Trattamento della parodontite aggressiva con terapia fotodinamica antimicrobica aggiuntiva ripetuta

Terapia parodontale non chirurgica

Sette giorni prima della terapia parodontale non chirurgica, verranno prelevate radiografie periapicali da tutta la bocca di tutti i pazienti. Saranno impostati in un programma di igiene orale (OHP) in base alle loro esigenze specifiche. In questo programma, i pazienti verranno istruiti su un efficace controllo della placca auto-eseguito, comprese le informazioni sulla tecnica di Bass (Bass, 1954) e la pulizia interprossimale con filo interdentale e spazzolini interdentali. Saranno inoltre motivati ​​a spazzolare la superficie dorsale della lingua una volta al giorno e riceveranno un dentifricio che verrà utilizzato per tutto il periodo sperimentale (Colgate Total®, Anakol Ind. Com Ltda - Brazil's Kolynos - Colgate Palmolive Co., Sao Bernardo do Campo, SP, Brasile). Dopo l'OHP, i soggetti saranno sottoposti alla valutazione dei parametri clinici parodontali precedentemente descritti e verrà eseguita la raccolta della placca sottogengivale e del GCF in siti selezionati (baseline). A breve i pazienti riceveranno detartrasi sopragengivale e lucidatura coronale con coppetta profilattica su tutti i denti presenti nel cavo orale. La terapia parodontale non chirurgica inizierà 7 giorni dopo l'OHP e l'iniziale scaling sopragengivale. Entro 24 ore, uno specialista in parodontologia eseguirà il ridimensionamento sopra e sottogengivale e la levigatura radicolare di tutti i denti con coinvolgimento parodontale, utilizzando strumenti manuali (Gracey Curettes, Hu-Friedy, Chicago, IL, USA) e ad ultrasuoni. La strumentazione verrà eseguita su ciascun quadrante fino al raggiungimento di un'adeguata pulizia e levigatura radicolare, che verrà verificata con un esploratore dentale. Gli individui riceveranno la profilassi professionale bisettimanale per tre mesi dopo la fine della terapia parodontale non chirurgica. Nelle visite di controllo bisettimanali verrà monitorata la collaborazione del paziente verificando lo stato di igiene orale.

Terapia fotodinamica antimicrobica

Dopo un trattamento completo di ablazione e pianificazione radicolare (SRP), le tasche parodontali dei denti selezionati per ricevere la terapia fotodinamica antimicrobica (aPDT) saranno irrigate con acqua distillata. Poco dopo, verrà applicato il colorante (fenotiazina cloridrato - 10 mg/mL) dal fondo della tasca. Dopo 1 minuto, verrà eseguita l'irrigazione con acqua distillata per rimuovere l'eccesso di colorante. L'area macchiata sarà irradiata con un laser a diodi (660 nm e 60 mW/cm²). Verranno irradiati sei siti per dente in trattamento (10 secondi/sito). Le applicazioni di aPDT verranno ripetute con le stesse modalità fino alla seconda settimana (giorni: 2, 7,14). Prima dell'applicazione verrà rimossa la placca sopragengivale.

Ogni paziente verrà impressionato con alginato per ottenere modelli delle arcate dentarie ed elaborare una placca guida in acetato. Questa placca presenterà scanalature che serviranno da riferimento per standardizzare l'inserimento e l'inclinazione della sonda parodontale automatizzata (Florida Probe System, Florida Probe Corporation, Gainesville, FL, USA). L'indice di placca visibile per ciascun paziente, valutato in modo dicotomico (O'Leary et al. 1972), sarà determinato dalla percentuale di superfici dentali con depositi di placca colorati con soluzione rivelante.

Monitoraggio clinico

I seguenti parametri clinici parodontali saranno valutati in 6 siti di ciascun dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, mesio-linguale, linguale e disto-linguale): (i) profondità di sondaggio della tasca (PPD): sarà misurata dal margine gengivale al fondo della tasca; (ii) recessione gengivale (GR): sarà misurata dalla giunzione smalto-cemento al fondo della tasca; (iii) livello di attacco clinico (CAL): sarà misurato come PPD + GR (GR sarà uguale a 0 ogni volta che la giunzione cemento-smalto è coperta); (iv) sanguinamento al sondaggio (BOP): sarà valutato in modo dicotomico: la presenza del sanguinamento sarà considerata positiva quando si verifica entro 30 secondi dall'inserimento della sonda per la profondità di sondaggio; (v) Indice di placca (PI): sarà valutato in modo dicotomico. BOP, PPD, CAL e GR saranno misurati in sei siti per dente (mesio-buccale, buccale, disto-buccale, disto-linguale, linguale e mesio-linguale). Tutte le misurazioni di sondaggio verranno eseguite utilizzando una sonda parodontale automatizzata.

