Verihiutaleiden ylireaktiivisuus aspiriinille ja aivohalvaukseen (PLARAS)

KONTEKSTI

Aspiriini on suositeltu antitromboottinen hoito potilaille, joilla on verisuoni-, sydän- ja neurologisten sairauksien akuutti tai krooninen vaihe, ellei natriumvarfariinille ole erityistä indikaatiota (esim. sydäntukos, krooninen eteisvärinä, sydän-embolinen iskeeminen aivohalvaus). Viimeaikaiset tutkimukset, mukaan lukien jotkin meta-analyysit, viittaavat siihen, että 5–60 % aspiriinia käyttävistä sydän- ja verisuonitauteja sairastavista potilaista osoittaa jonkin verran verihiutaleiden vastustuskykyä lääkkeelle. Käytettävissä olevissa tutkimuksissa on kuitenkin useita metodologisia virheitä, jotka vaikeuttavat tulkintaa ja käytännön soveltamista. Siten verihiutaleiden vastustuskyvyn ilmaantuvuus ja lopputulos ovat edelleen huonosti ymmärrettyjä, erityisesti potilailla, joilla on iskeeminen aivohalvaus. Lisäksi harvat tutkimukset ovat sisällyttäneet potilaita ambulatoriseen seurantaan

HOITO ASPIRINILLA

Tässä tutkimuksessa määrättävä aspiriiniannos on 300 mg suun kautta tai nenämahaletkulla kerran vuorokaudessa (avusteinen hoito) ja ensimmäinen annostomografia tehdään pian vastaanottoon, jos potilaalla ei ole viitteitä trombolyyttisesta hoidosta. Akuutin vaiheen jälkeen potilaat saavat aspiriinia 200 mg/vrk. Aspiriinia annetaan "yksinkertaisessa" valmisteessa (ei puskuria, ei pitkittynyttä vapautumista)

TULOKSEN ANALYYSI SAIRAALAAIKAIDEN AIKANA

Tuloksia arvioidaan päivittäin sairaalahoidon aikana, kunnes potilas kotiutuu. Lääkäri, potilas ja tutkijat eivät pääse käsiksi verihiutaleiden toimintaa koskevien testien tuloksiin. Sairaalapäivien lukumäärää tarkastellaan, mukaan lukien tehohoitoyksikön sairaalahoitopäivien määrä. Kuolemat analysoidaan ja kuolinsyy kuvataan yksityiskohtaisesti kussakin tapauksessa. Kokenut kardiologi tutkii elektrokardiogrammit. Ekokardiogrammit tutkii tähän menetelmään erikoistunut kokenut kardiologi. Kokenut neuroradiologi tutkii tomografian, ja toinen kokenut neuroradiologi arvioi resonanssi/resonanssiangiografian. molemmat ovat sokeutuneet verihiutaleiden tuloksiin. Tuloksia arvioi komitea, johon kuuluu neurologi, hematologi, neuroradiologi, kardiologi ja epidemiologi, jotka kaikki ovat sokeita verihiutaleiden toiminnan tuloksista.

SEURANTA JA HALLINTA SAIRAALASTA POISTUMISEN JÄLKEEN

Tuloksia analysoidaan haastatteluilla 3, 12, 24 ja 36 kuukautta alkuperäisen neurologisen tapahtuman jälkeen sekä kuukausittaisilla puhelinhaastatteluilla. Tämän tutkimuksen tutkijakomitea arvioi yksityiskohtaisesti mahdollisia haittavaikutuksia (kuolema, sairaalahoito, suoritetut diagnostiset testit, minkä tahansa sairauden hoitopyyntö tai oireiden ilmaantuminen). Tämän arvioinnin aikana lääkäri, potilas ja tutkijat eivät pääse käsiksi verihiutaleiden toimintaa koskevien testien tuloksiin. Tuloksia arvioi komitea, johon kuuluu neurologi, hematologi, neuroradiologi, kardiologi ja epidemiologi, jotka kaikki ovat sokeutuneet verihiutaleiden testituloksiin. käyntejä ja kuukausittain puhelimitse. Tämä tutkimus sisältää potilaiden haastatteluja ja erillisiä perhehaastatteluja aspiriinipakkauksen arvioinnin lisäksi. Lisäksi kiinnittymistä arvioidaan mittaamalla seerumin tromboksaani B2.

