Evaluación de un dispositivo de recolección de fluidos orales

El estudio para evaluar el dispositivo de recolección de muestras de fluidos orales VioOne (en adelante, dispositivo VioOne) constará de varios subestudios, como se describe a continuación:

A. Estudio de Recuperación

Este estudio determinará el porcentaje de recuperación de la cotinina agregada al fluido oral de los no fumadores recolectados con el dispositivo de recolección de muestras VioOne.

1. Coleccion de muestra

   El fluido oral se recolectará según el prospecto de VioOne de cinco personas que se autodeclararon no fumadores. A continuación, las muestras recogidas se enriquecerán individualmente con cotinina a concentraciones de 0, 5, 10, 15 o 25 ng/ml. Se prepararán dos juegos de cada concentración. Un juego se almacenará a 2-8 °C antes de la prueba y un juego se enviará según las condiciones de envío de rutina y se probará al devolverlo.

2. Pruebas

   Luego, cada muestra se analizará por duplicado con el ensayo ELISA de cotinina de Calbiotech y se calculará el porcentaje de recuperación para cada nivel comparando las concentraciones detectadas con las concentraciones enriquecidas.

3. Análisis de datos El porcentaje de recuperación se calculará para cada nivel comparando las concentraciones detectadas con las concentraciones enriquecidas.

B. Estudio de sensibilidad/precisión El objetivo del estudio es demostrar que el ELISA de cotinina de Calbiotech es capaz de distinguir a los fumadores de los no fumadores cuando se utilizan muestras de fluidos orales recolectadas con el dispositivo de recolección de muestras VioOne.

1. Recolección de muestras Un mínimo de dos sitios de estudio participarán en este estudio. Aproximadamente 218 personas se inscribirán en este estudio. Al menos 58 muestras recolectadas deben ser de fumadores autodeclarados. Se tomarán muestras de fluidos orales de los individuos, quienes darán el consentimiento informado y autoinformarán de manera anónima si el individuo es fumador o no y el número de cigarrillos fumados por día en promedio. Se tomarán dos muestras de cada individuo para este estudio. Se recolectará una muestra con el dispositivo de recolección VioOne y otra con un recipiente de recolección de saliva disponible comercialmente.

   No habrá criterios de edad, sexo o raza para enrolar a los pacientes.

2. Pruebas Todas las muestras recolectadas con el dispositivo de recolección de muestras VioOne se analizarán con el ELISA de cotinina de Calbiotech y las muestras de saliva pura recolectadas con las copas de recolección de saliva se analizarán mediante GC/MS, siendo este último el método estándar de oro.
3. Análisis de datos Los resultados de GC/MS se utilizarán como el estándar de referencia para evaluar la sensibilidad clínica y la especificidad del ensayo utilizando muestras de fluidos orales recolectadas con el dispositivo de recolección de fluidos orales VioOne.

C. Estudio de especificidad del ensayo Se analizarán las bebidas y los materiales domésticos para detectar interferencias en la detección de cotinina en fluidos orales.

1. Recolección de muestras Las muestras de fluidos orales se recolectarán de personas que se autoinformen como no fumadoras y la matriz de muestra/tampón resultante se combinará.

   El grupo se dividirá en 15 alícuotas y se enriquecerá individualmente cada uno de los siguientes 14 compuestos. Una alícuota del grupo permanecerá sin enriquecer. Cada alícuota enriquecida se dividirá luego en tres alícuotas. Una alícuota permanecerá enriquecida solo con el compuesto, una alícuota se enriquecerá con 5 ng/ml de cotinina y una alícuota se enriquecerá con 15 ng/ml de cotinina.

