Valutazione di un dispositivo di raccolta del fluido orale

Lo studio per valutare il dispositivo per la raccolta dei campioni di fluido orale VioOne (di seguito denominato dispositivo VioOne) consisterà in diversi studi secondari come descritto di seguito:

A. Studio sul recupero

Questo studio determinerà la percentuale di recupero di cotinina addizionata al fluido orale di non fumatori raccolti con il VioOne Sample Collection Device.

1. Raccolta campioni

   Il fluido orale verrà raccolto secondo il foglietto illustrativo di VioOne da cinque individui dichiarati non fumatori. I campioni raccolti verranno quindi addizionati individualmente con cotinina a concentrazioni di 0, 5, 10, 15 o 25 ng/mL. Saranno preparati due set di ciascuna concentrazione. Un set verrà conservato a 2-8°C prima del test e un set verrà spedito secondo le normali condizioni di spedizione e testato al momento della restituzione.

2. Test

   Ogni campione verrà quindi testato in duplicato con il test Calbiotech Cotinine ELISA e la percentuale di recupero verrà calcolata per ciascun livello confrontando le concentrazioni rilevate con le concentrazioni addizionate.

3. Analisi dei dati La percentuale di recupero verrà calcolata per ciascun livello confrontando le concentrazioni rilevate con le concentrazioni arricchite.

B. Studio di sensibilità/accuratezza L'obiettivo dello studio è dimostrare che il Calbiotech Cotinine ELISA è in grado di distinguere i fumatori dai non fumatori quando vengono utilizzati campioni di fluido orale raccolti con il VioOne Sample Collection Device.

1. Raccolta dei campioni A questo studio parteciperanno almeno due centri di studio. Circa 218 persone saranno arruolate in questo studio. Almeno 58 campioni raccolti devono provenire da fumatori dichiarati. Saranno raccolti campioni di fluido orale da individui, che daranno il consenso informato e autodichiareranno in modo anonimo se l'individuo è o meno un fumatore e il numero di sigarette fumate in media al giorno. Due campioni saranno raccolti da ogni individuo per questo studio. Un campione verrà raccolto utilizzando il dispositivo di raccolta VioOne e uno verrà raccolto utilizzando una tazza per la raccolta della saliva disponibile in commercio.

   Non ci saranno criteri di età, sesso o razza per l'arruolamento dei pazienti.

2. Test Tutti i campioni raccolti con il VioOne Sample Collection Device saranno testati con il Calbiotech Cotinine ELISA ei campioni di saliva pura raccolti con le coppette per la raccolta della saliva saranno testati mediante GC/MS, quest'ultimo essendo il metodo gold standard.
3. Analisi dei dati I risultati GC/MS verranno utilizzati come gold standard per valutare la sensibilità clinica e la specificità del test utilizzando campioni di fluido orale raccolti con il dispositivo di raccolta del fluido orale VioOne.

C. Studio sulla specificità del dosaggio Bevande e materiali domestici saranno testati per l'interferenza nella rilevazione della cotinina nel fluido orale.

1. Raccolta dei campioni I campioni di fluido orale saranno raccolti da individui autodichiarati come non fumatori e la risultante matrice campione/tampone verrà raggruppata.

   Il pool sarà diviso in 15 aliquote e aggiunto individualmente a ciascuno dei seguenti 14 composti. Un'aliquota dal pool rimarrà non addizionata. Ciascuna aliquota addizionata verrà quindi ulteriormente suddivisa in tre aliquote. Un'aliquota rimarrà addizionata solo con il composto, un'aliquota sarà ulteriormente addizionata con 5 ng/mL di cotinina e un'aliquota sarà ulteriormente addizionata con 15 ng/mL di cotinina.

