血小板对阿司匹林和中风的高反应性 (PLARAS)

上下文

阿司匹林是血管、心脏和神经系统疾病急性期或慢性期患者的首选抗血栓疗法，除非有使用华法林钠的特定适应症（例如，心脏血栓、慢性心房颤动、心脏栓塞性缺血中风）。 最近的研究，包括一些荟萃分析，表明使用阿司匹林的心血管疾病患者中有 5-60% 表现出一定程度的血小板抗药性。 然而，可用的研究包括一些方法错误，使解释和实际应用变得困难。 因此，血小板抵抗的发生率和结果仍然知之甚少，尤其是在缺血性卒中患者中。 此外，很少有研究将患者纳入门诊随访

阿司匹林治疗

本研究中开具的阿司匹林剂量为 300 mg 口服或鼻胃管给药，每天一次（辅助治疗），如果患者没有溶栓治疗的指征，则在入院后立即进行首次剂量断层扫描。 急性期过后，患者将接受 200 毫克/天剂量的阿司匹林。 阿司匹林将以“简单”制剂给药（无缓冲液，无缓释剂）

住院期间的结果分析

将在住院期间每天评估结果，直至患者出院。 医生、患者和研究人员将无法获得血小板功能测试的结果。 将审查住院天数，包括重症监护室住院天数。 将对死亡进行分析，并在每个案例中详细描述死因。 心电图将由经验丰富的心脏病专家检查。 超声心动图将由专门从事此方法的经验丰富的心脏病专家检查。 断层扫描将由经验丰富的神经放射学家进行检查，共振/共振血管造影将由另一位经验丰富的神经放射学家进行评估；两者都不知道血小板结果。 结果将由一个委员会来判断，该委员会由一名神经学家、一名血液学家、一名神经放射学家、一名心脏病学家和一名流行病学家组成，他们都不知道血小板功能的结果

出院后的监测和管理

将通过初次神经系统事件后 3、12、24 和 36 个月的访谈以及每月的电话访谈来分析结果。 本研究的调查委员会将详细评估潜在的不良结果（死亡、住院、进行的诊断测试、任何病症的治疗要求或新出现的症状）。 在此评估期间，医生、患者和研究人员将无法获得血小板功能测试的结果。 结果将由一个由神经学家、血液学家、神经放射学家、心脏病学家和流行病学家组成的委员会来评判，所有这些人都将对血小板测试结果不知情。在所有返回时将以积极的方式调查依从性（日常使用）访问和每月电话联系。 除了对阿司匹林包装的审查之外，这项研究还将包括对患者的访谈和对家属的单独访谈。 此外，将通过测量血清血栓素 B2 来评估依从性。

• 每月与患者及其家人进行电话联系，以确定患者是否保持稳定或是否有任何不良后果（死亡、需要就医或出现新症状）。 如果出现任何此类结果，我们将调查详细信息（死亡证明、住院报告和所进行的诊断测试分析）。 此外，我们将调查与任何查询或入院相关的记录和医疗报告。
• 三个月和十二个月的评估将包括各种血小板功能测试；此外，还将进行标准化问卷调查。 未参加咨询的患者将在 30 天内联系。 如果患者仍然不能参加咨询（例如，因为行走困难），研究人员将前往患者家中。

严重出血

• 任何致命的出血事件（将描述所有原因）
• 危及生命的出血：血红蛋白下降至少 50 g/L，低血压需要正性肌力药（失血性休克）；症状性颅内出血；或输注至少 4 个单位的红细胞
• 大出血，定义为显着致残（有持续性后遗症）；眼内出血导致严重视力丧失；或输注 1-3 个单位的红细胞

阿司匹林高反应性的定义

• 对于使用带 C-EPI（胶原蛋白-肾上腺素）墨盒的 PFA-100：阻塞时间 < 150 秒
• Chrono-Log 700 型全血：0 Ω 以上，含 0.75 mM 花生四烯酸
• Chrono-Log 700 型全血：胶原蛋白浓度为 1 mg/L 和 5 mg/L，根据公式 1 -（1 mg 的聚集率/5 mg 的聚集率）。 超反应性将定义为低于 0.50 的值
• - Chrono-Log 700 型全血：胶原蛋白浓度为 1 mg/L，高于 10 Ω
• Plateletworks：与花生四烯酸的聚集超过60%将被认为具有抗性
• VerifyNow 阿司匹林检测 (Accumetrics)：≥ 550 阿司匹林反应单位 (ARU)
• Impact-R (Diamed) > 3.2% 血小板在花生四烯酸孵育后聚集在板表面

