Tratamiento de la periodontitis agresiva con terapia fotodinámica antimicrobiana adyuvante repetida

Terapia periodontal no quirúrgica

Siete días antes de la terapia periodontal no quirúrgica, se tomarán radiografías periapicales de toda la boca de todos los pacientes. Serán fijados en un programa de higiene oral (OHP) de acuerdo a sus necesidades específicas. En este programa, se instruirá a los pacientes sobre un control de placa efectivo realizado por ellos mismos, incluyendo información sobre la Técnica de Bass (Bass, 1954) y la limpieza interproximal con hilo dental y cepillos interdentales. También serán motivados a cepillarse la superficie dorsal de la lengua una vez al día y recibirán un dentífrico que será utilizado durante todo el período experimental (Colgate Total®, Anakol Ind. Com Ltda - Brazil's Kolynos - Colgate Palmolive Co., Sao Bernardo do Campo, SP, Brasil). Después del OHP, los sujetos se someterán a la evaluación de los parámetros periodontales clínicos descritos anteriormente y se realizará la recolección de placa subgingival y GCF en sitios seleccionados (línea de base). En breve, los pacientes recibirán raspado supragingival y pulido coronal con copa profiláctica en todos los dientes presentes en la cavidad oral. La terapia periodontal no quirúrgica se iniciará 7 días después del OHP y el raspado supragingival inicial. Dentro de las 24 horas, un especialista en Periodoncia realizará el raspado y alisado radicular supra y subgingival de todos los dientes con compromiso periodontal, utilizando instrumentos manuales (Gracey Curettes, Hu-Friedy, Chicago, IL, EE. UU.) y ultrasónicos. La instrumentación se realizará en cada cuadrante hasta lograr una adecuada limpieza y alisado radicular, lo que se verificará con un explorador dental. Los individuos recibirán profilaxis profesional cada dos semanas durante tres meses después del final de la terapia periodontal no quirúrgica. En las visitas de seguimiento quincenales, se controlará la cooperación del paciente verificando el estado de la higiene bucal.

Terapia fotodinámica antimicrobiana

Después de un raspado y alisado radicular (SRP) de toda la boca, las bolsas periodontales de los dientes seleccionados para recibir terapia fotodinámica antimicrobiana (aPDT) se irrigarán con agua destilada. Poco después, se aplicará el tinte (clorhidrato de fenotiazina, 10 mg/ml) desde el fondo de la bolsa. Pasado 1 minuto, se realizará un riego con agua destilada para retirar el exceso de tinte. La zona teñida se irradiará con un láser de diodo (660 nm y 60 mW/cm²). Se irradiarán seis sitios por diente bajo tratamiento (10 segundos/sitio). Las aplicaciones de aPDT se repetirán de la misma forma hasta la segunda semana (días: 2, 7,14). Antes de la aplicación, se eliminará la placa supragingival.

Se imprimirá a cada paciente con alginato para obtener modelos de las arcadas dentarias y elaborar una placa guía de acetato. Esta placa presentará ranuras que se utilizarán como referencias para estandarizar la inserción e inclinación de la sonda periodontal automatizada (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, EE. UU.). El índice de placa visible para cada paciente, clasificado de forma dicotómica (O'Leary et al. 1972), estará determinado por el porcentaje de superficies dentales con depósitos de placa teñidos con solución reveladora.

Seguimiento clínico

Los siguientes parámetros clínicos periodontales se evaluarán en 6 sitios de cada diente (mesio-bucal, bucal, disto-bucal, mesio-lingual, lingual y disto-lingual): (i) profundidad de sondaje (PPD): se medirá desde el margen gingival hasta el fondo de la bolsa; (ii) recesión gingival (GR): se medirá desde la unión esmalte-cemento hasta el fondo de la bolsa; (iii) nivel de adherencia clínica (CAL): se medirá como PPD + GR (GR será igual a 0 siempre que se cubra la unión cemento-esmalte); (iv) sangrado al sondaje (BOP): se evaluará de forma dicotómica: se considerará positiva la presencia de sangrado cuando ocurra dentro de los 30 segundos desde la inserción de la sonda para profundidad de sondaje; (v) Índice de placa (PI): se evaluará de forma dicotómica. BOP, PPD, CAL y GR se medirán en seis sitios por diente (mesio-bucal, bucal, disto-bucal, disto-lingual, lingual y mesio-lingual). Todas las mediciones de sondeo se realizarán con una sonda periodontal automatizada.

