アスピリンおよび脳卒中に対する血小板過敏性 (PLARAS)

コンテキスト

アスピリンは、血管、心臓、および神経疾患の急性期または慢性期の患者に最適な抗血栓療法です。脳卒中）。 いくつかのメタ分析を含む最近の研究では、アスピリンを使用している心血管疾患患者の 5 ～ 60% が、この薬に対してある程度の血小板耐性を示していることが示唆されています。 ただし、利用可能な研究には、解釈と実際の適用を困難にするいくつかの方法論的エラーが含まれています。 したがって、血小板抵抗性の発生率と転帰は、特に虚血性脳卒中の患者ではよくわかっていません。 さらに、外来フォローアップに患者を含めた研究はほとんどありません。

アスピリンによる治療

この研究で処方されるアスピリンの用量は、経口または経鼻胃管で1日1回（補助療法）300 mgであり、患者に血栓溶解療法の兆候がない場合は、入院直後に最初の線量断層撮影を行います。 急性期の後、患者は 200 mg/日の用量でアスピリンを受け取ります。 アスピリンは「単純な」製剤で投与されます（緩衝液なし、徐放なし）

入院期の転帰の分析

転帰は、患者が退院するまで入院中毎日評価されます。 医師、患者、および研究者は、血小板機能の検査結果にアクセスできません。 集中治療室の入院日数も含め、入院日数の見直しを行います。 死因を分析し、それぞれの死因を詳しく説明します。 心電図は、経験豊富な心臓専門医によって検査されます。 心エコー図は、この方法を専門とする経験豊富な心臓専門医によって検査されます。 断層撮影は経験豊富な神経放射線科医によって検査され、共鳴/共鳴血管造影は別の経験豊富な神経放射線科医によって評価されます。どちらも血小板の結果を知らされません。 結果は、神経内科医、血液内科医、神経放射線科医、心臓病専門医、および疫学者を含む委員会によって判断されます。これらのすべての専門家は、血小板機能の結果を知らされません。

退院後の監視と管理

結果は、最初の神経学的イベントの 3、12、24、および 36 か月後のインタビュー、および毎月の電話インタビューを通じて分析されます。 潜在的な有害転帰（死亡、入院、実施された診断検査、任意の状態の治療の要求、または症状の新たな発症）は、この研究の研究者の委員会によって詳細に評価されます. この評価中、医師、患者、研究者は血小板機能検査の結果にアクセスできません。 結果は、神経学者、血液学者、神経放射線学者、心臓専門医、および疫学者で構成される委員会によって判断されます。全員が血小板検査の結果を知らされません。アドヒアランス (日常使用) は、常に積極的に調査されます。訪問および毎月の電話連絡を通じて。 この研究には、アスピリンのパッケージのレビューに加えて、患者へのインタビューと家族への個別のインタビューが含まれます。 さらに、血清トロンボキサンB2を測定することにより、アドヒアランスを評価します。

• 患者とその家族との毎月の電話連絡を使用して、患者が安定した状態を維持しているか、または有害な転帰（死亡、医療を求める必要がある、または新しい症状を示した）があったかどうかを判断します。 そのような結果が存在する場合は、詳細を調査します（死亡診断書、入院報告、および実施された診断検査の分析）。 さらに、問い合わせや入院に関連する記録と医療レポートを調査します。
• 3 か月および 12 か月での評価は、血小板機能のさまざまなテストで構成されます。さらに、標準化されたアンケートが実施されます。 相談に出席しない患者には、30日以内に連絡があります。 それでも患者が相談に参加できない場合（例えば、歩行困難のため）、研究者は患者の家に行きます。

重度の出血

• 致命的な出血イベント (すべての原因が説明されます)
• 生命を脅かす出血: 少なくとも 50 g/L のヘモグロビンの低下、強心剤を必要とする低血圧 (出血性ショック)。症候性頭蓋内出血;または少なくとも 4 単位の赤血球の輸血
• 重大な障害と定義される大出血（永続的な後遺症を伴う）;重大な視力喪失につながる眼内出血;または赤血球1～3単位の輸血

アスピリンに対する過敏性の定義

• C-EPI (コラーゲン-エピネフリン) を含むカートリッジを使用する PFA-100 の場合: 閉塞時間 < 150 秒
• Chrono-Log モデル 700 全血：0.75 mM のアラキドン酸で 0 Ω 以上
• Chrono-Log モデル 700 全血: 式 1 (1 mg での凝集率 / 5 mg での凝集率) に従って、1 mg/L および 5 mg/L のコラーゲンを含む。 過反応性は、0.50 未満の値に対して定義されます。
• - Chrono-Log Model 700 Whole-Blood: 10 Ω を超える 1 mg/L のコラーゲンを含む
• 血小板機能: アラキドン酸との 60% 以上の凝集は耐性と見なされます
• VerifyNow Aspirin Assay (Accumetrics): ≥ 550 アスピリン反応単位 (ARU)
• Impact-R (Diamed) > 3.2% アラキドン酸とのインキュベーション後のプレート表面の血小板凝集

