Egy szájüregi folyadékgyűjtő eszköz értékelése

A VioOne szájüregi folyadékmintagyűjtő eszköz (a továbbiakban: VioOne eszköz) értékelésére irányuló tanulmány több altanulmányból áll, az alábbiak szerint:

A. Helyreállítási tanulmány

Ez a tanulmány meghatározza a VioOne mintagyűjtő eszközzel gyűjtött, nemdohányzók szájnedvébe kevert kotinin százalékos visszanyerését.

1. Minta kollekció

   A szájüregi folyadékot a VioOne betegtájékoztatója szerint gyűjtik öt olyan személytől, akik saját bevallásuk szerint nem dohányzók. Az összegyűjtött mintákat ezután egyenként kotininnal 0, 5, 10, 15 vagy 25 ng/ml koncentrációra tegyük. Mindegyik koncentrációból két sorozat készül. Egy készletet 2-8°C-on tárolunk a tesztelés előtt, egy készletet pedig rutin szállítási feltételek szerint szállítunk, és visszaküldéskor teszteljük.

2. Tesztelés

   Ezután minden mintát két párhuzamosban tesztelnek a Calbiotech Cotinine ELISA assay-vel, és a százalékos visszanyerést minden szintre úgy számítják ki, hogy összehasonlítják a kimutatott koncentrációkat a kiugró koncentrációkkal.

3. Adatelemzés A százalékos visszanyerést minden szinthez úgy számítjuk ki, hogy az észlelt koncentrációkat összehasonlítjuk a kiugró koncentrációkkal.

B. Érzékenység/pontosság vizsgálat A vizsgálat célja annak bemutatása, hogy a Calbiotech Cotinine ELISA képes megkülönböztetni a dohányosokat a nemdohányzóktól, ha a VioOne mintagyűjtő eszközzel gyűjtött szájüregi folyadékmintákat használnak.

1. Mintagyűjtés Ebben a vizsgálatban legalább két vizsgálati helyszín vesz részt. Körülbelül 218 személyt vonnak be ebbe a tanulmányba. Legalább 58 begyűjtött mintának saját bevallású dohányostól kell származnia. Szájfolyadék-mintát vesznek az egyénektől, akik tájékozott beleegyezést adnak, és névtelenül bejelentik, hogy dohányos-e vagy sem, és átlagosan napi átlagosan elszívott cigarettákat. Ehhez a vizsgálathoz minden egyéntől két mintát veszünk. Egy mintát a VioOne gyűjtőeszközzel, egyet pedig a kereskedelemben kapható nyálgyűjtő csészével kell begyűjteni.

   A betegek beíratásakor nem lesz életkor, nem vagy faji kritérium.

2. Tesztelés A VioOne mintagyűjtő eszközzel gyűjtött összes mintát a Calbiotech Cotinine ELISA-val, a nyálgyűjtő csészékkel gyűjtött tiszta nyálmintákat pedig GC/MS-vel teszteljük, ez utóbbi az arany standard módszer.
3. Adatelemzés A GC/MS eredményeket arany standardként fogják használni a VioOne szájfolyadékgyűjtő eszközzel gyűjtött szájfolyadékminták felhasználásával végzett vizsgálat klinikai érzékenységének és specificitásának értékeléséhez.

C. A vizsgálat specifitásának vizsgálata Az italokat és a háztartási anyagokat megvizsgálják a szájfolyadékban lévő kotinin kimutatásában való interferencia szempontjából.

1. Mintagyűjtés Az Oral Fluid mintákat azoktól az egyénektől gyűjtik, akik saját magukat nemdohányzónak vallották, és a kapott minta/puffer mátrixot egyesítik.

   A gyűjteményt 15 alikvot részre osztják, és a következő 14 vegyület mindegyikét külön-külön hozzáadják. A medencéből származó egy alikvot rész mentes marad. Ezután minden tüskés alikvotot tovább osztanak három aliquot részre. Egy alikvot rész csak a vegyülettel lesz megtöltve, egy alikvot rész további 5 ng/ml cotininnel, egy alikvot rész pedig 15 ng/ml cotininnel lesz kiegészítve.

