复发性恶性神经胶质瘤的免疫治疗试点试验

该试验将是先前发表的试验的改编和延续，再现了 12 名患者的原始研究规模。 先前试验的修改包括修改后的寡脱氧核苷酸序列和初始诊断时的治疗，如果在最初的 1 期试验组中未发现限速毒性，则将在附加的 1 期试验中伴随标准疗法作为延续进行。 出于实际目的，标准的 Phase 1 剂量递增研究在当前范例下是不可能的。 尽管我们可能已经确定了 IGF-1R/AS ODN 诱导的肿瘤细胞凋亡（外泌体）的独特生物活性副产物，但很难以典型的方式进行剂量递增。 此外，抗原浓度会以双相方式影响免疫反应：太少或太多都会抑制免疫反应，因此即使已知一种或多种抗原，典型的药理学剂量增加也不会遵循典型的药代动力学。 出于这些原因，我们设计了一个后续的 Phase 1 组，其中 32 名患者将在 4 个队列中接受初始手术治疗，每组 8 名患者。 我们将改变附加 Phase 1 臂中四个队列中每个队列的腔室数量和植入持续时间。 当我们在最初的试验中记录到治疗后肿瘤浸润淋巴细胞增加时，这一观察结果提供了初步支持证据，证明这种治疗性疫苗将引发适应性免疫反应。 我们设计了 Phase 1 组，以通过对肿瘤特异性 T 细胞以及治疗前后循环 M2 巨噬细胞的定量评估来进一步阐明免疫反应。 第一阶段试验的设计将允许对抗原剂量（腔室数量）和暴露时间（腔室停留时间）进行统计分析，因为这两个变量都可能与任何毒性或治疗反应相关。

治疗范例的总结包括：术前血浆白细胞去除术，然后进行组织采集手术，并在直肌鞘中植入多达 10 个腔室，如先前报道的那样，在开颅手术后 24 小时内加上一个仅包含 IGF-1R/AS ODN 的腔室磷酸盐缓冲溶液。 将评估 12 名接受复发性疾病治疗的患者的治疗安全性。 如果安全状况是可以接受的，该试验之后将在托马斯杰斐逊大学医院和杰斐逊神经科学医院进行大约 3 年的额外 1 期试验中继续招募 32 名患者。 所有符合资格标准并同意参加本研究的患者都将成为治疗的潜在候选人。

术前准备——患者将在选择性开颅手术前至少 3 天同意接受血浆白细胞分离术。 PBMC 将被储存用于后续分析 T 细胞反应、产生 IL-10 的 M2 巨噬细胞的存在以及树突状细胞 (DC) 的制备。 将进行 ELISPOT 测定以测量 T 细胞对自体肿瘤细胞和同种异体肿瘤细胞（U118 肿瘤裂解物）的反应，利用交叉引发的 DC 评估治疗后的天然抗神经胶质瘤免疫和任何获得性免疫。 如果 U118 同种异体胶质瘤细胞引起 CTL 反应，则该细胞系可作为未来系列疫苗接种方案的抗原来源。

术前 PET 扫描作为基线，我们可以根据指示比较治疗后 PET 扫描。

手术和肿瘤细胞取出——经验丰富的神经外科医生将对所有研究患者进行开颅手术和基于 MRI 的图像引导肿瘤切除术。 从托马斯杰斐逊大学进行的开颅手术中获得的所有经过测试的恶性神经胶质瘤都表达了 IGF-1R (M. Resnicoff，个人交流）。 在切除过程中，活的肿瘤组织将通过冷冻切片的病理检查得到证实，然后被送到 BL-2 设施进行分解和培养。 永久切片分析将包括 IGF-1R 免疫染色以确定 IGF-1R 的存在。 一旦细胞贴壁，细胞将立即用 IGF-1R/AS ODN 处理。 肿瘤细胞将与 IGF-1R/AS ODN 一起孵育最多 6 小时，然后将 106 个细胞装入每个腔室中，并准备最多目标 10 个腔室。 对于所有组合批次生产，两个额外的辐照室和 300 ul 处理过的自体肿瘤细胞将被送往微生物学，以根据 FDA 要求进行无菌评估。 大于 5 个且小于 10 个腔室将被记为轻微违反协议。 没有活细胞的恢复将成为退出协议的理由。 在植入之前，如前所述，将用 5 Gy 的 X 射线照射腔室。 额外的肿瘤样本将被快速冷冻以用于探索性研究目标。 在开颅手术时，外科医生将创建一个腹部受体部位，用于随后在直肌鞘中植入扩散室。 选择该植入部位的原因如下：(1) 它在之前的人体 1 期试验中产生了客观有利的生物学反应； (2) 该站点将很容易容纳多个腔室植入； (3) 由于伤口的范围、异物及其内容物的引入、直肌鞘和肌肉的脉管系统以及有利的腹股沟淋巴结淋巴引流，该部位应引起强烈的宿主反应； (4) 直肌鞘和肌肉的暴露是神经外科医生所熟悉的，他们通常都进行脑室-腹膜分流术。

生物扩散室植入/外植——自体肿瘤细胞制备、生物扩散室封装、辐射和室植入/外植都是 IND #14379 标准操作程序手册 (SOP 001) 中详述的所有程序。 简而言之，在重症监护病房的床边，患者静脉注射咪达唑仑（Versed，0.05 mg/kg，每 2 - 3 分钟重复一次，以充分镇静，最大剂量为 0.2mg/kg）和芬太尼（Sublimaze，5mg可以每 5 分钟重复一次，最大剂量为 20 毫克），并用最多 30 毫升的 0.5% 布比卡因浸润伤口。 通过适当的局部麻醉和镇静，通过直肌鞘重新打开手术准备的伤口，并在直肌鞘和直肌之间植入多达 10 个腔室。 然后用 2-0 vicryl 缝合线重新缝合护套，并用 3-0 尼龙缝合线重新缝合皮肤。选择 24 小时的植入时间是基于在之前的人体阶段中注意到的良好的安全性和有希望的生物反应1 次试验。 第二天移植涉及相同的过程，包括腔室移植和四层伤口闭合。

后续 MRI 成像时间表 第 28 天和第 56 天的 MRI 检查被认为未作为标准护理进行，因为如果患者仅接受标准护理治疗，它们将无法反映有意义的临床数据。 第一次监测 MRI 通常在手术或其他干预措施（如放疗或化疗）后 3 个月左右获得。 然而，在这次实验性治疗之后，我们预计放射照相反应会比之前的人体试验中记录的要早得多。 在之前的试验中，在治疗后 2 至 27 周的任何时间记录了部分或完全的影像学反应。 我们将这些早期反应解释为免疫介导的生物反应的反映。

后续 PET 成像计划 PET 扫描由研究者自行决定安排，以确认疾病进展。

将考虑对最初参与该方案的预期受试者亚组进行受试者再治疗，这些受试者在诱导疫苗接种后已证明与客观临床和影像学改善相关的免疫活性反应。 具体而言，如果对 T 细胞数量和相关炎症细胞因子、干扰素、INF 反应性细胞因子 CXCL9、CXCL10 和白细胞介素 6 进行连续评估，则显着升高并且与临床和影像学改善相关。

进入方案再治疗阶段的受试者将遵循相同的治疗计划，但术前血浆白细胞分离术除外。 将使用先前收集的血浆白细胞分离术。