採血

血液サンプルは、ED 到着時 (アスピリンの初回投与前)、入院 5 日目、3 か月後、および 12 か月後に再度採取されます。 サンプルは、ED到着時に採取されたサンプルを除いて、一晩絶食した後、午前9時から12時の間に収集されます。 血液は、前肘部静脈または必要に応じて別の静脈から、クエン酸塩のボトル ​​(3.2%; Vacuette、Greiner Bio-One) に、または直接 Plateletworks ボトル キットに収集されます。 サンプルは合計約 20 ml になります。 止血帯は 30 秒以上使用せず、採取前または採取中に移動することはできません。 採取による血小板の活性化を防ぐために、上記の予防措置を講じたとしても、最初の 5 ml のサンプルは廃棄されます。 ボトルは上部まで満たされ、抗凝固剤と血液の正確な混合物を得るために静かに 5 回反転されます。 Plateletworks テストでは、採取から 10 分以内にアッセイが行われます。残りのアッセイは 30 分以内に実施されます

クロノログ モデル 700 とソフトウェアを使用して全血のインピーダンスを測定することによる凝集度測定 (AGGRO/LINK-8、PA、USA)

クエン酸添加全血を採取した後、サンプルは 30 分以内に処理されます。 全血を滅菌生理食塩水 (0.9%) で 1:1 に希釈し、いくつかの試薬 (Chrono-Log、0.5 mM アラキドン酸、1 g/L コラーゲン、または 5 g/L コラーゲン) のいずれかで刺激します。 最大インピーダンスは、サンプルに 6 分間浸漬した 2 つの電極を使用して測定し、Ω で表します。

PFA-100 (PLATELET FUNCTION ANALYZE-100、シーメンス、米国)

PFA-100® アッセイ用の血液検体は、製造元の指示に従って検査されます。 すべてのサンプルについて、分析前に PFA-100® セルフテスト手順が実行されます。 検査は、コラーゲン-エピネフリン カートリッジを使用したクエン酸添加全血を使用して実施されます。 全血は、コラーゲンとエピネフリンを含浸させた膜で覆われた 150 μm の開口部を通して、高せん断応力の条件下で吸引されます。 血小板プラグによって開口部を塞ぐのにかかる時間を閉鎖時間 (秒単位で測定) として記録します。

血清トロンボキサン B2 の測定 - ELISA

収集後、血液はすぐに遠心分離され (+4 °C)、血漿はすぐに液体窒素 (-190 °C) で凍結され、-80 °C の冷凍庫に移されます。 血清トロンボキサン B2 は、製造元の指示に従って ELISA により 2 回測定し、ng/ml で表します。

PLATELETWORKS (ヘレナコーポレーション、アメリカ)

簡単に説明すると、アラキドン酸、コラーゲン、ADP、および EDTA を含むキットで血液を採取した後、Helena Laboratories (Helena Point of Care® 、テキサス州、米国）。 血小板凝集率は、次の式を使用して計算されます: 凝集率 = [EDTA 中の血小板 - アゴニストを含む血小板]/EDTA 中の血小板 x 100

VERIFYNOW アスピリン、アキュメトリクス、米国

VerifyNow アスピリン ポイント オブ ケア システム (Accumetrics、カリフォルニア州サンディエゴ) は、全血中の血小板凝集の比濁光学検出に基づいています。 全血は、ヒトフィブリノーゲンでコーティングされたビーズとアラキドン酸の凍結乾燥製剤を含む標準カートリッジに移されます。 凝集が発生すると、システムは光度透過率の結果をアスピリン反応単位 (ARU) に変換します。

IMPACT-R、ディアメッド、米国

クエン酸血液（130μL）を製造元のプロトコルに従ってテストキット（ウェル）に入れ、回転コーンを使用して2分間（1800秒 -1 ）せん断流にさらします。 その後、ウェルを洗浄し、May Grünwald で染色します。 Impact-R に接続された画像解析システムを使用して、表面への血小板の付着を評価し、結果を染色面積のパーセンテージとして表します。

統計分析

すべての計算で、ソフトウェア IBM SPSS 21.0 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL, USA) を使用します。 データベースは、SPSS Data Entry Builder 4.0 によって、複式入力システムを使用して作成されます。

プロジェクト実施スケジュール

フェーズ 月数 カレンダーの日付 トライアル活動と見積もり

1. 13 2007 年 3 月 - 2008 年 4 月 プロトコルの開発
2. 2 2008 年 5 月 - 2008 年 6 月 手順の最終化
3. 5 2008 年 7 月 - 2008 年 12 月 プロトコル改訂
4. 6 2009 年 1 月～2009 年 6 月 トレーニング
5. 12 2009 年 7 月 - 2010 年 6 月 救急治療室での主な試験募集
6. 36 2009 年 8 月 - 2013 年 6 月 フォローアップ
7. 3 2013 年 7 月 - 2013 年 10 月 分析と報告。

利益相反

データの調査、収集、または分析に対する外部の影響またはスポンサーはありません。 同様に、統計分析、原稿の作成、および出版は、USP 医学部の疫学者および統計学者と協力して、研究者自身によって完全に行われます。 血小板検査用のキットと機器を提供した企業と機関は、会議でのプレゼンテーションや出版物で説明されます。