый путем TLR3-IRF3/IRF7, и IFN-β. 13Cis-ретиноевая кислота индуцирует значительную активацию толл-подобного рецептора 3 (TLR3), что приводит к иммунному ответу на интермедиат дцРНК, который может частично генерироваться во время репликации CoV-2. активируется для производства интерферонов I типа (56).

.

Пероральный прием ретинилпальмитата или ретиноевой кислоты корректирует IgA-ответы слизистых оболочек на интраназальную вакцину против вируса гриппа у мышей с дефицитом витамина А. Ретиноиды ингибируют воспалительные ответы Т-клеток TH17, стимулируют ответы регуляторных Т-клеток (Treg) и регулируют экспрессию толл-подобных рецепторов (TLR) (57). In vitro обработка нормальных человеческих моноцитов полностью транс-ретиноевой кислотой (ATRA) снижает экспрессию TLR-2 (58), но этот эффект не изучался у пациентов, получавших системные ретиноиды. Изотретиноин (13-цис-ретиноевая кислота; 13-цис-ретиноевая кислота) — единственный препарат, способный вызывать длительную или постоянную ремиссию акне; однако механизмы, приводящие к такому устойчивому ответу, неизвестны. Учитывая роль TLR-2 в инициировании иммунных ответов на P. acnes, мы предположили, что подавление TLR-2 на моноцитах и/или индукция ответов Treg in vivo могут представлять собой механизмы, с помощью которых изотретиноин проявляет свои долгосрочные эффекты. .

Изотретиноин (13цис RA) может быть способен ингибировать проникновение COVID 2019 посредством понижающей регуляции ACE2, белка AT1 и опосредованного Ang II внутриклеточного высвобождения кальция, а не ингибирования интерлейкина-6 (IL-6), и это обсуждается следующим образом:

Многие авторы неправильно понимают разницу между БРА, которые блокируют рецепторы ATR1, и предполагаемым препаратом, который может блокировать сайт связывания COVID-19 на рецепторе ACE2, который полностью отличается от ATR1 и 2.

Пандемия COVID-19, вызванная SARS-COV-2, заразила более 2 000 000 человек, в результате чего погибло более 150 000 человек.(59) Ключевым клеточным белком хозяина, необходимым для проникновения вируса, является ангиотензинпревращающий фермент 2 (ACE2), экспрессия которого была продемонстрирована во многих тканях, включая клетки альвеолярного эпителия типа II в легких, слизистой оболочке полости рта и кишечнике, сердце, почках, эндотелии и коже. Клетки, экспрессирующие ACE2, могут действовать как домашние клетки и склонны к инфекции SARS-CoV-2, поскольку рецептор ACE2 облегчает проникновение и репликацию клеточного вируса. (60) Исследование показало, что пациенты с артериальной гипертензией и сахарным диабетом могут подвергаться более высокому риску заражения SARS-CoV-2, поскольку этих пациентов часто лечат ингибиторами АПФ (ИАПФ) или блокаторами рецепторов ангиотензина II типа I (БРА), которые были ранее предлагалось увеличить экспрессию ACE2 (61). В другом исследовании, проведенном Sinha et al., который проанализировал общедоступный набор данных Connectivity Map (CMAP) пре-/пост-транскриптомных профилей для лечения лекарственными препаратами в клеточных линиях для более чем 20 000 малых молекул, изотретиноин был самым сильным понижающим регулятором рецепторов ACE 2. С другой стороны, они обнаружили в CMAP 6 препаратов, которые в настоящее время проходят клинические испытания для лечения COVID-19 (хлорохин, талидомид, метилпреднизолон, лозартан, лопинавир и ритонавир, с сайта ClinicalTrials.gov). ни в одном из них не было обнаружено значительного изменения экспрессии ACE2 (P>0,1) Более того, другое исследование продемонстрировало, что изотретиноин является потенциальными ингибиторами папаиноподобной протеазы (PLpro), который представляет собой белок, кодируемый генами SARS-CoV-2, и считается одним из белков, на которые следует нацеливаться при лечении COVID-19, выполняя целевые виртуальные скрининг лигандов. Как уже обсуждалось ранее, главный исследователь (13cRA) является самым сильным понижающим регулятором ACE2.

Главный исследователь ожидает, что 13cRA может ингибировать или блокировать ACE2 путем прямого взаимодействия и связывания с трансмембранным ACE2, что предполагает его терапевтический потенциал в предотвращении проникновения COVID 2019 в клетку-хозяин.

Предыдущие исследования родственного коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома (SARS-CoV) и FP FP SARS-CoV показали, что кальций (Ca2+) играет важную роль в фузогенной активности через карман связывания Ca2+ с консервативной глутаминовой кислотой (E) и аспарагиновой кислотой. (D) остатки продемонстрировали, что внутриклеточный Ca2+ усиливает инфицирование PPs MERS-CoV WT примерно в два раза и что E891 является ключевым остатком для взаимодействия Ca2+. Электронно-спиновый резонанс показал, что это усиление может быть связано с усилением Ca2+ упорядочения мембран, связанного со слиянием FP MERS-CoV. Интересно, что изотермическое калориметрическое титрование показало, что FP MERS-CoV связывает один ион Ca2+, в отличие от FP SARS-CoV, который связывается с двумя ионами Ca2+ (62).

Ангиотензин II повышает активность внутриклеточного кальция в подоцитах интактного клубочка. Блокатор Са2+-каналов L-типа никардипин не влиял на опосредованное Ang II увеличение [Ca2+], и было высказано предположение, что связывание SARS-CoV-2 с ACE2 может ослаблять остаточную активность ACE2, искажая баланс ACE/ACE2 до состояния повышенная активность ангиотензина II, приводящая к легочной вазоконстрикции и воспалительному и окислительному повреждению органов, что увеличивает риск острого повреждения легких (ALI). AngII через рецепторы AT1 активирует многие провоспалительные гены, такие как молекула адгезии сосудистых клеток-1 (VCAM-1), молекула межклеточной адгезии-1 (ICAM-1), интерлейкин-6 (IL-6)30. но 13cis RA специфически подавляла белок AT1 в зависимости от дозы и времени. Понижение экспрессии AT1 приводит к уменьшению внутриклеточного высвобождения кальция, опосредованного AngII. Подобно подавлению рецептора, лечение 13cRA приводило к значительному снижению мРНК AT1 (63).

Наконец, главный исследователь ожидает, что изотретиноин поможет в индукции антител против COVID-19 за счет индукции различных типов противовирусных иммунных факторов, а также уменьшения гипермутации COVID-19 за счет блокирования его рецепторов ACE2 и предотвращения проникновения и репликации вируса в клетку. это даст иммунной системе время распознать COVID-19.