再発性悪性神経膠腫に対する免疫療法のパイロット試験

この試験は以前に発表された試験の改作および継続であり、12人の患者という元の研究規模を再現します。 前回の試験からの変更には、修飾されたオリゴデオキシヌクレオチド配列と初回診断時の治療が含まれており、元の第1相試験群で律速毒性が認められなかった場合、継続として追加の第1相試験で併用標準治療が行われることになる。 実際的な目的では、現在のパラダイムでは標準的な第 1 相用量漸増研究は不可能です。 IGF-1R/AS ODN 誘発腫瘍細胞アポトーシス (エキソソーム) の明確な生理活性副産物を同定した可能性がありますが、典型的な方法で用量漸増を実行することは困難です。 また、抗原濃度は二相的に免疫応答に影響を与える可能性があります。少なすぎたり多すぎたりすると免疫応答が弱まる可能性があるため、たとえ抗原がわかっていたとしても、典型的な薬理学的用量の漸増は典型的な薬物動態に従いません。 これらの理由から、我々は、それぞれ 8 人の患者からなる 4 つのコホートにおいて、32 人の患者が初回手術時に治療を受ける後続の第 1 相治療群を設計しました。 追加のフェーズ 1 アームの 4 つのコホートごとに、チャンバー数と移植期間を変更します。 私たちが最初の試験で治療後に腫瘍浸潤リンパ球の増加を記録したとき、この観察は、この治療用ワクチンが適応免疫応答を誘発するという予備的な裏付け証拠を提供しました。 当社は、治療前後の腫瘍特異的 T 細胞および循環 M2 マクロファージの定量的評価により免疫応答をさらに解明するために、フェーズ 1 アームを設計しました。 試験の第 1 相の設計では、抗原の用量 (チャンバーの数) と曝露時間 (チャンバーの滞留時間) の両方の統計分析が可能になります。いずれの変数も毒性または治療反応に関連する可能性があるためです。

治療パラダイムの概要には以下が含まれます：術前血漿白血球除去、その後組織採取を伴う手術、および開頭術後 24 時間以内に以前に報告されているように、IGF-1R/AS ODN を含む直腸鞘内の最大 10 個のチャンバーと、のみを含む 1 個のチャンバーの移植リン酸緩衝生理食塩水。 再発性疾患の治療を受けた12人の患者が治療の安全性を評価される。 安全性プロファイルが許容できる場合、この試験に続いて、トーマス・ジェファーソン大学病院とジェファーソン神経科学病院から約3年間にわたる前向きの継続として追加の第1相試験に32人の患者が参加する予定である。 適格基準を満たし、この研究への参加に同意するすべての患者は、治療の潜在的な候補者となります。

手術前の準備 - 患者は、待機的開頭術の少なくとも 3 日前に血漿白血球除去療法に同意します。 PBMC は、T 細胞応答、IL-10 産生 M2 マクロファージの存在、および樹状細胞 (DC) 調製のその後の分析のために保存されます。 ELISPOT アッセイは、クロスプライム DC を利用して自己腫瘍細胞および同種異系腫瘍細胞 (U118 腫瘍溶解物) に対する T 細胞応答を測定し、天然の抗神経膠腫免疫と治療後の獲得免疫の両方を評価します。 U118 同種異系神経膠腫細胞が CTL 応答を誘発する場合、この細胞株は将来の連続ワクチン接種プロトコルの抗原源として機能する可能性があります。

