Évaluation d'un dispositif de collecte de liquide buccal

L'étude visant à évaluer le dispositif de prélèvement d'échantillons de liquide buccal VioOne (ci-après dénommé dispositif VioOne) consistera en plusieurs sous-études décrites ci-dessous :

A. Étude de récupération

Cette étude déterminera le pourcentage de récupération de la cotinine enrichie dans le liquide buccal de non-fumeurs collectée avec le dispositif de prélèvement d'échantillons VioOne.

1. Collecte d'échantillons

   Le liquide buccal sera collecté conformément à la notice VioOne auprès de cinq personnes qui se sont déclarées non-fumeurs. Les échantillons collectés seront ensuite dopés individuellement avec de la cotinine à des concentrations de 0, 5, 10, 15 ou 25 ng/mL. Deux séries de chaque concentration seront préparées. Un jeu sera stocké à 2-8°C avant le test et un jeu sera expédié selon les conditions d'expédition de routine et testé au retour.

2. Essai

   Chaque échantillon sera ensuite testé en double avec le test Calbiotech Cotinine ELISA et le pourcentage de récupération sera calculé pour chaque niveau en comparant les concentrations détectées aux concentrations dopées.

3. Analyse des données Le pourcentage de récupération sera calculé pour chaque niveau en comparant les concentrations détectées aux concentrations dopées.

B. Étude de sensibilité/précision L'objectif de l'étude est de montrer que le Calbiotech Cotinine ELISA est capable de distinguer les fumeurs des non-fumeurs lorsque des échantillons de liquide oral collectés avec le dispositif de prélèvement d'échantillons VioOne sont utilisés.

1. Prélèvement d'échantillons Au moins deux sites d'étude participeront à cette étude. Environ 218 personnes seront inscrites à cette étude. Au moins 58 échantillons collectés doivent provenir de fumeurs auto-déclarés. Des échantillons de liquide buccal seront prélevés sur des individus, qui donneront leur consentement éclairé et déclareront de manière anonyme si l'individu est fumeur ou non et le nombre de cigarettes fumées par jour en moyenne. Deux échantillons seront prélevés sur chaque individu pour cette étude. Un échantillon sera prélevé à l'aide du dispositif de prélèvement VioOne et un autre à l'aide d'un gobelet de prélèvement de salive disponible dans le commerce.

   Il n'y aura aucun critère d'âge, de sexe ou de race pour l'inscription des patients.

2. Tests Tous les échantillons collectés avec le VioOne Sample Collection Device seront testés avec le Calbiotech Cotinine ELISA et les échantillons de salive purs collectés avec les gobelets de collecte de salive seront testés par GC/MS, cette dernière étant la méthode de référence.
3. Analyse des données Les résultats GC/MS seront utilisés comme référence pour évaluer la sensibilité et la spécificité cliniques du test à l'aide d'échantillons de liquide oral collectés avec le dispositif de prélèvement de liquide oral VioOne.

C. Étude de spécificité du test Les boissons et les articles ménagers seront testés pour détecter les interférences dans la détection de la cotinine dans le liquide buccal.

1. Prélèvement d'échantillons Des échantillons de liquide buccal seront prélevés sur des personnes qui se sont déclarées non-fumeurs et la matrice échantillon/tampon résultante sera regroupée.

   Le pool sera divisé en 15 aliquotes et additionné individuellement de chacun des 14 composés suivants. Une partie aliquote de la piscine restera sans dopage. Chaque aliquot enrichi sera ensuite divisé en trois aliquots. Une aliquote restera dopée avec le composé uniquement, une aliquote sera encore dopée avec 5 ng/mL de cotinine et une aliquote sera encore dopée avec 15 ng/mL de cotinine.