采血

血液样本将在到达急诊室时（第一次服用阿司匹林之前）、住院的第五天、三个月后以及 12 个月后再次采集。 样品将在禁食过夜后的上午 9 点至 12 点之间采集，但到达急诊部时采集的样品除外。 血液将从肘前静脉或其他静脉（如有必要）收集到柠檬酸盐瓶（3.2%；Vacuette，Greiner Bio-One）中或直接放入 Plateletworks 瓶套件中。 样品总量约为 20 毫升。 止血带的使用时间不会超过 30 秒，并且在收集之前或期间不允许移动。 为了防止采集引起的血小板活化，即使采取了上述预防措施，前 5 ml 样品也将被丢弃。 将瓶子装满并轻轻倒置五次以获得血液与抗凝剂的正确混合物。 在 Plateletworks 测试中，化验将在采集后 10 分钟内进行；其余化验将在 30 分钟内进行

使用 CHRONOLOG 700 型和软件（AGGRO/LINK-8，PA，美国）测量全血阻抗的聚集法

采集柠檬酸盐全血后，样品将在 30 分钟内处理。 全血将用无菌盐水 (0.9%) 以 1:1 稀释，并用几种试剂之一（Chrono-Log、0.5 mM 花生四烯酸、1 g/L 胶原蛋白或 5 g/L 胶原蛋白）进行刺激。 最大阻抗将使用浸入样品中 6 分钟的两个电极测量，并表示为 Ω。

PFA-100（血小板功能分析-100，西门子，美国）

用于 PFA-100® 测定的血液样本将根据制造商的说明进行测试。 对于所有样品，PFA-100® 自检程序将在分析前运行。 测试将使用柠檬酸盐全血和胶原蛋白-肾上腺素药筒进行。 全血将在高剪切应力条件下通过覆盖有胶原蛋白和肾上腺素膜的 150 µm 孔吸出。 血小板塞堵塞小孔所用的时间将记录为闭合时间（以秒为单位）。

血清血栓素 B2 的测定 - ELISA

采血后立即离心（+4°C），血浆立即冷冻于液氮（-190°C）中，然后转移至-80°C冰箱。 血清血栓素 B2 将根据制造商的说明通过 ELISA 一式两份测量，并表示为 ng/ml。

PLATELETWORKS（海伦娜公司，美国）

简而言之，在含有花生四烯酸、胶原蛋白、ADP 和 EDTA 的试剂盒中采集血液后，将根据 Helena 实验室的标准方案（Helena Point of Care®）通过阻抗测量（Horiba ABX，蒙彼利埃，法国）进行血小板计数，德克萨斯州，美国）。 血小板聚集百分比将使用以下公式计算：聚集百分比 = [EDTA 中的血小板 - 具有激动剂的血小板]/ EDTA 中的血小板 x 100

VERIFYNOW ASPIRIN，ACCUMETRICS，美国

VerifyNow 阿司匹林床旁系统（Accumetrics，圣地亚哥，加利福尼亚州，美国）基于全血中血小板聚集的光学浊度检测。 全血将被转移到含有人纤维蛋白原包被珠和花生四烯酸的冻干制剂的标准盒中。 当聚集发生时，系统会将光度透射率结果转换为阿司匹林反应单位 (ARU)。

IMPACT-R, DIAMED, 美国

根据制造商的方案，将柠檬酸盐血液 (130 μL) 置于测试套件（孔）中，并使用旋转锥进行剪切流 2 分钟（1800 s-1）。 然后用 May Grünwald 清洗和染色孔。 将使用连接到 Impact-R 的图像分析系统评估血小板对表面的粘附，结果将表示为染色面积的百分比。

统计分析

对于所有计算，将使用软件 IBM SPSS 21.0 for Windows（SPSS Inc，Chicago，IL，USA）。 数据库将由 SPSS Data Entry Builder 4.0 使用复式输入系统创建。

项目实施时间表

阶段 月数 日历日期 试验活动和估计

1. 13 03/2007 - 04/2008 协议开发
2. 2 05/2008 - 06/2008 程序完成
3. 5 07/2008 - 12/2008 议定书修订
4. 6 01/2009- 06/2009 培训
5. 12 07/2009 - 06/2010 急诊室主要试验招募
6. 36 08/2009 - 06/2013 跟进
7. 3 07/2013 - 10/2013 分析和报告。

利益冲突

数据的调查、收集或分析没有外部影响或赞助商。 同样，手稿的统计分析、准备和出版将完全由研究人员自己进行，并与 USP 医学院的流行病学家和统计学家合作。 为血小板测试提供试剂盒和设备的公司和机构将在会议和出版物中进行介绍