Bewertung einer Oralflüssigkeitssammelvorrichtung

Die Studie zur Bewertung des VioOne Speichelprobenentnahmegeräts (hier als VioOne Gerät bezeichnet) besteht aus mehreren Teilstudien, wie unten beschrieben:

A. Erholungsstudie

Diese Studie bestimmt die prozentuale Wiederfindung von Cotinin, das in die Mundflüssigkeit von Nichtrauchern gespiked wurde und mit dem VioOne-Probenentnahmegerät gesammelt wurde.

1. Beispielsammlung

   Mundflüssigkeit wird gemäß der VioOne-Packungsbeilage von fünf Personen gesammelt, die nach eigenen Angaben Nichtraucher sind. Die entnommenen Proben werden dann einzeln mit Cotinin in Konzentrationen von 0, 5, 10, 15 oder 25 ng/ml versetzt. Von jeder Konzentration werden zwei Sätze vorbereitet. Ein Satz wird vor dem Testen bei 2–8 °C gelagert und ein Satz wird gemäß den üblichen Versandbedingungen versandt und bei der Rücksendung getestet.

2. Testen

   Jede Probe wird dann doppelt mit dem Cotinin-ELISA-Test von Calbiotech getestet, und die prozentuale Wiederfindung wird für jede Stufe berechnet, indem die nachgewiesenen Konzentrationen mit den dotierten Konzentrationen verglichen werden.

3. Datenanalyse Die prozentuale Wiederfindung wird für jede Stufe berechnet, indem die nachgewiesenen Konzentrationen mit den dotierten Konzentrationen verglichen werden.

B. Sensitivitäts-/Genauigkeitsstudie Ziel der Studie ist es zu zeigen, dass der Cotinin-ELISA von Calbiotech in der Lage ist, Raucher von Nichtrauchern zu unterscheiden, wenn Speichelproben verwendet werden, die mit dem VioOne-Probenentnahmegerät entnommen wurden.

1. Probenentnahme Mindestens zwei Studienzentren werden an dieser Studie teilnehmen. Etwa 218 Personen werden in diese Studie aufgenommen. Mindestens 58 gesammelte Proben müssen von selbsternannten Rauchern stammen. Es werden Mundflüssigkeitsproben von Personen gesammelt, die die Einverständniserklärung abgeben und auf anonyme Weise selbst berichten, ob die Person Raucher ist oder nicht, und wie viele Zigaretten pro Tag im Durchschnitt geraucht werden. Für diese Studie werden von jeder Person zwei Proben entnommen. Eine Probe wird mit dem VioOne-Sammelgerät und eine Probe mit einem handelsüblichen Speichelsammelbecher entnommen.

   Es gibt keine Alters-, Geschlechts- oder Rassenkriterien für die Aufnahme der Patienten.

2. Testen Alle mit dem VioOne-Probenentnahmegerät gesammelten Proben werden mit dem Cotinin-ELISA von Calbiotech getestet, und die mit den Speichelsammelbechern gesammelten Speichelproben werden mit GC/MS getestet, wobei letzteres die Goldstandardmethode ist.
3. Datenanalyse Die GC/MS-Ergebnisse werden als Goldstandard zur Beurteilung der klinischen Sensitivität und Spezifität des Assays unter Verwendung von Mundflüssigkeitsproben verwendet, die mit dem VioOne Oral Fluid Collection Device entnommen wurden.

C. Assay-Spezifitätsstudie Getränke und Haushaltsmaterialien werden auf Interferenz beim Nachweis von Cotinin in Mundflüssigkeit getestet.

1. Probenentnahme Mundflüssigkeitsproben werden von Personen gesammelt, die sich selbst als Nichtraucher gemeldet haben, und die resultierende Proben-/Puffermatrix wird gepoolt.

   Der Pool wird in 15 Aliquots aufgeteilt und jede der folgenden 14 Verbindungen einzeln versetzt. Ein Aliquot aus dem Pool bleibt ohne Zusatz. Jedes dotierte Aliquot wird dann weiter in drei Aliquots geteilt. Ein Aliquot bleibt nur mit der Verbindung versetzt, ein Aliquot wird weiter mit 5 ng/ml Cotinin versetzt und ein Aliquot wird weiter mit 15 ng/ml Cotinin versetzt.