2. Tests Chaque échantillon sera ensuite testé en double.

   Sauf indication contraire, les composés suivants seront dopés chacun à une concentration finale de 10 % :

   Sucre Eau Alcool (éthanol) Dentifrice Sang total (10 mg/mL) Jus de canneberge Peroxyde d'hydrogène Bicarbonate de soude Chlorure de sodium Jus d'orange Cola Sirop contre la toux Eau antiseptique Hémoglobine (10 mg/mL)

3. Analyse des données Les résultats seront comparés aux performances attendues telles que mesurées dans l'étude de précision. (l'étude de précision ne nécessite pas l'utilisation de fluide oral humain collecté)

D. Étude de spécificité du dosage

L'effet des aliments potentiels et d'autres contaminants de la cavité buccale sera évalué dans une étude chronométrée.

1. Collecte d'échantillons

   Dix personnes se déclarant non-fumeurs seront recrutées pour cette étude.

   Un échantillon sera prélevé à l'aide du dispositif de prélèvement d'échantillons VioOne sur chaque individu immédiatement avant le début de l'étude. Chaque individu recevra ensuite un morceau de bonbon dur à consommer. Des échantillons supplémentaires seront prélevés avec VioOne immédiatement après la consommation, dix minutes après la consommation, puis toutes les trente minutes jusqu'à trois heures.

   Une fois tous les échantillons collectés, chaque échantillon sera divisé en deux aliquotes. Une aliquote sera dopée avec 5 ng/mL de cotinine et une aliquote sera dopée avec 15 ng/mL de cotinine.

2. Tests Chaque échantillon/pic/point dans le temps sera testé en triple exemplaire
3. Analyse des données Les résultats seront comparés aux performances attendues telles que mesurées dans l'étude de précision. (l'étude de précision ne nécessite pas l'utilisation de fluide oral humain collecté)

E. Stabilité de l'échantillon dans le tampon de prélèvement d'échantillons Une étude sera réalisée pour établir la stabilité des échantillons stockés dans le tampon de prélèvement d'échantillons à différentes températures dans le temps.

1. Collecte d'échantillons

   Des échantillons de liquide buccal seront prélevés sur des individus qui se sont déclarés non-fumeurs et la matrice échantillon/tampon résultante sera regroupée.

   Le pool sera divisé en trois parties aliquotes. Une aliquote sera dopée avec 7,5 ng/mL de cotinine, une aliquote sera dopée avec 10 ng/mL de cotinine et une aliquote restera non dopée.

   Chacun des dopés et le non dopé seront aliquotés dans quatre tubes et conservés à -20 oC, 2-8 oC, température ambiante et 37 oC.

2. Essai

   Chaque échantillon sera testé en huit répétitions aux jours 0, 7, 14, 21, 28 et 35.

3. L'analyse des données

L'échantillon est considéré comme stable au moment du test lorsque l'intervalle de confiance à 95 % pour la concentration de cotinine à un jour donné pour l'échantillon chevauche celui du jour 0.

F. ELISA et stabilité du dispositif

Une étude de stabilité à long terme sera réalisée pour établir la stabilité et la date d'expiration du test Calbiotech Cotinine ELISA avec le dispositif de prélèvement d'échantillons VioOne.

1. Collecte d'échantillons

   À chaque moment du test, des échantillons de trois personnes seront prélevés. Chaque personne fournira trois échantillons - un avec chacun des trois lots de dispositifs de prélèvement d'échantillons VioOne.

   La matrice échantillon/tampon résultante obtenue à partir de chaque lot de VioOne Sample Collection Device sera regroupée (un total de 3 échantillons individuels par pool et un total de 3 pools).

   Les pools résultants seront ensuite divisés en deux aliquotes. Une aliquote sera dopée avec 5 ng/mL de cotinine et 25 ng/mL de cotinine.

2. Essai

   Chaque échantillon dopé sera testé en huit répétitions sur une période de 21 mois. Au cours des tests, trois lots de tests ELISA seront utilisés.

3. L'analyse des données

Le test Calbiotech Cotinine ELISA et le VioOne Sample Collection Device sont considérés comme stables lorsque les échantillons testés à chaque instant produisent des résultats dans l'intervalle de confiance de 95 % pour la concentration de cotinine qui chevauche celle du jour 0.