Evaluering af en oral væskeopsamlingsanordning

Undersøgelsen til evaluering af VioOne Oral Fluid Sample Device (heri benævnt VioOne Device) vil bestå af flere delstudier som beskrevet nedenfor:

A. Gendannelsesundersøgelse

Denne undersøgelse vil bestemme den procentvise genvinding af cotinin tilsat oralvæsken hos ikke-rygere opsamlet med VioOne Sample Collection Device.

1. Samling af prøver

   Oral væske vil blive opsamlet i henhold til VioOne indlægssedlen fra fem personer, der selv er rapporteret at være ikke-rygere. De indsamlede prøver tilsættes derefter individuelt cotinin til koncentrationer på 0, 5, 10, 15 eller 25 ng/ml. To sæt af hver koncentration vil blive forberedt. Et sæt vil blive opbevaret ved 2-8°C før testning, og et sæt vil blive afsendt efter rutinemæssige forsendelsesbetingelser og testet ved returnering.

2. Afprøvning

   Hver prøve vil derefter blive testet i to eksemplarer med Calbiotech Cotinine ELISA-analysen, og den procentvise genvinding vil blive beregnet for hvert niveau ved at sammenligne de påviste koncentrationer med de forhøjede koncentrationer.

3. Dataanalyse Procent genvinding vil blive beregnet for hvert niveau ved at sammenligne de detekterede koncentrationer med de forhøjede koncentrationer.

B. Sensitivitets-/nøjagtighedsundersøgelse Formålet med undersøgelsen er at vise, at Calbiotech Cotinine ELISA er i stand til at skelne rygere fra ikke-rygere, når orale væskeprøver opsamlet med VioOne Sample Collection Device anvendes.

1. Prøveindsamling Minimum to undersøgelsessteder vil deltage i denne undersøgelse. Cirka 218 personer vil blive tilmeldt denne undersøgelse. Mindst 58 indsamlede prøver skal være fra selverklærede rygere. Mundvæskeprøver vil blive indsamlet fra enkeltpersoner, som vil give det informerede samtykke og selvrapportere på en anonym måde, om personen er ryger eller ej, og antallet af cigaretter, der i gennemsnit ryger om dagen. To prøver vil blive indsamlet fra hver person til denne undersøgelse. Én prøve vil blive indsamlet ved hjælp af VioOne-indsamlingsanordningen, og én vil blive indsamlet ved hjælp af en kommercielt tilgængelig spytopsamlingskop.

   Der vil ikke være nogen alder, køn eller race kriterier for at indskrive patienterne.

2. Testning Alle prøver indsamlet med VioOne Sample Collection Device vil blive testet med Calbiotech Cotinine ELISA, og de pæne spytprøver indsamlet med spytopsamlingskopperne vil blive testet af GC/MS, hvor sidstnævnte er guldstandardmetoden.
3. Dataanalyse GC/MS-resultaterne vil blive brugt som guldstandarden til at vurdere analysens kliniske sensitivitet og specificitet ved hjælp af orale væskeprøver indsamlet med VioOne Oral Fluid Collection Device.

C. Analysespecificitetsundersøgelse Drikkevarer og husholdningsmaterialer vil blive testet for interferens i påvisningen af ​​cotinin i oral væske.

1. Prøvetagning Oral væskeprøver vil blive indsamlet fra personer, der selv har rapporteret som ikke-rygere, og den resulterende prøve/buffermatrix vil blive samlet.

   Puljen vil blive opdelt i 15 alikvoter og individuelt tilsat hver af de følgende 14 forbindelser. En alikvot fra puljen vil forblive uden spidser. Hver tilsat aliquot vil derefter blive yderligere opdelt i tre aliquoter. Én aliquot forbliver kun tilsat med forbindelsen, en alikvot vil blive tilsat yderligere 5 ng/ml cotinin, og en alikvot vil blive tilsat yderligere 15ng/ml Cotinin.

