Evaluatie van een apparaat voor het verzamelen van orale vloeistoffen

Het onderzoek ter evaluatie van het VioOne-apparaat voor het verzamelen van orale vloeistoffen (hierna VioOne-apparaat genoemd) zal uit verschillende deelonderzoeken bestaan, zoals hieronder beschreven:

A. Herstelonderzoek

Deze studie zal het percentage recuperatie bepalen van cotinine verrijkt in de orale vloeistof van niet-rokers verzameld met het VioOne-monsterafnameapparaat.

1. Voorbeeld verzameling

   Bij vijf personen die zelf hebben aangegeven niet-rokers te zijn, zal volgens de VioOne-bijsluiter orale vloeistof worden verzameld. De verzamelde monsters worden vervolgens afzonderlijk verrijkt met cotinine tot concentraties van 0, 5, 10, 15 of 25 ng/ml. Van elke concentratie worden twee sets bereid. Eén set wordt voorafgaand aan het testen bewaard bij 2-8 °C en één set wordt verzonden volgens de gebruikelijke verzendingsvoorwaarden en getest bij retournering.

2. Testen

   Elk monster wordt vervolgens in tweevoud getest met de Calbiotech Cotinine ELISA-assay en het percentage herstel wordt voor elk niveau berekend door de gedetecteerde concentraties te vergelijken met de verrijkte concentraties.

3. Gegevensanalyse Percentage herstel wordt berekend voor elk niveau door de gedetecteerde concentraties te vergelijken met de verrijkte concentraties.

B. Onderzoek naar gevoeligheid/nauwkeurigheid Het doel van het onderzoek is om aan te tonen dat de Calbiotech Cotinine ELISA in staat is rokers van niet-rokers te onderscheiden wanneer monsters van orale vloeistoffen die met het VioOne-monsterafnameapparaat zijn verzameld, worden gebruikt.

1. Monsterafname Er zullen minimaal twee onderzoekslocaties deelnemen aan dit onderzoek. Ongeveer 218 personen zullen aan deze studie deelnemen. Ten minste 58 verzamelde monsters moeten afkomstig zijn van zelfverklaarde rokers. Orale vloeistofmonsters zullen worden verzameld van individuen, die de geïnformeerde toestemming zullen geven en zelf op anonieme wijze zullen rapporteren of het individu al dan niet een roker is en het aantal sigaretten dat gemiddeld per dag wordt gerookt. Voor dit onderzoek zullen van elk individu twee monsters worden verzameld. Er wordt één monster afgenomen met het VioOne-afnamehulpmiddel en één wordt afgenomen met een in de handel verkrijgbare speekselopvangbeker.

   Er zijn geen leeftijds-, geslachts- of rascriteria voor het inschrijven van de patiënten.

2. Testen Alle monsters die zijn verzameld met het VioOne-apparaat voor monsterafname zullen worden getest met de Calbiotech Cotinine ELISA en de onversneden speekselmonsters die zijn verzameld met de speekselopvangbekers zullen worden getest met GC/MS, de laatste is de gouden standaardmethode.
3. Gegevensanalyse De GC/MS-resultaten zullen worden gebruikt als de gouden standaard voor het beoordelen van de klinische sensitiviteit en specificiteit van de assay met behulp van monsters van orale vloeistof die zijn verzameld met het VioOne-apparaat voor het verzamelen van orale vloeistoffen.

C. Testspecificiteitsonderzoek Dranken en huishoudmaterialen zullen worden getest op interferentie bij de detectie van cotinine in orale vloeistof.

1. Monsterafname Orale vloeistofmonsters worden verzameld van personen die zelf hebben aangegeven niet-rokers te zijn en de resulterende monster-/buffermatrix wordt samengevoegd.

   De pool wordt verdeeld in 15 aliquots en elk van de volgende 14 verbindingen wordt afzonderlijk verrijkt. Eén aliquot uit de pool blijft onbespikt. Elk verrijkt aliquot wordt vervolgens verder verdeeld in drie aliquots. Eén aliquot blijft verrijkt met alleen de verbinding, één aliquot wordt verder verrijkt met 5 ng/ml cotinine en één aliquot wordt verder verrijkt met 15 ng/ml cotinine.

