口腔液收集装置的评价

评估 VioOne 口腔液样本收集装置（本文称为 VioOne 装置）的研究将包括如下所述的几个子研究：

A. 恢复研究

本研究将确定使用 VioOne 样本采集设备采集的非吸烟者口腔液中掺入可替宁的回收百分比。

1. 样品采集

   将根据 VioOne 包装插页从五个自称不吸烟的人那里收集口腔液。 然后，收集的样品将单独加入可替宁，浓度为 0、5、10、15 或 25ng/mL。 每个浓度准备两套。 一组将在测试前储存在 2-8°C 下，另一组将按照常规运输条件运输并在返回时进行测试。

2. 测试

   然后，每个样品将使用 Calbiotech 可替宁 ELISA 测定进行一式两份的测试，并将通过将检测到的浓度与加标浓度进行比较来计算每个水平的回收百分比。

3. 数据分析 将通过将检测到的浓度与加标浓度进行比较来计算每个水平的回收率百分比。

B. 灵敏度/准确度研究 该研究的目的是表明，当使用 VioOne 样品采集装置采集的口腔液样品时，Calbiotech 可替宁 ELISA 能够区分吸烟者和非吸烟者。

1. 样品收集 至少两个研究地点将参与这项研究。 大约 218 人将参加这项研究。 至少 58 个样本必须来自自称吸烟者。 口腔液样本将从个人那里收集，他们将以匿名方式提供知情同意和自我报告，无论该个人是否吸烟以及平均每天吸烟的香烟数量。 本研究将从每个人身上采集两个样本。 一份样本将使用 VioOne 收集设备收集，一份将使用市售的唾液收集杯收集。

   招募患者将没有年龄、性别或种族标准。

2. 测试 使用 VioOne 样本采集设备收集的所有样本将使用 Calbiotech Cotinine ELISA 进行测试，使用唾液收集杯收集的纯唾液样本将通过 GC/MS 进行测试，后者是金标准方法。
3. 数据分析 GC/MS 结果将用作评估使用 VioOne 口腔液收集装置采集的口腔液样本进行检测的临床灵敏度和特异性的金标准。

C. 测定特异性研究 将测试饮料和家用材料对口腔液中可替宁检测的干扰。

1. 样本收集 口腔液样本将从自述为非吸烟者的个人处收集，并将合并所得样本/缓冲液基质。

   将池分成 15 个等分试样，并分别添加以下 14 种化合物中的每一种。 池中的一份等分试样将保持未加标。 然后将每个加标等分试样进一步分成三个等分试样。 一份将仅掺入该化合物，一份将进一步掺入 5ng/mL 可替宁，另一份将进一步掺入 15ng/mL 可替宁。

2. 测试 每个样品将一式两份进行测试。

   除非另有说明，否则将以 10% 的最终浓度添加以下化合物：

   糖水 酒精（乙醇） 牙膏 全血 (10mg/mL) 蔓越莓汁 双氧水 小苏打 氯化钠 橙汁 可乐止咳糖浆 防腐水 血红蛋白 (10mg/mL)

3. 数据分析结果将与精确度研究中测量的预期性能进行比较。 （精准研究不需要使用采集的人类口腔液）

D. 检测特异性研究

潜在食物和其他口腔污染物的影响将在一项定时研究中进行评估。

1. 样品采集

   本研究将招募 10 名自称不吸烟的人。

   将在研究开始前立即使用 VioOne 样本采集设备从每个人身上采集一份样本。 然后每个人都会得到一块硬糖来食用。 额外的样本将在消费后立即使用 VioOne 收集，消费后十分钟，然后每三十分钟一次，最多三个小时。

   收集完所有样品后，将每个样品分成两等份。 一份将添加 5ng/mL 可替宁，另一份将添加 15ng/mL 可替宁。

2. 测试 每个样品/尖峰/时间点将一式三份进行测试
3. 数据分析结果将与精确度研究中测量的预期性能进行比较。 （精准研究不需要使用采集的人类口腔液）

E. 样本收集缓冲液中样本的稳定性 将进行一项研究以确定样本收集缓冲液中储存的样本在不同温度下随时间的稳定性。

1. 样品采集

   将从自报为非吸烟者的个体收集口腔液样本，并将合并所得样本/缓冲液基质。

   池将分成三个等分试样。 一份将添加 7.5ng/mL 可替宁，一份将添加 10ng/mL 可替宁，一份将保持未添加。

   每个加标和非加标将被等分到四个试管中，并在 -20 oC、2-8oC、室温和 37oC 下储存。

2. 测试

   每个样品将在第 0、7、14、21、28 和 35 天进行八次重复测试。

3. 数据分析

当样品在给定日期的可替宁浓度的 95% 置信区间与第 0 天的重叠时，样品被认为在测试时间点稳定。

F. ELISA 和设备稳定性

将进行一项长期稳定性研究，以确定 Calbiotech Cotinine ELISA 测定法以及 VioOne 样本采集设备的稳定性和有效期。

1. 样品采集

   在每个测试时间点，将收集三个人的样本。 每个人将提供三个样品 - 三批 VioOne 样品收集设备中的每一个。

   从每批 VioOne 样品收集设备中获得的所得样品/缓冲液矩阵将被合并（每个池总共 3 个单独的样品，总共 3 个池）。

   然后将生成的池分成两个等分试样。 将在一份样品中加入 5ng/mL 可替宁和 25ng/mL 可替宁。

2. 测试

   每个加标样品将在 21 个月内重复测试八次。 在测试过程中，将使用三个 ELISA 测定批次。

3. 数据分析

当在每个时间点测试的样品产生的结果在 95% 置信区间内，可替宁浓度与第 0 天的浓度重叠时，Calbiotech 可替宁 ELISA 测定和 VioOne 样品收集装置被认为是稳定的。