2. Testning Hver prøve vil derefter blive testet i to eksemplarer.

   Følgende forbindelser vil hver blive tilsat til en slutkoncentration på 10 %, medmindre andet er angivet:

   Sukker Vand Alkohol (Ethanol) Tandpasta Fuldblod (10mg/ml) Tranebærjuice Hydrogenperoxid Bagepulver Natriumchlorid Appelsinjuice Cola Hostesirup Antiseptisk Vand Hæmoglobin (10mg/ml)

3. Dataanalyseresultater vil blive sammenlignet med den forventede ydeevne som målt i præcisionsundersøgelsen. (præcisionsundersøgelsen kræver ikke brug af opsamlet human oral væske)

D. Assayspecificitetsundersøgelse

Effekten af ​​potentielle fødevarer og andre forurenende stoffer i mundhulen vil blive evalueret i en tidsbestemt undersøgelse.

1. Samling af prøver

   Ti personer, der selv er rapporteret at være ikke-rygere, vil blive rekrutteret til denne undersøgelse.

   En prøve vil blive indsamlet ved hjælp af VioOne Sample Collection Device fra hver enkelt person umiddelbart før starten af ​​undersøgelsen. Hver enkelt vil derefter få et stykke hårdt slik at indtage. Yderligere prøver vil blive indsamlet med VioOne umiddelbart efter forbrug, ti minutter efter forbrug og derefter hvert 30. minut op til tre timer.

   Efter at alle prøver er indsamlet, vil hver prøve blive opdelt i to alikvoter. En alikvot vil blive tilsat 5 ng/ml cotinin, og en alikvot vil blive tilsat 15 ng/ml cotinin.

2. Testning Hver prøve/spids/tidspunkt vil blive testet i tre eksemplarer
3. Dataanalyseresultater vil blive sammenlignet med den forventede ydeevne som målt i præcisionsundersøgelsen. (præcisionsundersøgelsen kræver ikke brug af opsamlet human oral væske)

E. Stabilitet af prøve i prøveopsamlingsbuffer Der vil blive udført en undersøgelse for at fastslå stabiliteten af ​​prøver opbevaret i prøveopsamlingsbuffer ved forskellige temperaturer over tid.

1. Samling af prøver

   Orale væskeprøver vil blive indsamlet fra personer, der selv har rapporteret som ikke-rygere, og den resulterende prøve/buffermatrix vil blive samlet.

   Puljen vil blive opdelt i tre alikvoter. En alikvot vil blive tilsat 7,5 ng/ml cotinin, en alikvot vil blive tilsat 10 ng/ml cotinin, og en aliquot vil forblive ikke-tilsat.

   Hver af spidserne og ikke-piggene opdeles i fire rør og opbevares ved -20 oC, 2-8oC, stuetemperatur og 37oC.

2. Afprøvning

   Hver prøve vil blive testet i otte replikater på dag 0, 7, 14, 21, 28 og 35.

3. Dataanalyse

Prøven anses for at være stabil på testtidspunktet, hvor 95 % konfidensintervallet for cotininkoncentrationen på en given dag for prøven overlapper det på dag 0.

F. ELISA og enhedsstabilitet

En langsigtet stabilitetsundersøgelse vil blive udført for at fastslå stabiliteten og udløbsdateringen af ​​Calbiotech Cotinine ELISA-analysen sammen med VioOne-prøveindsamlingsanordningen.

1. Samling af prøver

   Ved hvert testtidspunkt vil der blive indsamlet prøver fra tre personer. Hver person vil give tre prøver - en med hver af tre partier af VioOne Sample Collection Devices.

   Den resulterende prøve/buffermatrix opnået fra hvert lot af VioOne prøveindsamlingsenhed vil blive samlet (i alt 3 individuelle prøver pr. pulje og i alt 3 puljer).

   De resulterende puljer vil derefter blive opdelt i to alikvoter. En alikvot vil blive tilsat 5ng/ml cotinin og 25ng/ml cotinin.

2. Afprøvning

   Hver tilsat prøve vil blive testet i otte gentagelser over en periode på 21 måneder. I løbet af testen vil der blive brugt tre ELISA-assaylots.

3. Dataanalyse

Calbiotech Cotinine ELISA-analysen og VioOne Sample Collection Device anses for at være stabile, når prøverne, der testes på hvert tidspunkt, giver resultater inden for 95 % konfidensintervallet for cotininkoncentrationen, der overlapper dag 0.