Пилотное испытание иммунотерапии рецидивирующих злокачественных глиом

Это исследование будет адаптацией и продолжением ранее опубликованного исследования, воспроизводя первоначальный размер исследования 12 пациентов. Изменения по сравнению с предыдущим испытанием включают модифицированную последовательность олигодезоксинуклеотидов и лечение при первоначальном диагнозе, которое будет происходить с сопутствующей стандартной терапией в дополнительном исследовании фазы 1 в качестве продолжения, если в исходной группе фазы 1 не будет отмечено ограничивающей скорость токсичности. Для практических целей стандартное исследование фазы 1 с повышением дозы невозможно при существующей парадигме. Хотя мы, возможно, идентифицировали отдельный биоактивный побочный продукт апоптоза опухолевых клеток, индуцированного IGF-1R/AS ODN (экзосомы), трудно выполнить эскалацию дозы обычным способом. Кроме того, концентрация антигена может влиять на иммунный ответ двухфазным образом: слишком мало или слишком много может ослабить иммунный ответ, поэтому, даже если бы антиген или антигены были известны, типичное фармакологическое повышение дозы не соответствовало бы типичной фармакокинетике. По этим причинам мы разработали последующую группу Фазы 1, в которой 32 пациента будут получать терапию при начальной операции в 4 когортах по 8 пациентов в каждой. Мы будем варьировать количество камер и продолжительность имплантации для каждой из четырех групп в дополнительной группе Фазы 1. Когда мы зафиксировали увеличение инфильтрирующих опухоль лимфоцитов после лечения в нашем первоначальном испытании, это наблюдение предоставило предварительные подтверждающие доказательства того, что эта терапевтическая вакцина будет вызывать адаптивный иммунный ответ. Мы разработали группу фазы 1 для дальнейшего выяснения иммунного ответа с помощью количественной оценки опухолеспецифических Т-клеток, а также циркулирующих макрофагов М2 до и после лечения. План фазы 1 исследования позволит провести статистический анализ как дозы антигена (количество камер), так и времени воздействия (время пребывания в камере), поскольку любая переменная может быть связана с любой токсичностью или реакцией на лечение.

Краткое изложение парадигмы лечения включает: предоперационный лейкоферез плазмы, затем хирургическое вмешательство с забором ткани и имплантацией до 10 камер в влагалище прямой мышцы живота с IGF-1R/AS ODN, как сообщалось ранее, в течение 24 часов после краниотомии плюс одна камера, содержащая только фосфатно-солевой буфер. Двенадцать пациентов, получающих лечение от рецидива заболевания, будут оцениваться на предмет безопасности лечения. Если профиль безопасности является приемлемым, за исследованием последует набор 32 пациентов в дополнительное исследование фазы 1 в качестве продолжения в течение примерно 3 лет в больнице Университета Томаса Джефферсона и в больнице Джефферсона для неврологии. Все пациенты, отвечающие критериям приемлемости и согласные участвовать в этом исследовании, будут потенциальными кандидатами на терапию.

Предоперационная подготовка. Пациенты соглашаются на лейкоферез плазмы не менее чем за 3 дня до плановой краниотомии. РВМС будут хранить для последующего анализа ответов Т-клеток, присутствия макрофагов М2, продуцирующих ИЛ-10, и препарата дендритных клеток (ДК). Анализы ELISPOT будут проводиться для измерения ответов Т-клеток на аутологичные опухолевые клетки и аллогенные опухолевые клетки (лизат опухоли U118) с использованием DC с перекрестным праймированием для оценки как нативного иммунитета против глиомы, так и приобретенного иммунитета после лечения. Если клетки аллогенной глиомы U118 вызывают ответ ЦТЛ, эта клеточная линия может служить источником антигена для будущих протоколов серийной вакцинации.

Предоперационное ПЭТ-сканирование в качестве исходного уровня, с которым мы можем сравнить ПЭТ-сканирование после лечения, как указано.

