Hodnocení zařízení pro sběr ústní tekutiny

Studie k vyhodnocení zařízení pro odběr vzorků ústní tekutiny VioOne (zde označované jako zařízení VioOne) se bude skládat z několika dílčích studií, jak je popsáno níže:

A. Studie zotavení

Tato studie určí procento výtěžku kotininu nasyceného do ústní tekutiny nekuřáků odebrané pomocí zařízení pro odběr vzorků VioOne.

1. Kolekce vzorků

   Ústní tekutina bude odebírána podle příbalového letáku VioOne od pěti jednotlivců, kteří se sami prohlásili za nekuřáky. Odebrané vzorky pak budou individuálně obohaceny kotininem na koncentrace 0, 5, 10, 15 nebo 25 ng/ml. Z každé koncentrace budou připraveny dvě sady. Jedna sada bude před testováním skladována při teplotě 2-8 °C a jedna sada bude odeslána podle běžných přepravních podmínek a po návratu otestována.

2. Testování

   Každý vzorek bude poté testován v duplikátech pomocí testu Calbiotech Cotinine ELISA a procentuální výtěžnost bude vypočtena pro každou hladinu porovnáním zjištěných koncentrací s koncentracemi obohacenými.

3. Analýza dat Pro každou úroveň se vypočte procentuální výtěžnost porovnáním zjištěných koncentrací s koncentracemi se špičkami.

B. Studie citlivosti/přesnosti Cílem studie je ukázat, že Calbiotech Cotinine ELISA je schopen rozlišit kuřáky od nekuřáků, když se použijí vzorky ústní tekutiny odebrané zařízením pro odběr vzorků VioOne.

1. Odběr vzorků Této studie se budou účastnit minimálně dvě studijní místa. Do této studie bude zapsáno přibližně 218 jedinců. Nejméně 58 odebraných vzorků musí pocházet od kuřáků, kteří se sami prohlásili za kuřáky. Vzorky ústní tekutiny budou odebírány od jednotlivců, kteří dají informovaný souhlas a anonymně oznámí, zda je nebo není kuřák, a průměrný počet cigaret vykouřených za den. Pro tuto studii budou od každého jednotlivce odebrány dva vzorky. Jeden vzorek bude odebrán pomocí odběrového zařízení VioOne a jeden bude odebrán pomocí komerčně dostupného kelímku na odběr slin.

   Pro zařazení pacientů nebudou existovat žádná kritéria věku, pohlaví nebo rasy.

2. Testování Všechny vzorky odebrané zařízením pro odběr vzorků VioOne budou testovány pomocí Calbiotech Cotinine ELISA a čisté vzorky slin odebrané pomocí kelímků pro odběr slin budou testovány pomocí GC/MS, což je metoda zlatého standardu.
3. Analýza dat Výsledky GC/MS budou použity jako zlatý standard pro hodnocení klinické citlivosti a specifičnosti testu s použitím vzorků orálních tekutin odebraných pomocí zařízení pro odběr orálních tekutin VioOne.

C. Studie specifičnosti testu Nápoje a materiály pro domácnost budou testovány na interferenci při detekci kotininu v orální tekutině.

1. Odběr vzorků Vzorky orální tekutiny budou odebrány jednotlivcům, kteří se sami prohlásili za nekuřáky, a výsledná matrice vzorku/pufru se shromáždí.

   Směs se rozdělí na 15 alikvotů a jednotlivě se přidá každá z následujících 14 sloučenin. Jeden alikvotní podíl z fondu zůstane nenašpikovaný. Každý obohacený alikvot se pak dále rozdělí na tři alikvoty. Do jednoho alikvotu zůstane pouze sloučenina, do jednoho alikvotu se dále přidá 5 ng/ml kotininu a do jednoho alikvotu se dále přidá 15 ng/ml kotininu.