2. Análisis Cada muestra se analizará por duplicado.

   Cada uno de los siguientes compuestos se añadirá a una concentración final del 10 %, a menos que se indique lo contrario:

   Azúcar Agua Alcohol (Etanol) Pasta de dientes Sangre entera (10 mg/mL) Jugo de arándano Peróxido de hidrógeno Bicarbonato de sodio Cloruro de sodio Jugo de naranja Cola Jarabe para la tos Agua antiséptica Hemoglobina (10 mg/mL)

3. Los resultados del análisis de datos se compararán con el rendimiento esperado medido en el estudio de precisión. (el estudio de precisión no requiere el uso de fluido oral humano recolectado)

D. Estudio de especificidad del ensayo

El efecto de los posibles alimentos y otros contaminantes de la cavidad oral se evaluará en un estudio cronometrado.

1. Coleccion de muestra

   Para este estudio se reclutarán diez personas autoinformadas como no fumadoras.

   Se recolectará una muestra utilizando el dispositivo de recolección de muestras VioOne de cada individuo inmediatamente antes del inicio del estudio. Luego, a cada individuo se le dará un caramelo duro para que lo consuma. Se recolectarán muestras adicionales con VioOne inmediatamente después del consumo, diez minutos después del consumo y luego cada treinta minutos hasta tres horas.

   Después de recolectar todas las muestras, cada muestra se dividirá en dos alícuotas. Se enriquecerá una alícuota con 5 ng/mL de cotinina y una alícuota con 15 ng/mL de cotinina.

2. Prueba Cada muestra/pico/punto de tiempo se probará por triplicado
3. Los resultados del análisis de datos se compararán con el rendimiento esperado medido en el estudio de precisión. (el estudio de precisión no requiere el uso de fluido oral humano recolectado)

E. Estabilidad de la muestra en el tampón de recolección de muestras Se realizará un estudio para establecer la estabilidad de las muestras almacenadas en el tampón de recolección de muestras a varias temperaturas a lo largo del tiempo.

1. Coleccion de muestra

   Las muestras de fluidos orales se recolectarán de individuos que se autoinformen como no fumadores y la matriz de muestra/tampón resultante se agrupará.

   El grupo se dividirá en tres alícuotas. Una alícuota se enriquecerá con 7,5 ng/ml de cotinina, una alícuota se enriquecerá con 10 ng/ml de cotinina y una alícuota permanecerá sin enriquecer.

   Cada uno de los espigas y no espigas se alicuotará en cuatro tubos y se almacenará a -20 oC, 2-8oC, temperatura ambiente y 37oC.

2. Pruebas

   Cada muestra se analizará en ocho réplicas en los días 0, 7, 14, 21, 28 y 35.

3. Análisis de los datos

La muestra se considera estable en el momento de la prueba cuando el intervalo de confianza del 95 % para la concentración de cotinina en un día determinado para la muestra se superpone al del día 0.

F. ELISA y Estabilidad del Dispositivo

Se realizará un estudio de estabilidad a largo plazo para establecer la estabilidad y la fecha de caducidad del ensayo ELISA de cotinina de Calbiotech junto con el dispositivo de recogida de muestras VioOne.

1. Coleccion de muestra

   En cada momento de la prueba, se recolectarán muestras de tres personas. Cada individuo proporcionará tres muestras, una con cada uno de los tres lotes de dispositivos de recolección de muestras VioOne.

   La matriz de muestra/tampón resultante obtenida de cada lote del dispositivo de recolección de muestras VioOne se agrupará (un total de 3 muestras individuales por grupo y un total de 3 grupos).

   Los grupos resultantes se dividirán luego en dos alícuotas. Una alícuota se enriquecerá con 5 ng/mL de cotinina y 25 ng/mL de cotinina.

2. Pruebas

   Cada muestra enriquecida se analizará en ocho repeticiones durante un período de 21 meses. En el transcurso de las pruebas, se utilizarán tres lotes de ensayos ELISA.

3. Análisis de los datos

El ensayo Calbiotech Cotinine ELISA y el VioOne Sample Collection Device se consideran estables cuando las muestras analizadas en cada momento producen resultados dentro del intervalo de confianza del 95 % para que la concentración de cotinina se superponga a la del día 0.