反复辅助抗菌光动力疗法治疗侵袭性牙周炎

非手术牙周治疗

在非手术牙周治疗前 7 天，将从所有患者的整个口腔拍摄根尖周 X 光片。 他们将根据自己的具体需要参加口腔卫生计划 (OHP)。 在此计划中，将指导患者如何有效地自行控制牙菌斑，包括有关 Bass 技术（Bass，1954 年）的信息以及使用牙线和牙间刷进行邻间清洁的信息。 他们还将被激励每天刷一次舌背表面，并会收到在整个实验期间使用的牙粉（Colgate Total®, Anakol Ind. Com Ltda - Brazil's Kolynos - Colgate Palmolive Co., Sao Bernardo do Campo, SP, 巴西)。 在 OHP 之后，受试者将接受先前描述的临床牙周参数评估，并在选定部位（基线）收集龈下菌斑和 GCF。 不久，患者将在口腔中的所有牙齿上接受牙龈上刮治和使用预防杯进行冠状抛光。 非手术牙周治疗将在 OHP 和初始龈上刮治后 7 天开始。 在 24 小时内，牙周病专家将使用手（Gracey Curettes, Hu-Friedy, Chicago, IL, USA）和超声波仪器对所有涉及牙周的牙齿进行龈上和龈下刮治和根面平整。 仪器将在每个象限上进行，直到实现充分的清洁和根面平整，这将由牙科探查器验证。 在非手术牙周治疗结束后的三个月内，个人将每两周接受一次专业预防。 在每两周一次的随访中，将通过验证口腔卫生状况来监测患者的合作情况。

抗菌光动力疗法

全口洗牙和根面整平 (SRP) 后，选择接受抗菌光动力疗法 (aPDT) 的牙齿的牙周袋将用蒸馏水冲洗。 此后不久，将从口袋底部涂上染料（盐酸吩噻嗪 - 10mg/mL）。 1 分钟后，用蒸馏水冲洗以去除多余的染料。 染色区域将用二极管激光（660 nm 和 60 mW/cm²）照射。 每颗接受治疗的牙齿的六个部位将被照射（10 秒/部位）。 aPDT 的应用将以相同的方式重复，直到第二周（天数：2、7、14）。 在应用之前，龈上菌斑将被去除。

每个患者都会对海藻酸盐印象深刻，以获得牙弓模型并制作由醋酸盐制成的导板。 该板将呈现凹槽，这些凹槽将用作标准化自动牙周探针（Florida Probe System，Florida Probe Corporation，Gainesville，FL，USA）的插入和倾斜的参考。 每位患者的可见菌斑指数，采用二分法评级（O'Leary 等人，1972 年），将由牙齿表面沉积有被显示溶液染色的菌斑沉积物的百分比来确定。

临床监测

以下临床牙周参数将在每颗牙齿的 6 个部位（近颊、颊、远颊、近中舌、舌侧和远舌）进行评估：(i) 探诊袋深度 (PPD)：将测量从龈缘到袋底； (ii) 牙龈退缩 (GR)：从牙釉质接合处到袋底进行测量； (iii) 临床附着水平 (CAL)：它将被测量为 PPD + GR（当牙骨质连接处被覆盖时，GR 将等于 0）； (iv) 探诊出血 (BOP)：将进行二分法评估：在探诊深度探头插入后 30 秒内出现出血将被视为阳性； (v) 菌斑指数（PI）：采用二分法评价。 BOP、PPD、CAL 和 GR 将在每颗牙齿的六个位置（近颊、颊、远颊、远舌、舌侧和近中舌）进行测量。 所有探测测量都将使用自动牙周探针进行。

将在基线（干预前）以及非手术牙周治疗后 +30 和 +90 天记录每位患者的临床牙周参数和菌斑指数。 Kappa 指数将用于评估检查者对临床牙周参数收集的校准，以计算检查者内部一致性。 根据世界卫生组织（WHO）的诊断标准，可接受的Kappa一致性指数必须大于或等于0.85（WHO，1997）。 该协议级别将用于校准此项目中的审查员。 将选择 10 名患者，每名患者至少显示两对对侧单根牙齿，邻间位置 PD ≥ 5 mm，以校准检查者。 每位患者将在相隔 48 小时的两个不同场合进行评估，以便通过 Kappa 指数获得检查者内部的可靠性。

免疫监测

在基线和非手术牙周治疗后 +14 天、+30 天和 +90 天时，将从每位患者的八个邻间部位获取 GCF 样本。 将去除选定牙齿的龈上菌斑，并用空气喷射器仔细吹干该部位，随后用无菌棉卷隔离。 GCF 样品将通过纸条（Periopaper® -Oralflow Inc., Amityville, NY, USA）获得。 将纸条轻轻插入牙周袋的孔口，在龈下保持 30 秒。 吸收的 GCF 量将通过电子湿量测量仪（Periotron® -Oralflow Inc., Amityville, NY, USA）确定。 样品将被放置在无菌 Eppendorf 管中，储存在 - 80°C，用于细胞因子（IL-1β、IL-10 和 TNF-a）定量（pg/μl），在 Genese 实验室（Genese Produtos Diagnosticos LTDA，圣保罗，巴西). 细胞因子水平将使用 three-plex Millipore 试剂盒（Millipore Corporation，Billerica，MA，USA）和 Luminex 100TM 系统（Luminex，MiraiBio，Alameda，CA，USA）来确定。

微生物监测

在基线和非手术牙周治疗后 +30 和 +90 天，将从每位患者的八个邻间部位获取龈下菌斑样本。 将使用棋盘 DNA-DNA 杂交技术（Socransky 等人，2004a；Socransky 等人，2004b）分别分析样本中 40 种龈下细菌的含量。 选定的牙齿将用无菌棉卷隔离并用空气喷射器干燥。 然后，使用无菌刮匙小心去除龈上菌斑。 将使用另一个无菌刮匙收集龈下菌斑，从牙周袋底部开始到其冠状部分。 样品将储存在经过灭菌的 Eppendorf 管中，并将在 Guarulhos 大学（UNG，Guarulhos，SP，巴西）的微生物实验室进行处理。

统计分析

将检查所获得数据的正态性和同方差性。 组内和组间在不同时间间隔的比较将通过参数或非参数适当测试进行。 在所有测试中，显着性水平将设置为 5%。 所有计算将由 SPSS 软件（SPSS，美国伊利诺伊州芝加哥）执行。