2. Tesztelés Ezután minden mintát két példányban tesztelnek.

   A következő vegyületek mindegyikét 10%-os végkoncentrációban növelik, hacsak másképp nem jelezzük:

   Cukor víz alkohol (etanol) teljes vér fogkrém (10mg/ml) áfonyalé hidrogén-peroxid szódabikarbóna nátrium-klorid narancslé kóla köhögés elleni szirup Fertőtlenítő víz hemoglobin (10mg/ml)

3. Az adatelemzés eredményeit összehasonlítják a precíziós vizsgálatban mért elvárt teljesítménnyel. (a precíziós vizsgálathoz nincs szükség összegyűjtött emberi szájfolyadék felhasználására)

D. Vizsgálati specifitási vizsgálat

A potenciális élelmiszerek és egyéb szájüreg-szennyező anyagok hatását egy időzített vizsgálatban értékelik.

1. Minta kollekció

   Tíz olyan személyt vesznek fel, akik saját bevallásuk szerint nemdohányzók.

   Közvetlenül a vizsgálat megkezdése előtt minden egyéntől egy mintát vesznek a VioOne mintagyűjtő eszközzel. Ezután minden egyén kap egy darab kemény cukorkát, amelyet elfogyaszthat. A VioOne segítségével további mintákat gyűjtenek az elfogyasztás után azonnal, tíz perccel az elfogyasztás után, majd harminc percenként három órán keresztül.

   Az összes minta begyűjtése után minden mintát két alikvot részre osztanak. Egy alikvot részhez 5 ng/ml kotinint, egy aliquot részhez pedig 15 ng/ml kotinint adunk.

2. Tesztelés Minden mintát/csúcsot/időpontot három példányban tesztelünk
3. Az adatelemzés eredményeit összehasonlítják a precíziós vizsgálatban mért elvárt teljesítménnyel. (a precíziós vizsgálathoz nincs szükség összegyűjtött emberi szájfolyadék felhasználására)

E. A minta stabilitása a mintagyűjtő pufferben Egy vizsgálatot végeznek a mintagyűjtő pufferben tárolt minták stabilitásának megállapítására különböző hőmérsékleteken az idő függvényében.

1. Minta kollekció

   Az Oral Fluid mintákat azoktól az egyénektől gyűjtik, akikről bevallásuk szerint nem dohányoztak, és a kapott minta/puffer mátrixot összevonják.

   A medencét három részre osztják fel. Egy alikvot részhez 7,5 ng/ml kotinint, egy alikvot részhez 10 ng/ml kotinint, és egy aliquot részhez nem kell hozzáadni.

   A tüskék és a nem tüskék mindegyikét négy csőbe osztják, és -20 oC-on, 2-8 oC-on, szobahőmérsékleten és 37 oC-on tárolják.

2. Tesztelés

   Minden mintát nyolc ismétlésben tesztelnek a 0., 7., 14., 21., 28. és 35. napon.

3. Adatelemzés

A mintát abban a vizsgálati időpontban tekintjük stabilnak, amikor a minta adott napján a kotininkoncentráció 95%-os konfidenciaintervalluma átfedi a 0. napét.

F. ELISA és az eszközstabilitás

Hosszú távú stabilitási vizsgálatot végeznek a Calbiotech Cotinine ELISA teszt és a VioOne mintagyűjtő eszköz stabilitásának és lejárati dátumának megállapítására.

1. Minta kollekció

   Minden vizsgálati időpontban három személytől mintát vesznek. Minden személy három mintát biztosít – egyet a VioOne mintagyűjtő eszközök három tételéhez.

   A VioOne mintagyűjtő eszköz egyes tételeiből kapott minta/puffer mátrix összevonásra kerül (poolonként összesen 3 egyedi minta és összesen 3 pool).

   A kapott készleteket ezután két aliquot részre osztjuk. Egy aliquot részhez 5 ng/ml kotinint és 25 ng/ml kotinint adunk.

2. Tesztelés

   Minden tüskés mintát nyolc ismétlésben tesztelnek 21 hónapon keresztül. A tesztelés során három ELISA vizsgálati tételt használnak fel.

3. Adatelemzés

A Calbiotech Cotinine ELISA teszt és a VioOne mintagyűjtő eszköz akkor tekinthető stabilnak, ha az egyes időpontokban vizsgált minták a 95%-os konfidenciaintervallumon belül adnak eredményeket a 0. napon átfedő kotininkoncentrációra vonatkozóan.