2. Testen Jede Probe wird dann doppelt getestet.

   Die folgenden Verbindungen werden jeweils mit einer Endkonzentration von 10 % dotiert, sofern nicht anders angegeben:

   Zucker Wasser Alkohol (Ethanol) Zahnpasta Vollblut (10 mg/ml) Cranberrysaft Wasserstoffperoxid Backpulver Natriumchlorid Orangensaft Cola Hustensaft Antiseptisches Wasser Hämoglobin (10 mg/ml)

3. Die Ergebnisse der Datenanalyse werden mit der erwarteten Leistung verglichen, die in der Präzisionsstudie gemessen wurde. (Die Präzisionsstudie erfordert keine Verwendung von gesammelter menschlicher Mundflüssigkeit)

D. Assay-Spezifitätsstudie

Die Wirkung potenzieller Nahrungsmittel und anderer Kontaminanten in der Mundhöhle wird in einer zeitgesteuerten Studie bewertet.

1. Beispielsammlung

   Zehn Personen, die nach eigenen Angaben Nichtraucher sind, werden für diese Studie rekrutiert.

   Unmittelbar vor Beginn der Studie wird von jeder Person eine Probe mit dem VioOne-Probenentnahmegerät entnommen. Jede Person erhält dann ein Stück Bonbon zum Verzehr. Zusätzliche Proben werden mit VioOne unmittelbar nach dem Verzehr gesammelt, zehn Minuten nach dem Verzehr, dann alle dreißig Minuten bis zu drei Stunden.

   Nachdem alle Proben gesammelt wurden, wird jede Probe in zwei Aliquots geteilt. Ein Aliquot wird mit 5 ng/ml Cotinin und ein Aliquot mit 15 ng/ml Cotinin versetzt.

2. Testen Jede Probe/Spitze/Zeitpunkt wird dreifach getestet
3. Die Ergebnisse der Datenanalyse werden mit der erwarteten Leistung verglichen, die in der Präzisionsstudie gemessen wurde. (Die Präzisionsstudie erfordert keine Verwendung von gesammelter menschlicher Mundflüssigkeit)

E. Stabilität der Probe im Probensammelpuffer Es wird eine Studie durchgeführt, um die Stabilität von Proben festzustellen, die im Probensammelpuffer bei verschiedenen Temperaturen im Laufe der Zeit gelagert werden.

1. Beispielsammlung

   Oralflüssigkeitsproben werden von Personen gesammelt, die sich selbst als Nichtraucher gemeldet haben, und die resultierende Proben-/Puffermatrix wird gepoolt.

   Der Pool wird in drei Aliquots aufgeteilt. Ein Aliquot wird mit 7,5 ng/mL Cotinin versetzt, ein Aliquot wird mit 10 ng/mL Cotinin versetzt und ein Aliquot bleibt nicht versetzt.

   Jeder Spike und der Nicht-Spike wird in vier Röhrchen aliquotiert und bei -20 oC, 2-8 oC, Raumtemperatur und 37 oC gelagert.

2. Testen

   Jede Probe wird in acht Wiederholungen an Tag 0, 7, 14, 21, 28 und 35 getestet.

3. Datenanalyse

Die Probe gilt zum Testzeitpunkt als stabil, wenn sich das 95 %-Konfidenzintervall für die Cotininkonzentration an einem bestimmten Tag für die Probe mit dem von Tag 0 überschneidet.

F. ELISA und Gerätestabilität

Es wird eine Langzeitstabilitätsstudie durchgeführt, um die Stabilität und das Ablaufdatum des Cotinin-ELISA-Assays von Calbiotech zusammen mit dem VioOne-Probenentnahmegerät zu ermitteln.

1. Beispielsammlung

   Zu jedem Testzeitpunkt werden Proben von drei Personen gesammelt. Jede Person stellt drei Proben zur Verfügung – eine mit jeder der drei Chargen von VioOne-Probenentnahmegeräten.

   Die aus jeder Charge des VioOne-Probenentnahmegeräts erhaltene resultierende Proben-/Puffermatrix wird gepoolt (insgesamt 3 Einzelproben pro Pool und insgesamt 3 Pools).

   Die resultierenden Pools werden dann in zwei Aliquots geteilt. Ein Aliquot wird mit 5 ng/ml Cotinin und 25 ng/ml Cotinin versetzt.

2. Testen

   Jede dotierte Probe wird in acht Wiederholungen über einen Zeitraum von 21 Monaten getestet. Im Laufe des Tests werden drei ELISA-Testchargen verwendet.

3. Datenanalyse

Der Cotinin-ELISA-Assay von Calbiotech und das VioOne-Probenentnahmegerät gelten als stabil, wenn die zu jedem Zeitpunkt getesteten Proben Ergebnisse innerhalb des 95-%-Konfidenzintervalls für die Cotininkonzentration liefern, die sich mit der von Tag 0 überschneidet.