• Kuukausittain puhelimitse potilaan ja hänen perheensä kanssa selvitetään, onko potilas pysynyt vakaana tai onko hänellä ollut haitallisia seurauksia (kuollut, tarvittu lääkärin hoitoon tai ilmaantunut uusia oireita). Jos tällaisia ​​tuloksia havaitaan, tutkimme yksityiskohdat (kuolematodistus, raportti sairaalassaolosta ja suoritettujen diagnostisten testien analyysi). Lisäksi tutkimme tiedusteluihin tai vastaanottoihin liittyvät asiakirjat ja lääketieteelliset raportit.
• Arviointi kolmen ja kahdentoista kuukauden kohdalla koostuu erilaisista verihiutaleiden toiminnan testeistä; Lisäksi toteutetaan standardoitu kyselylomake. Potilaisiin, jotka eivät tule kuulemaan, otetaan yhteyttä 30 päivän kuluessa. Jos potilas ei vieläkään pääse paikalle (esim. kävelyvaikeuksien vuoksi), tutkija menee potilaan kotiin.

VAKAVA VERENVUOTO

• Mikä tahansa kuolemaan johtava verenvuoto (kaikki syyt kuvataan)
• Henkeä uhkaava verenvuoto: hemoglobiinin lasku vähintään 50 g/l, hypotensio, joka vaatii inotrooppisia lääkkeitä (hemorraginen sokki); oireinen kallonsisäinen verenvuoto; tai vähintään 4 punasoluyksikön siirtoa
• Vakava verenvuoto, joka määritellään merkittävästi vammauttavaksi (jatkuvilla seurauksilla); silmänsisäinen verenvuoto, joka johtaa merkittävään näön menetykseen; tai 1-3 yksikön punasolujen siirto

ASPIRININ HYPERREAKTIIVISUUDEN MÄÄRITELMÄ

• PFA-100 käyttämällä patruunaa, jossa on C-EPI (kollageeni-epinefriini): okkluusioaika < 150 sekuntia
• Chrono-Log Model 700 kokoveri: yli 0 Ω 0,75 mM arakidonihapolla
• Chrono-Log Model 700 Whole-Blood: kollageenilla 1 mg/l ja 5 mg/l, kaavan 1 mukaan - (Aggregaationopeus 1 mg:lla / Aggregaationopeus 5 mg:lla). Ylireaktiivisuus määritetään arvoille, jotka ovat alle 0,50
• - Chrono-Log Model 700 Whole-Blood: kollageenia 1 mg/l yli 10 Ω
• Verihiutalejärjestelmät: yli 60 %:n aggregaatiota arakidonihapon kanssa pidetään vastustuskykyisenä
• VerifyNow Aspirin Assay (akkumetriikka): ≥ 550 aspiriinireaktioyksikköä (ARU)
• Impact-R (halkaisija) > 3,2 % verihiutaleaggregaatteja levyn pinnalla arakidonihapon kanssa inkuboinnin jälkeen

VEREN KERÄÄMINEN

Verinäytteet otetaan saapuessa ED:lle (ennen ensimmäistä aspiriiniannosta), viidentenä sairaalahoitopäivänä, kolmen kuukauden kuluttua ja uudelleen 12 kuukauden kuluttua. Näytteet kerätään aamulla klo 9 ja 12 välisenä aikana yön yli paaston jälkeen, lukuun ottamatta näytettä, joka otetaan päivystykseen saapuessa. Veri kerätään kyynärpäälaskimosta tai tarvittaessa toisesta laskimosta sitraattipulloihin (3,2 %; Vacuette, Greiner Bio-One) tai suoraan Plateletworks-pullosarjaan. Näytteitä on yhteensä noin 20 ml. Kiristettä ei kiinnitetä yli 30 sekuntia eikä liikettä saa sallia ennen keräystä tai sen aikana. Keräyksen aiheuttaman verihiutaleiden aktivoitumisen estämiseksi, vaikka edellä mainitut varotoimet olisikin huomioitu, ensimmäinen 5 ml näyte heitetään pois. Pullot täytetään yläosaan ja käännetään varovasti ylösalaisin viisi kertaa, jotta saadaan oikea veren ja antikoagulantin seos. Verihiutaletehdastestissä määritykset suoritetaan 10 minuutin sisällä keräämisestä; loput määritykset suoritetaan 30 minuutin sisällä

AGGROMETRIA MITTAAmalla KOKOVEREN IMPEDANSSI CHRONOLOG MALLIA 700 JA OHJELMISTOLLA (AGGRO/LINK-8, PA, USA)

Sitraatin kokoveren keräämisen jälkeen näyte käsitellään alle 30 minuutissa. Kokoveri laimennetaan 1:1 steriilillä suolaliuoksella (0,9 %) ja stimuloidaan yhdellä useista reagensseista (Chrono-Log, 0,5 mM arakidonihappo, 1 g/l kollageenia tai 5 g/l kollageenia). Suurin impedanssi mitataan käyttämällä kahta elektrodia, jotka on upotettu näytteeseen 6 minuutiksi ja ilmaistaan ​​Ω:na.

