Kísérleti immunterápiás vizsgálat visszatérő rosszindulatú gliomákra

Ez a vizsgálat egy korábban publikált vizsgálat adaptációja és folytatása, amely az eredeti, 12 betegből álló vizsgálati méretet reprodukálja. Az előző vizsgálat módosításai közé tartozik a módosított oligodezoxinukleotid szekvencia és a kezdeti diagnóziskor végzett kezelés, amely egy további, 1. fázisú vizsgálatban egyidejű standard terápia mellett következne be, folytatásként, ha az eredeti 1. fázisú karban nem észleltek sebességkorlátozó toxicitást. Gyakorlati okokból standard 1. fázisú dózis-eszkalációs vizsgálat a jelenlegi paradigmával nem lehetséges. Bár lehet, hogy azonosítottuk az IGF-1R/AS ODN által kiváltott tumorsejt-apoptózis különálló bioaktív melléktermékét (exoszómákat), nehéz a tipikus módon dózisemelést végrehajtani. Ezenkívül az antigénkoncentráció kétfázisúan befolyásolhatja az immunválaszt: a túl kevés vagy túl sok tompíthatja az immunválaszt, így még ha az antigén vagy antigének ismertek is, a tipikus farmakológiai dózisemelés nem követné a tipikus farmakokinetikát. Ezen okokból kifolyólag egy 1. fázisú követési kart terveztünk, amelyben 32 beteg részesül terápiában a kezdeti műtét során, 4, egyenként 8 betegből álló csoportban. Mind a négy kohorszban változtatjuk a kamrák számát és a beültetés időtartamát a további 1. fázis karban. Amikor eredeti vizsgálatunkban dokumentáltuk a tumorba infiltráló limfociták számának növekedését a kezelést követően, ez a megfigyelés előzetes alátámasztó bizonyítékot szolgáltatott arra vonatkozóan, hogy ez a terápiás vakcina adaptív immunválaszt vált ki. Az 1. fázisú kart úgy terveztük, hogy tovább tisztázza az immunválaszt a tumorspecifikus T-sejtek, valamint a keringő M2-makrofágok mennyiségi értékelésével a kezelés előtt és után. A vizsgálat 1. fázisának tervezése lehetővé teszi mind az antigéndózis (kamrák száma), mind az expozíciós idő (kamra tartózkodási ideje) statisztikai elemzését, mivel bármelyik változó kapcsolódhat bármilyen toxicitáshoz vagy kezelési válaszhoz.

A kezelési paradigma összefoglalása a következőket tartalmazza: Műtét előtti plazma leukoferézis, majd műtét szövetgyűjtéssel és legfeljebb 10 kamra beültetése a rectus hüvelybe IGF-1R/AS ODN-nel, amint azt korábban közölték a craniotomia után 24 órán belül, plusz egy kamra, amely csak csak foszfáttal pufferolt sóoldat. Tizenkét visszatérő betegség miatt kezelt beteget értékelnek a kezelés biztonságossága szempontjából. Ha a biztonsági profil elfogadható, a vizsgálatot 32 beteg bevonása követi egy további 1. fázisú vizsgálatban, mintegy 3 éven keresztül a Thomas Jefferson Egyetemi Kórházból és a Jefferson Hospital for Neuroscience-ből. Minden olyan beteg, aki megfelel a jogosultsági feltételeknek, és beleegyezik, hogy részt vegyen ebben a vizsgálatban, potenciális jelölt lesz a terápiára.

Műtét előtti előkészítés – A betegek beleegyeznek a plazma leukoferézisbe, legalább 3 nappal az elektív koponyavágás előtt. A PBMC-t tároljuk a T-sejtes válaszok későbbi elemzéséhez, az IL-10-et termelő M2 makrofágok jelenlétéhez és a dendritesejt (DC) preparáláshoz. ELISPOT vizsgálatokat végeznek az autológ tumorsejtekre és allogén tumorsejtekre (U118 tumorlizátum) adott T-sejt-válaszok mérésére, kereszt-indító DC felhasználásával mindkét natív glióma-ellenes immunitás értékelésére, bármilyen, a kezelés után szerzett immunitást is. Ha az U118 allogén gliómasejtek CTL választ váltanak ki, ez a sejtvonal antigénforrásként szolgálhat a jövőbeni sorozatos vakcinázási protokollokhoz.

A műtét előtti PET-vizsgálat kiindulópontként, amellyel összehasonlíthatjuk a kezelés utáni PET-vizsgálatokat a jelzett módon.