2. Testování Každý vzorek bude poté testován ve dvou vyhotoveních.

   Pokud není uvedeno jinak, každá z následujících sloučenin bude obohacena o konečnou koncentraci 10 %:

   Cukr Voda Alkohol (etanol) Zubní pasta Plná krev (10 mg/ml) Brusinkový džus Peroxid vodíku Jedlá soda Chlorid sodný Pomerančový džus Cola Sirup proti kašli Antiseptikum Voda Hemoglobin (10 mg/ml)

3. Analýza dat Výsledky budou porovnány s očekávaným výkonem měřeným ve studii přesnosti. (studie přesnosti nevyžaduje použití odebrané lidské ústní tekutiny)

D. Studie specificity testu

Účinek potenciálních kontaminantů potravy a dalších kontaminantů ústní dutiny bude hodnocen v časové studii.

1. Kolekce vzorků

   Pro tuto studii bude přijato deset jednotlivců, kteří se sami prohlásili za nekuřáky.

   Bezprostředně před zahájením studie bude od každého jednotlivce odebrán jeden vzorek pomocí zařízení pro odběr vzorků VioOne. Každý jedinec pak dostane ke konzumaci kousek tvrdého cukroví. Další vzorky budou odebrány pomocí VioOne ihned po konzumaci, deset minut po konzumaci pak každých třicet minut až do tří hodin.

   Po odebrání všech vzorků se každý vzorek rozdělí na dva alikvoty. Do jednoho alikvotu se přidá 5 ng/ml kotininu a do jednoho alikvotu se přidá 15 ng/ml kotininu.

2. Testování Každý vzorek/špička/časový bod bude testován třikrát
3. Analýza dat Výsledky budou porovnány s očekávaným výkonem měřeným ve studii přesnosti. (studie přesnosti nevyžaduje použití odebrané lidské ústní tekutiny)

E. Stabilita vzorku v pufru pro odběr vzorků Bude provedena studie pro stanovení stability vzorků uložených v pufru pro odběr vzorků při různých teplotách v průběhu času.

1. Kolekce vzorků

   Vzorky orálních tekutin budou odebrány jednotlivcům, kteří se sami označí jako nekuřáci, a výsledná matrice vzorku/pufru se shromáždí.

   Skupina se rozdělí na tři alikvoty. Do jednoho alikvotu se přidá 7,5 ng/ml kotininu, do jednoho alikvotu se přidá 10 ng/ml kotininu a jeden alikvot zůstane bez přídavku.

   Každý z hrotů a bez hrotu bude rozdělen do alikvotů do čtyř zkumavek a skladován při -20 oC, 2–8 oC, pokojové teplotě a 37 oC.

2. Testování

   Každý vzorek bude testován v osmi replikátech v den 0, 7, 14, 21, 28 a 35.

3. Analýza dat

Vzorek je považován za stabilní v testovacím časovém bodě, kdy se 95% interval spolehlivosti pro koncentraci kotininu v daný den pro vzorek překrývá s intervalem 0.

F. ELISA a stabilita zařízení

Bude provedena studie dlouhodobé stability pro stanovení stability a data expirace testu Calbiotech Cotinine ELISA spolu se zařízením pro odběr vzorků VioOne.

1. Kolekce vzorků

   V každém časovém bodě testování budou odebrány vzorky od tří jedinců. Každý jednotlivec poskytne tři vzorky – jeden s každou ze tří šarží zařízení pro odběr vzorků VioOne.

   Výsledná matrice vzorku/pufru získaná z každé šarže zařízení pro odběr vzorků VioOne bude spojena (celkem 3 jednotlivé vzorky na pool a celkem 3 pooly).

   Výsledné pooly se pak rozdělí na dva alikvoty. K jednomu alikvotu bude přidáno 5 ng/ml kotininu a 25 ng/ml kotininu.

2. Testování

   Každý obohacený vzorek bude testován v osmi replikátech po dobu 21 měsíců. V průběhu testování budou použity tři šarže testu ELISA.

3. Analýza dat

Test Calbiotech Cotinine ELISA a zařízení pro odběr vzorků VioOne jsou považovány za stabilní, když vzorky testované v každém časovém bodě poskytují výsledky v rámci 95% intervalu spolehlivosti pro koncentraci kotininu překrývající se v den 0.