Avaliação de um dispositivo de coleta de fluido oral

O estudo para avaliar o dispositivo de coleta de amostras de fluido oral VioOne (aqui referido como dispositivo VioOne) consistirá em vários subestudos, conforme descrito abaixo:

A. Estudo de Recuperação

Este estudo determinará a porcentagem de recuperação de cotinina adicionada ao fluido oral de não fumantes coletada com o VioOne Sample Collection Device.

1. Coleta de amostras

   O fluido oral será coletado de acordo com a bula do VioOne de cinco indivíduos que relataram não ser fumantes. As amostras coletadas serão então adicionadas individualmente com cotinina nas concentrações de 0, 5, 10, 15 ou 25 ng/mL. Serão preparados dois conjuntos de cada concentração. Um conjunto será armazenado entre 2-8°C antes do teste e um conjunto será enviado de acordo com as condições de remessa de rotina e testado na devolução.

2. teste

   Cada amostra será então testada em duplicata com o ensaio Calbiotech Cotinine ELISA e a porcentagem de recuperação será calculada para cada nível comparando as concentrações detectadas com as concentrações adicionadas.

3. Análise de dados A recuperação percentual será calculada para cada nível comparando as concentrações detectadas com as concentrações adicionadas.

B. Estudo de sensibilidade/precisão O objetivo do estudo é mostrar que o Calbiotech Cotinine ELISA é capaz de distinguir fumantes de não fumantes quando amostras de fluidos orais coletadas com o VioOne Sample Collection Device são usadas.

1. Coleta de amostras Um mínimo de dois centros de estudo participarão deste estudo. Aproximadamente 218 indivíduos serão incluídos neste estudo. Pelo menos 58 amostras coletadas devem ser de fumantes autodeclarados. Amostras de fluido oral serão coletadas de indivíduos, que darão o consentimento informado e autorreferirão de forma anônima se o indivíduo é ou não fumante e número de cigarros fumados por dia em média. Duas amostras serão coletadas de cada indivíduo para este estudo. Uma amostra será coletada usando o VioOne Collection Device e a outra será coletada usando um copo de coleta de saliva disponível comercialmente.

   Não haverá critérios de idade, sexo ou raça para inscrever os pacientes.

2. Teste Todas as amostras coletadas com o VioOne Sample Collection Device serão testadas com o Calbiotech Cotinine ELISA e as amostras de saliva pura coletadas com os copos de coleta de saliva serão testadas por GC/MS, sendo este último o método padrão ouro.
3. Análise de dados Os resultados de GC/MS serão usados ​​como padrão-ouro para avaliar a sensibilidade clínica e a especificidade do ensaio usando amostras de fluidos orais coletadas com o VioOne Oral Fluid Collection Device.

C. Estudo de Especificidade do Ensaio Bebidas e materiais domésticos serão testados quanto à interferência na detecção de cotinina no fluido oral.

1. Coleta de amostras Amostras de fluido oral serão coletadas de indivíduos autodeclarados como não fumantes e a amostra/matriz tampão resultante será agrupada.

   O pool será dividido em 15 alíquotas e adicionado individualmente a cada um dos 14 compostos a seguir. Uma alíquota do pool permanecerá sem adição. Cada alíquota enriquecida será então dividida em três alíquotas. Uma alíquota permanecerá enriquecida apenas com o composto, uma alíquota será enriquecida com 5 ng/mL de cotinina e uma alíquota será enriquecida com 15 ng/mL de cotinina.

2. Teste Cada amostra será testada em duplicata.

   Os seguintes compostos serão adicionados a uma concentração final de 10%, a menos que indicado de outra forma:

   Açúcar Água Álcool (Etanol) Pasta de Dente Sangue Total (10mg/mL) Suco de Cranberry Peróxido de Hidrogênio Bicarbonato de Sódio Cloreto de Sódio Suco de Laranja Coca-Cola Xarope para Tosse Água Antisséptica Hemoglobina (10mg/mL)

3. Análise de dados Os resultados serão comparados com o desempenho esperado conforme medido no estudo de precisão. (o estudo de precisão não requer o uso de fluido oral humano coletado)

D. Estudo de Especificidade do Ensaio

O efeito de alimentos potenciais e outros contaminantes da cavidade oral será avaliado em um estudo cronometrado.

1. Coleta de amostras

   Dez indivíduos autodeclarados como não fumantes serão recrutados para este estudo.

   Uma amostra será coletada usando o VioOne Sample Collection Device de cada indivíduo imediatamente antes do início do estudo. Cada indivíduo receberá um pedaço de bala dura para consumir. Amostras adicionais serão coletadas com o VioOne imediatamente após o consumo, dez minutos após o consumo e depois a cada trinta minutos até três horas.

   Após a coleta de todas as amostras, cada amostra será dividida em duas alíquotas. Uma alíquota será enriquecida com 5 ng/mL de cotinina e uma alíquota será enriquecida com 15 ng/mL de cotinina.

2. Teste Cada amostra/pico/ponto de tempo será testado em triplicado
3. Análise de dados Os resultados serão comparados com o desempenho esperado conforme medido no estudo de precisão. (o estudo de precisão não requer o uso de fluido oral humano coletado)

E. Estabilidade da amostra no tampão de coleta de amostras Um estudo será realizado para estabelecer a estabilidade das amostras armazenadas no tampão de coleta de amostras em várias temperaturas ao longo do tempo.

1. Coleta de amostras

   Amostras de Fluidos Orais serão coletadas de indivíduos autodeclarados como não fumantes e a amostra/matriz tampão resultante será agrupada.

   O pool será dividido em três alíquotas. Uma alíquota será enriquecida com 7,5 ng/mL de cotinina, uma alíquota será enriquecida com 10 ng/mL de cotinina e uma alíquota permanecerá sem enriquecimento.

   Cada um dos spikes e os non-spike serão aliquotados em quatro tubos e armazenados a -20 oC, 2-8oC, temperatura ambiente e 37oC.

2. teste

   Cada amostra será testada em oito réplicas nos dias 0, 7, 14, 21, 28 e 35.

3. Análise de dados

A amostra é considerada estável no momento do teste quando o intervalo de confiança de 95% para a concentração de cotinina em um determinado dia para a amostra se sobrepõe ao do dia 0.

F. ELISA e estabilidade do dispositivo

Um estudo de estabilidade de longo prazo será realizado para estabelecer a estabilidade e a data de validade do ensaio Calbiotech Cotinine ELISA junto com o dispositivo de coleta de amostras VioOne.

1. Coleta de amostras

   Em cada ponto de tempo de teste, serão coletadas amostras de três indivíduos. Cada indivíduo fornecerá três amostras - uma com cada um dos três lotes de dispositivos de coleta de amostras VioOne.

   A matriz de amostra/tampão resultante obtida de cada lote do VioOne Sample Collection Device será reunida (um total de 3 amostras individuais por pool e um total de 3 pools).

   Os pools resultantes serão então divididos em duas alíquotas. Uma alíquota será enriquecida com 5 ng/mL de cotinina e 25 ng/mL de cotinina.

2. teste

   Cada amostra enriquecida será testada em oito réplicas durante um período de 21 meses. Ao longo do teste, três lotes de ensaio ELISA serão usados.

3. Análise de dados

O ensaio Calbiotech Cotinine ELISA e o VioOne Sample Collection Device são considerados estáveis ​​quando as amostras testadas em cada ponto de tempo produzem resultados dentro do intervalo de confiança de 95% para a concentração de cotinina que se sobrepõe à do dia 0.