Sebészet és tumorsejt-visszakeresés – A koponya- és MRI-alapú képvezérelt tumorreszekciót minden vizsgálati betegen tapasztalt idegsebész végzi el. A Thomas Jefferson Egyetemen végzett craniotomiákból származó összes tesztelt rosszindulatú glióma expresszálta az IGF-1R-t (M. Resnicoff, személyes kommunikáció). A reszekció során az életképes daganatszövetet a fagyasztott metszetek patológiás vizsgálatával igazolják, majd egy BL-2 létesítménybe küldik szétbontásra és tenyészetbe történő lemezezésre. A permanens metszetelemzés egy IGF-1R immunfestést tartalmaz az IGF-1R jelenlétének meghatározására. A sejtek csatlakoztatása után a sejteket azonnal IGF-1R/AS ODN-nel kezeljük. A tumorsejteket IGF-1R/AS ODN-nel legfeljebb 6 órán keresztül inkubáljuk, majd 106 sejtet töltünk be minden kamrába, és készítünk elő maximum 10 célkamrát. Valamennyi kombinációs tétel gyártása esetén két további besugárzott kamrát és 300 ul kezelt autológ tumorsejteket küldenek a mikrobiológiai vizsgálatra, hogy az FDA követelményei szerint értékeljék a sterilitást. 5-nél nagyobb és 10-nél kevesebb kamrát kisebb protokollsértésnek kell minősíteni. Az életképes sejtek visszanyerése a protokollból való kilépés oka. A beültetés előtt a kamrákat 5 Gy röntgensugárzással sugározzuk be a korábban leírtak szerint. Egy további daganatmintát gyorsfagyasztásnak vetünk alá feltáró kutatási célok érdekében. A craniotomia során a sebész hasi akceptor helyet hoz létre a diffúziós kamra beültetéséhez a rectus hüvelybe. Ezt a beültetési helyet a következő okok miatt választották: (1) objektív, kedvező biológiai válaszokat adott a korábbi humán 1. fázisú kísérletben; (2) ezen a helyen könnyen elhelyezhető többkamrás beültetés; (3) ennek a helynek erős gazdaválaszt kell kiváltania a seb kiterjedése, az idegen test és annak tartalmának bejutása, a végbélhüvely és az izom érrendszere, valamint a inguinalis csomópont kedvező nyirokelvezetése miatt; és (4) a rectus hüvely és az izom expozíciója ismert az idegsebészek számára, akik mindannyian gyakran végeznek kamrai-peritoneális sönteket.

Biodiffúziós kamra beültetés/explantáció – Autológ tumorsejtek előkészítése, kapszulázás a biodiffúziós kamrákba, besugárzás és a kamra beültetése/explantációja mind az IND #14379 (SOP 001) szabványos működési eljárások kézikönyvében részletezett eljárások. Röviden, az ágy mellett az intenzív osztályon a beteget intravénás midazolammal (Versed, 0,05 mg/ttkg, 2-3 percenként ismételve a megfelelő szedációig 0,2 mg/kg maximális dózisig) és fentanillal (Sublimaze, 5 mg) szedálják. amely 5 percenként megismételhető maximum 20 mg-os adagig) és a sebet legfeljebb 30 cm3 0,5%-os bupivicainnal infiltrálják. Megfelelő helyi érzéstelenítéssel és szedációval a műtéten előkészített sebet a rectus hüvelyen keresztül újra kinyitják, és legfeljebb 10 kamrát ültetnek be a rectus hüvely és az egyenes izom közé. Ezután a hüvelyt 2-0 vikril varrattal, a bőrt pedig 3-0 nylon varrattal közelítjük meg. A 24 órás beültetési időszakot az előző humán fázisban észlelt kedvező biztonsági profil és ígéretes biológiai válaszok alapján választottuk ki. 1 próba. Az explantáció ugyanazt a folyamatot tartalmazza másnap, kamra explantációval és négyrétegű sebzárással.

A 28. és 56. napon végzett MRI-vizsgálatok nem tekinthetők standard ellátásnak, mivel nem tükröznének érdemi klinikai adatokat, ha a betegek csak standard ellátásban részesülnének. Az első ellenőrző MRI-t általában körülbelül 3 hónappal a műtét vagy más beavatkozás, például sugárkezelés vagy kemoterápia után készítik. Ezt a kísérleti kezelést követően azonban sokkal korábban várjuk a radiográfiás válaszokat, amint azt az előző humán kísérletben dokumentálták. Az előző kísérletben a részleges vagy teljes radiográfiai válaszokat a kezelés után 2-27 héttel dokumentálták. Ezeket a korai válaszokat úgy értelmezzük, mint egy immunközvetített biológiai válasz tükröződését.

A PET-képalkotás nyomon követési ütemezése A PET-vizsgálatokat a vizsgáló belátása szerint ütemezi be a betegség progressziójának megerősítésére.

Az alanyok újbóli kezelését megfontolják azon személyek azon várható alcsoportja esetében, akik kezdetben részt vettek ebben a protokollban, akik immunkompetens válaszokat mutattak, amelyek objektív klinikai és radiográfiai javulással járnak az indukciós vakcinázást követően. Pontosabban, ha a T-sejtek számának és a kapcsolódó gyulladásos citokinek, az interferon, az INF-re reagáló citokinek, a CXCL9, CXCL10 és az interleukin 6 sorozatos értékelése jelentősen megemelkedett, és klinikai és radiográfiai javulással jár.

A protokoll újrakezelési fázisába belépő alanyok ugyanazt a kezelési tervet fogják követni, kivéve a műtét előtti plazma leukoferézist. A korábban összegyűjtött plazma leukoferézis felhasználásra kerül.