Хирургия и извлечение опухолевых клеток. Краниотомия и резекция опухоли под контролем МРТ будут выполняться опытным нейрохирургом у всех исследуемых пациентов. Все протестированные злокачественные глиомы, полученные в результате трепанации черепа, выполненной в Университете Томаса Джефферсона, экспрессировали IGF-1R (M. Резников, личное сообщение). Во время резекции жизнеспособность опухолевой ткани будет подтверждена патологическим исследованием замороженных срезов, а затем отправлена ​​​​в установку BL-2 для дезагрегации и посева в культуру. Анализ постоянного среза будет включать иммуноокрашивание IGF-1R для определения присутствия IGF-1R. После прикрепления клеток их немедленно обрабатывают IGF-1R/AS ODN. Опухолевые клетки инкубируют с IGF-1R/AS ODN в течение максимум 6 часов, после чего в каждую камеру загружают 106 клеток и готовят максимум 10 целевых камер. Для всех комбинированных партий продукции две дополнительные облученные камеры и 300 мкл обработанных аутологичных опухолевых клеток будут отправлены в микробиологию для оценки стерильности в соответствии с требованиями FDA. Больше 5 и меньше 10 камер будет считаться незначительным нарушением протокола. Обнаружение нежизнеспособных клеток будет основанием для исключения из протокола. Перед имплантацией камеры будут облучены рентгеновским излучением в дозе 5 Гр, как описано ранее. Дополнительный образец опухоли будет подвергнут мгновенной заморозке для исследовательских целей. Во время краниотомии хирург создает абдоминальную акцепторную зону для последующей имплантации диффузионной камеры во влагалище прямой мышцы живота. Это место имплантации было выбрано по следующим причинам: (1) оно давало объективные благоприятные биологические ответы в предшествующем испытании фазы 1 на людях; (2) это место легко подходит для многокамерной имплантации; (3) это место должно вызывать сильную реакцию хозяина из-за обширности раны, введения инородного тела и его содержимого, сосудистой сети влагалища и мышц прямой мышцы живота и благоприятного оттока лимфы из этого места в паховый узел; и (4) обнажение влагалища и мышц прямой мышцы знакомо нейрохирургам, которые обычно выполняют вентрикулярно-перитонеальное шунтирование.

Имплантация/эксплантация биодиффузионной камеры. Подготовка аутологичных опухолевых клеток, инкапсуляция в биодиффузионной камере, облучение и имплантация/эксплантация камеры — все это процедуры, подробно описанные в Руководстве по стандартным операционным процедурам для IND № 14379 (SOP 001). Вкратце, у постели больного в отделении интенсивной терапии пациенту вводят мидазолам внутривенно (Versed, 0,05 мг/кг, повторяя каждые 2-3 минуты до адекватной седации до максимальной дозы 0,2 мг/кг) и фентанил (Sublimaze, 5 мг). которую можно повторять каждые 5 минут до максимальной дозы 20 мг), и рану инфильтрируют до 30 мл 0,5% бупивакаина. При соответствующей местной анестезии и седации подготовленную во время операции рану вновь вскрывают через влагалище прямой мышцы живота и имплантируют до 10 камер между влагалищем прямой мышцы живота и прямой мышцей. Затем оболочка повторно аппроксимируется викриловыми швами 2-0, а кожа повторно аппроксимируется нейлоновыми швами 3-0. 24-часовой период имплантации был выбран на основании благоприятного профиля безопасности и многообещающих биологических реакций, отмеченных в предыдущей фазе у человека. 1 испытание. Эксплантация включает в себя тот же процесс на следующий день с эксплантацией камеры и четырехслойным закрытием раны.

График последующего МРТ Исследования МРТ на 28-й и 56-й дни признаются не проводящимися в качестве стандарта лечения, поскольку они не отражали бы значимых клинических данных, если бы пациенты получали только стандартное лечение. Первые контрольные МРТ обычно получают примерно через 3 месяца после хирургического вмешательства или других вмешательств, таких как облучение или химиотерапия. Однако после этого экспериментального лечения мы ожидаем, что радиографические ответы появятся намного раньше, как это было задокументировано в предыдущем испытании на людях. В предыдущем испытании частичный или полный рентгенологический ответ был зарегистрирован где-то от 2 до 27 недель после лечения. Мы интерпретируем эти ранние ответы как отражение иммунно-опосредованного биологического ответа.

График последующих ПЭТ-визуализаций ПЭТ-сканирование назначается по усмотрению исследователя для подтверждения прогрессирования заболевания.

Повторное лечение субъектов будет рассматриваться для ожидаемой подгруппы субъектов, первоначально участвующих в этом протоколе, которые продемонстрировали иммунокомпетентные ответы, связанные с объективными клиническими и рентгенологическими улучшениями после индукционной вакцинации. В частности, если серийные оценки количества Т-клеток и связанных с ними воспалительных цитокинов, интерферона, INF-чувствительных цитокинов CXCL9, CXCL10 и интерлейкина 6 значительно повышены и связаны с клиническим и рентгенологическим улучшением.

Субъекты, входящие в фазу повторного лечения протокола, будут следовать тому же плану лечения, за исключением предоперационного лейкофереза ​​плазмы. Будет использован ранее собранный лейкоферез плазмы.