下肢淋巴闭塞压

注射造影剂：

吲哚菁绿 (ICG) 是一种三羰花青染料，通常用于肝脏、心血管、整形外科和眼科应用。 它通常以 0.1 和 0.5 mg/kg 之间的剂量静脉内注射。 给药后，ICG 与血浆蛋白、脂蛋白和脂质结合，然后通过肝脏从血液中迅速完全清除。 ICG 被激发并在近红外（约 800 nm）发出荧光。

在这项研究中，研究人员将 ICG 悬浮在 25 毫升纯水中，随后用纯水稀释以达到 0.2 毫克/毫升的最终浓度。 每个受试者将接受皮内注射 0.5 ml 稀释的 ICG（即 100µg)，使用皮下注射针头。 研究者将标准化注射点，按照淋巴显像注射方法在第一趾间皮内注射ICG。 通过这种方式，研究人员系统地突出了浅表淋巴网络的同一区域。

荧光图像采集：

注射后，注射部位将用胶带覆盖以避免相机过饱和，并避免 ICG 在皮肤上扩散和图像上不需要的荧光背景。 为了获得腿部淋巴流的荧光成像，将使用近红外荧光成像系统（来自日本 Hamamatsu Photonics 的 Photo Dynamic Eye 或 PDE 相机）。 摄像机通过 Noga Tools 的固定系统保持在调查区域上方 15 厘米的固定位置。 放大的模拟信号通过 Terratec（型号 Grabster AV 450 MX）转换器转换为数字信号并传输到监视器，从而实时显示淋巴网络和淋巴流。 图像将记录在专用的外部硬盘驱动器 Iomega 上，型号为 MDHDU。

会议将在暗室中进行，以获取 NIR 荧光图像。

由第一作者和他的团队在 NIRF 反馈下开发的特定手动淋巴引流在注射后立即进行，在整个实验期间进行，以确保检查的淋巴管永久包含淋巴液。 操作者用手将淋巴液从注射点推进到透明袖带远端前 5 厘米处在皮肤上绘制的限制线。 这种优化的手动淋巴引流将进行 3 分钟，以便轻松检测腿部远端区域的浅表淋巴管并标记感兴趣的区域。 MLD 由本实验的第一作者标准化，由连续重复的序列组成，从远端到近端执行，在注射点实现 3 次“填充”操作，随后进行 2 次“冲洗”操作注射点至袖口前的限界线。 然后，在皮肤上以 50 mm 的距离绘制两条荧光线，以限制参考空间。

透明血压计的袖带放在腿的远端，刚好在脚踝上方。

血压计连接到压力计，指示毫米汞柱（Testo® 510 数字压力计精度 0.1mmHg。）。

PDE 相机将保持垂直于腿的主轴，处于袖带中部的水平。

为了确保观察到的淋巴管含有淋巴液，荧光淋巴液在整个过程中都是用操作者的手从注射点推动到透明袖带远端前 5 厘米处在皮肤上画的界限线.

• 第一步：作为基线，我们记录并观察未充气袖带下的淋巴流动。
• 第二步：袖带充气30mmHg，三个淋巴流道记录图像。

三名独立观察员出席。 他们控制淋巴的三个通道，以便同意进入下一个压力步骤。

- 第三步：研究人员以 10 mmHg 的步长增加充气压力，每次增加时记录图像（在每一步等待三个淋巴通道）。

一旦研究人员目视注意到透明袖带下的淋巴进展完全停止，实验就完成了。 在那一刻，压力降低 10mmHg 以验证淋巴流的返回。 在此步骤之后，研究人员观察并记录从注射点到肢体根部的淋巴管图像。