PFA-100 (PLATELET FUNCTION ANALYZE-100, SIEMENS, USA)

Verinäytteet PFA-100®-määrityksiä varten testataan valmistajan ohjeiden mukaisesti. Kaikille näytteille suoritetaan PFA-100®-itsetestimenettely ennen analysointia. Testaus suoritetaan sitroitua kokoverta käyttäen kollageeni-epinefriinipatruunoilla. Kokoveri imetään suuren leikkausjännityksen olosuhteissa 150 µm:n aukon läpi, joka on peitetty kollageenilla ja epinefriinillä kyllästetyllä kalvolla. Aika, joka kuluu aukon sulkemiseen verihiutaletulpalla, kirjataan sulkemisajaksi (mitattu sekunneissa).

SEERUMIN TROMBKSAANI ​​B2:N MÄÄRITYS - ELISA

Keräyksen jälkeen veri sentrifugoidaan välittömästi (+4 °C), plasma jäädytetään välittömästi nestetypessä (-190 °C) ja siirretään sitten -80 °C pakastimeen. Seerumin tromboksaani B2 mitataan ELISA:lla kahtena kappaleena valmistajan ohjeiden mukaisesti ja ilmaistaan ​​ng/ml:nä.

PLATELETWORKS (HELENA CORPORATION, USA)

Lyhyesti sanottuna, kun veri on kerätty arakidonihappoa, kollageenia, ADP:tä ja EDTA:ta sisältäviin sarjoihin, verihiutaleiden määrät tehdään impedanssimittauksella (Horiba ABX, Montpellier, Ranska) Helena Laboratoriesin (Helena Point of Care ®) standardiprotokollan mukaisesti. , Texas, USA). Verihiutaleiden aggregaation prosenttiosuus lasketaan seuraavalla kaavalla: aggregaatioprosentti = [verihiutaleet EDTA:ssa - verihiutaleet agonistilla]/ verihiutaleet EDTA:ssa x 100

VERIFYNOW ASPIRIN, ACCUMETRICS, USA

VerifyNow Aspirin point-of-care -järjestelmä (Accumetrics, San Diego, CA, USA) perustuu turbidimetriseen optiseen verihiutaleiden aggregaation havaitsemiseen kokoverestä. Kokoveri siirretään standardipatruunoihin, jotka sisältävät lyofilisoitua valmistetta ihmisen fibrinogeenilla päällystetyistä helmistä ja arakidonihaposta. Kun aggregaatiota tapahtuu, järjestelmä muuntaa valoisuuden läpäisytulokset aspiriinireaktioyksiköiksi (ARU).

IMPACT-R, DIAMED, USA

Sitroitua verta (130 μL) laitetaan testisarjaan (kuoppiin) valmistajan ohjeiden mukaisesti ja altistetaan leikkausvirtaukselle pyörivällä kartiolla 2 minuutin ajan (1800 s-1). Sitten kaivot pestään ja värjätään May Grünwaldilla. Verihiutaleiden kiinnittymistä pintaan arvioidaan Impact-R:ään kytketyllä kuva-analyysijärjestelmällä ja tulokset ilmaistaan ​​värjäytyneen alueen prosentteina.

TILASTOLLINEN ANALYYSI

Kaikissa laskelmissa käytetään ohjelmistoa IBM SPSS 21.0 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL, USA). Tietokannan luo SPSS Data Entry Builder 4.0 käyttämällä kaksoissyöttöjärjestelmää.

PROJEKTIN TOTEUTUSAIKATAULU

Vaihe Kuukausien lukumäärä Kalenteri Päivämäärät Kokeilutoiminnot ja arviot

1. 13 03/2007 - 04/2008 pöytäkirjan kehittäminen
2. 2 05/2008 - 06/2008 Menettelyn viimeistely
3. 5 07/2008 - 12/2008 pöytäkirjan tarkistus
4. 6 01/2009-06/2009 Koulutus
5. 12 07/2009 - 06/2010 Pääkokeen rekrytointi ensiapuun
6. 36 08/2009 - 06/2013 Seuranta
7. 3 07/2013 - 10/2013 Analyysi ja raportointi.

ETURISTIRIITA

Tutkimukseen, tietojen keräämiseen tai analysointiin ei ole ulkopuolista vaikutusta tai sponsoria. Vastaavasti tilastollinen analyysi, käsikirjoitusten valmistelu ja julkaiseminen tehdään kokonaan tutkijoiden itse yhteistyössä USP:n lääketieteellisen tiedekunnan epidemiologien ja tilastotieteilijöiden kanssa. Yritykset ja laitokset, jotka ovat toimittaneet sarjat ja laitteet verihiutaletestejä varten, kuvataan konferensseissa ja julkaisuissa