I parametri clinici parodontali e l'indice di placca di ciascun paziente saranno registrati al basale (pre-intervento), nonché +30 e +90 giorni dopo la terapia parodontale non chirurgica. L'indice Kappa sarà utilizzato per valutare la calibrazione dell'esaminatore sulla raccolta dei parametri parodontali clinici al fine di calcolare l'accordo intra-esaminatore. Secondo i criteri di diagnosi dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'indice di concordanza Kappa accettabile deve essere maggiore o uguale a 0,85 (WHO, 1997). Questo livello di accordo verrà utilizzato per la calibrazione dell'esaminatore in questo progetto. Per calibrare l'esaminatore verranno selezionati dieci pazienti, ognuno dei quali presenterà almeno due paia di denti controlaterali a radice singola con PD ≥ 5 mm in siti interprossimali. Ogni paziente sarà valutato in due occasioni separate a distanza di 48 ore al fine di ottenere l'attendibilità intra-esaminatore attraverso l'indice Kappa.

Monitoraggio immunologico

Al basale e +14 e +30 e +90 giorni dopo la terapia parodontale non chirurgica, i campioni di GCF saranno prelevati da otto siti interprossimali di ciascun paziente. La placca sopragengivale dai denti selezionati sarà rimossa ei siti saranno accuratamente asciugati con getti d'aria, e successivamente isolati con rulli di cotone sterili. Campioni di GCF saranno ottenuti con strisce di carta (Periopaper® -Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). Le strisce di carta verranno inserite delicatamente nell'orifizio della tasca parodontale, rimanendo sottogengivale per 30 secondi. La quantità di GCF assorbito sarà determinata da un misuratore elettronico di massa umida (Periotron® -Oralflow Inc., Amityville, NY, USA). I campioni saranno collocati in provette Eppendorf sterili conservate a -80°C per la quantificazione delle citochine (IL-1β, IL-10 e TNF-a) (pg/μl) presso il Genese Laboratory (Genese Produtos Diagnosticos LTDA, Sao Paulo, SP, Brasile ). I livelli di citochine saranno determinati utilizzando un kit Millipore three-plex (Millipore Corporation, Billerica, MA, USA) e il sistema Luminex 100TM (Luminex, MiraiBio, Alameda, CA, USA).

Monitoraggio microbiologico

Al basale e +30 e +90 giorni dopo la terapia parodontale non chirurgica, verranno prelevati campioni di placca sottogengivale da otto siti interprossimali di ciascun paziente. I campioni saranno analizzati individualmente per il loro contenuto di 40 specie batteriche subgengivali utilizzando la tecnica di ibridazione DNA-DNA a scacchiera (Socransky et al., 2004a; Socransky et al., 2004b). I denti selezionati verranno isolati con rulli di cotone sterili ed asciugati con getti d'aria. Quindi, la placca sopragengivale verrà accuratamente rimossa utilizzando una curette sterile. Un'altra curette sterile verrà utilizzata per raccogliere la placca sottogengivale, partendo dal fondo della tasca parodontale fino alla sua porzione coronale. I campioni saranno conservati in provette Eppendorf sterilizzate e processati presso il Laboratorio di Microbiologia dell'Università di Guarulhos (UNG, Guarulhos, SP, Brasile).

analisi statistica

Verrà verificata la normalità e l'omoschedasticità dei dati ottenuti. I confronti all'interno dei gruppi e tra i gruppi a diversi intervalli di tempo saranno eseguiti mediante opportuni test parametrici o non parametrici. Il livello di significatività sarà fissato al 5% in tutti i test. Tutti i calcoli saranno eseguiti dal software SPSS (SPSS, Chicago IL, USA).