Se registrarán los parámetros clínicos periodontales y el índice de placa de cada paciente al inicio (pre-intervención), así como a los +30 y +90 días después de la terapia periodontal no quirúrgica. El índice Kappa se utilizará para evaluar la calibración del examinador en la recopilación de parámetros clínicos periodontales para calcular la concordancia intraexaminador. Según los criterios de diagnóstico de la Organización Mundial de la Salud (OMS), el índice de concordancia Kappa aceptable debe ser mayor o igual a 0,85 (OMS, 1997). Este nivel de concordancia se utilizará para la calibración del examinador en este proyecto. Diez pacientes, cada uno mostrando al menos dos pares de dientes contralaterales de una sola raíz con PD ≥ 5 mm en sitios interproximales, serán seleccionados para calibrar el examinador. Cada paciente será evaluado en dos ocasiones separadas con 48 horas de diferencia para obtener la confiabilidad intraexaminador a través del índice Kappa.

Monitoreo inmunológico

Al inicio y +14 y +30 y +90 días después de la terapia periodontal no quirúrgica, se obtendrán muestras de GCF de ocho sitios interproximales de cada paciente. Se eliminará la placa supragingival de los dientes seleccionados y los sitios se secarán cuidadosamente con chorros de aire y, posteriormente, se aislarán con rollos de algodón estériles. Las muestras de GCF se obtendrán con tiras de papel (Periopaper® -Oralflow Inc., Amityville, NY, EE. UU.). Las tiras de papel se introducirán suavemente en el orificio de la bolsa periodontal, permaneciendo 30 segundos subgingivalmente. La cantidad de GCF absorbida se determinará mediante un medidor electrónico de masa húmeda (Periotron® -Oralflow Inc., Amityville, NY, EE. UU.). Las muestras se colocarán en tubos Eppendorf estériles almacenados a -80°C para la cuantificación de citoquinas (IL-1β, IL-10 y TNF-a) (pg/μl) en el Laboratorio Genese (Genese Produtos Diagnosticos LTDA, Sao Paulo, SP, Brasil). ). Los niveles de citocinas se determinarán utilizando un kit Millipore de tres plex (Millipore Corporation, Billerica, MA, EE. UU.) y el sistema Luminex 100TM (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, EE. UU.).

Monitoreo microbiológico

Al inicio y +30 y +90 días después de la terapia periodontal no quirúrgica, se obtendrán muestras de placa subgingival de ocho sitios interproximales de cada paciente. Las muestras se analizarán individualmente para determinar su contenido de 40 especies de bacterias subgingivales utilizando la técnica de hibridación de ADN-ADN de tablero de ajedrez (Socransky et al., 2004a; Socransky et al., 2004b). Los dientes seleccionados se aislarán con rollos de algodón estériles y se secarán con chorros de aire. Luego, la placa supragingival se eliminará cuidadosamente con una cureta estéril. Se utilizará otra cureta estéril para recolectar la placa subgingival, comenzando desde el fondo de la bolsa periodontal hasta su porción coronal. Las muestras serán almacenadas en tubos Eppendorf esterilizados y serán procesadas en el Laboratorio de Microbiología de la Universidad de Guarulhos (UNG, Guarulhos, SP, Brasil).

análisis estadístico

Se comprobará la normalidad y homocedasticidad de los datos obtenidos. Las comparaciones dentro de los grupos y entre grupos en diferentes intervalos de tiempo se realizarán mediante pruebas paramétricas o no paramétricas apropiadas. El nivel de significación se fijará en el 5% en todas las pruebas. Todos los cálculos se realizarán con el software SPSS (SPSS, Chicago IL, EE. UU.).