2. Test Ogni campione verrà quindi testato in duplicato.

   I seguenti composti saranno addizionati ciascuno a una concentrazione finale del 10% se non diversamente specificato:

   Zucchero Acqua Alcool (etanolo) Dentifricio Sangue intero (10 mg/mL) Succo di mirtillo Perossido di idrogeno Bicarbonato di sodio Cloruro di sodio Succo d'arancia Cola Sciroppo per la tosse Acqua antisettica Emoglobina (10 mg/mL)

3. I risultati dell'analisi dei dati saranno confrontati con le prestazioni previste misurate nello studio di precisione. (lo studio di precisione non richiede l'uso di fluido orale umano raccolto)

D. Studio sulla specificità del dosaggio

L'effetto di potenziali alimenti e altri contaminanti del cavo orale sarà valutato in uno studio a tempo.

1. Raccolta di campioni

   Per questo studio verranno reclutati dieci individui autodichiarati non fumatori.

   Un campione verrà raccolto utilizzando il dispositivo di raccolta campioni VioOne da ciascun individuo immediatamente prima dell'inizio dello studio. Ad ogni individuo verrà quindi dato un pezzo di caramella dura da consumare. Ulteriori campioni verranno raccolti con VioOne immediatamente dopo il consumo, dieci minuti dopo il consumo, quindi ogni trenta minuti fino a tre ore.

   Dopo che tutti i campioni sono stati raccolti, ciascun campione sarà diviso in due aliquote. Un'aliquota sarà addizionata con 5 ng/mL di cotinina e un'aliquota sarà addizionata con 15 ng/mL di cotinina.

2. Test Ogni campione/picco/punto temporale sarà testato in triplice copia
3. I risultati dell'analisi dei dati saranno confrontati con le prestazioni previste misurate nello studio di precisione. (lo studio di precisione non richiede l'uso di fluido orale umano raccolto)

E. Stabilità del campione nel tampone di raccolta dei campioni Verrà eseguito uno studio per stabilire la stabilità dei campioni conservati nel tampone di raccolta dei campioni a varie temperature nel tempo.

1. Raccolta di campioni

   I campioni di fluido orale saranno raccolti da individui autodichiarati come non fumatori e la risultante matrice campione/tampone verrà aggregata.

   Il pool sarà suddiviso in tre aliquote. Un'aliquota sarà addizionata con 7,5 ng/mL di cotinina, un'aliquota sarà addizionata con 10 ng/mL di cotinina e un'aliquota rimarrà non addizionata.

   Ciascuno degli spike e del non-spike sarà aliquotato in quattro provette e conservato a -20 oC, 2-8oC, temperatura ambiente e 37oC.

2. Test

   Ogni campione sarà testato in otto replicati al giorno 0, 7, 14, 21, 28 e 35.

3. Analisi dei dati

Il campione è considerato stabile al momento del test quando l'intervallo di confidenza del 95% per la concentrazione di cotinina in un dato giorno per il campione si sovrappone a quello del giorno 0.

F. ELISA e stabilità del dispositivo

Verrà eseguito uno studio di stabilità a lungo termine per stabilire la stabilità e la data di scadenza del test Calbiotech Cotinine ELISA insieme al dispositivo di raccolta campioni VioOne.

1. Raccolta di campioni

   Ad ogni momento del test, verranno raccolti campioni da tre individui. Ciascun individuo fornirà tre campioni, uno per ciascuno dei tre lotti di dispositivi per la raccolta dei campioni VioOne.

   La risultante matrice campione/tampone ottenuta da ciascun lotto di VioOne Sample Collection Device sarà raggruppata (per un totale di 3 singoli campioni per pool e per un totale di 3 pool).

   I pool risultanti saranno quindi divisi in due aliquote. Un'aliquota verrà arricchita con 5 ng/mL di cotinina e 25 ng/mL di cotinina.

2. Test

   Ogni campione addizionato sarà testato in otto repliche per un periodo di 21 mesi. Nel corso dei test verranno utilizzati tre lotti di test ELISA.

3. Analisi dei dati

Il test Calbiotech Cotinine ELISA e il VioOne Sample Collection Device sono considerati stabili quando i campioni analizzati in ciascun punto temporale producono risultati entro l'intervallo di confidenza del 95% per la concentrazione di cotinina che si sovrappone a quella del giorno 0.