術前の PET スキャンをベースラインとして、指示に従って治療後の PET スキャンを比較することができます。

手術と腫瘍細胞の回収 - 開頭術とMRIに基づく画像誘導腫瘍切除術は、経験豊富な神経外科医によってすべての研究患者に対して行われます。 トーマス ジェファーソン大学で行われた開頭術から得られた試​​験済みの悪性神経膠腫はすべて、IGF-1R を発現しています (M. レズニコフ、私信）。 切除中、生存可能な腫瘍組織は凍結切片の病理学的検査によって確認され、その後、解砕および培養のために BL-2 施設に送られます。 永久切片分析には、IGF-1R の存在を決定するための IGF-1R 免疫染色が含まれます。 細胞が付着すると、細胞は直ちに IGF-1R/AS ODN で処理されます。 腫瘍細胞はIGF-1R/AS ODNとともに最大6時間インキュベートされ、その後106細胞が各チャンバーにロードされ、目標最大10チャンバーが準備されます。 すべての組み合わせロットの生産では、FDA の要件に従って、無菌性の評価のために、追加の 2 つの照射済みチャンバーと 300 μl の処理済み自己腫瘍細胞が微生物学に送られます。 5 つを超え、10 つ未満のチャンバーは、軽度のプロトコル違反として採点されます。 生存細胞が回収されなかった場合は、プロトコールからの登録解除の理由となります。 注入前に、前述したようにチャンバーに 5 Gy の X 線照射が行われます。 追加の腫瘍サンプルは探索的研究目的のために急速冷凍されます。 開頭術の際、外科医は腹直筋鞘内にその後の拡散チャンバー移植のための腹部アクセプター部位を作成します。 この移植部位は次の理由で選択されました。(1) 以前のヒトに対する第 1 相試験で客観的に良好な生物学的反応が得られたこと。 (2) この部位は複数のチャンバーの移植に容易に対応します。 （３）この部位は、創傷の範囲、異物とその内容物の導入、直筋鞘と筋肉の血管構造、およびこの部位からの良好な鼠径節リンパ排液により、強い宿主反応を誘発するはずである。 (4) 直筋鞘と筋肉の露出は、心室腹膜シャントをよく行う神経外科医にはよく知られています。

生体拡散チャンバーの移植/外植 - 自己腫瘍細胞の調製、生拡散チャンバーへのカプセル化、照射、およびチャンバーの移植/外植はすべて、IND #14379 (SOP 001) の標準操作手順マニュアルに詳細に記載されている手順です。 簡単に説明すると、集中治療室のベッドサイドで、患者は静脈内ミダゾラム (Versed、0.05 mg/kg を 2 ～ 3 分ごとに繰り返し、最大 0.2 mg/kg まで十分な鎮静が得られる) とフェンタニル (Sublimaze、5 mg) で鎮静されます。これを最大用量20mgまで5分ごとに繰り返すことができ、創傷に最大30ccの0.5%ブピビカインを浸潤させた。 適切な局所麻酔と鎮静を用いて、手術で準備した傷を直筋鞘を通して再度開き、直筋鞘と直筋筋の間に最大 10 個のチャンバーを移植します。 次に、シースを 2-0 ビニール縫合糸で再接近させ、皮膚を 3-0 ナイロン縫合糸で再接近させます。 24 時間の移植期間は、良好な安全性プロファイルと、以前のヒト段階で指摘された有望な生物学的反応に基づいて選択されました。 1トライアル。 外植には、翌日の同じプロセスでチャンバー外植と 4 層の創傷閉鎖が含まれます。

フォローアップ MRI 画像スケジュール 28 日目と 56 日目の MRI 研究は、患者が標準治療のみを受けた場合には意味のある臨床データを反映しないため、標準治療として行われていないことが認められています。 最初の監視用 MRI は通常、手術または放射線療法や化学療法などの他の介入の約 3 か月後に取得されます。 しかし、この実験的治療後は、以前の人体試験で記録されているように、はるかに早い段階で X 線写真の反応が現れることが予想されます。 以前の試験では、治療後 2 ～ 27 週間で部分的または完全な X 線写真反応が記録されました。 私たちは、これらの初期反応は免疫介在性の生物学的反応を反映していると解釈します。

フォローアップ PET イメージング スケジュール PET スキャンは、疾患の進行を確認するために研究者の裁量でスケジュールされます。

対象の再治療は、最初にこのプロトコールに参加し、誘導ワクチン接種後の客観的な臨床的およびX線写真上の改善に関連する免疫応答を示した対象の予想されるサブグループに対して考慮されます。 具体的には、T 細胞数と関連する炎症性サイトカイン、インターフェロン、INF 応答性サイトカイン CXCL9、CXCL10、およびインターロイキン 6 の一連の評価が大幅に上昇し、臨床的および X 線検査上の改善と関連している場合です。

プロトコールの再治療段階に入った被験者は、術前の血漿白血球除去を除いて同じ治療計画に従うことになります。 以前に収集された血漿白血球除去が利用されます。