2. Testen Elk monster wordt vervolgens in tweevoud getest.

   De volgende verbindingen worden elk verrijkt met een eindconcentratie van 10%, tenzij anders vermeld:

   Suiker Water Alcohol (Ethanol) Tandpasta Volbloed (10 mg/ml) Veenbessensap Waterstofperoxide Zuiveringszout Natriumchloride Sinaasappelsap Cola Hoestsiroop Antiseptisch water Hemoglobine (10 mg/ml)

3. Gegevensanalyse De resultaten worden vergeleken met de verwachte prestaties zoals gemeten in de precisiestudie. (voor de precisiestudie is het gebruik van verzamelde menselijke orale vloeistof niet vereist)

D. Testspecificiteitsonderzoek

Het effect van mogelijke voedsel- en andere verontreinigingen in de mondholte zal worden geëvalueerd in een getimede studie.

1. Voorbeeldverzameling

   Voor dit onderzoek zullen tien personen worden aangeworven die naar eigen zeggen niet-rokers zijn.

   Direct voor de start van het onderzoek wordt bij elk individu één monster genomen met behulp van het VioOne-apparaat voor monsterafname. Elk individu krijgt dan een stuk hard snoep om te consumeren. Met VioOne worden extra monsters genomen onmiddellijk na consumptie, tien minuten na consumptie en vervolgens om de dertig minuten tot maximaal drie uur.

   Nadat alle monsters zijn verzameld, wordt elk monster verdeeld in twee aliquots. Eén aliquot wordt verrijkt met 5 ng/ml cotinine en één aliquot wordt verrijkt met 15 ng/ml cotinine.

2. Testen Elk monster/piek/tijdstip wordt in drievoud getest
3. Gegevensanalyse De resultaten worden vergeleken met de verwachte prestaties zoals gemeten in de precisiestudie. (voor de precisiestudie is het gebruik van verzamelde menselijke orale vloeistof niet vereist)

E. Stabiliteit van monster in monsterverzamelbuffer Er zal een studie worden uitgevoerd om de stabiliteit vast te stellen van monsters die in de monsterverzamelbuffer zijn opgeslagen bij verschillende temperaturen in de loop van de tijd.

1. Voorbeeldverzameling

   Monsters van orale vloeistof zullen worden verzameld van personen die zelf hebben aangegeven niet-rokers te zijn en de resulterende monster/buffermatrix zal worden samengevoegd.

   De pool wordt opgesplitst in drie aliquots. Eén aliquot wordt verrijkt met 7,5 ng/ml cotinine, één aliquot wordt verrijkt met 10 ng/ml cotinine en één aliquot blijft niet-verrijkt.

   Elk van de spikes en de niet-spike wordt in vier buisjes verdeeld en bewaard bij -20 °C, 2-8 °C, kamertemperatuur en 37 °C.

2. Testen

   Elk monster wordt getest in acht herhalingen op dag 0, 7, 14, 21, 28 en 35.

3. Gegevens analyse

Het monster wordt als stabiel beschouwd op het testtijdstip wanneer het 95%-betrouwbaarheidsinterval voor de cotinineconcentratie op een bepaalde dag voor het monster dat van dag 0 overlapt.

F. ELISA en apparaatstabiliteit

Er zal een stabiliteitsonderzoek op lange termijn worden uitgevoerd om de stabiliteit en vervaldatum van de Calbiotech Cotinine ELISA-test samen met het VioOne-monsterafnameapparaat vast te stellen.

1. Voorbeeldverzameling

   Op elk testtijdstip worden monsters van drie personen verzameld. Elk individu levert drie monsters - één met elk van de drie partijen VioOne-monsterafname-apparaten.

   De resulterende monster-/buffermatrix verkregen uit elke partij VioOne-apparaat voor monsterafname wordt gepoold (in totaal 3 individuele monsters per pool en in totaal 3 pools).

   De resulterende pools worden vervolgens verdeeld in twee aliquots. Eén portie wordt verrijkt met 5 ng/ml cotinine en 25 ng/ml cotinine.

2. Testen

   Elk verrijkt monster wordt gedurende een periode van 21 maanden in acht herhalingen getest. Tijdens het testen zullen drie ELISA-assaypartijen worden gebruikt.

3. Gegevensanalyse

De Cotinine ELISA-assay van Calbiotech en het VioOne-apparaat voor monsterafname worden als stabiel beschouwd wanneer de monsters die op elk tijdstip worden getest, resultaten opleveren binnen het 95%-betrouwbaarheidsinterval voor de cotinineconcentratie die die van dag 0 overlapt.