Pressão de Oclusão Linfática no Membro Inferior

Injeção de agente de contraste:

Indocyanine Green (ICG) é um corante tricarbocianina que é comumente usado para aplicações hepáticas, cardiovasculares, cirurgia plástica e oftalmologia. Geralmente é injetado por via intravenosa em uma dose compreendida entre 0,1 e 0,5 mg/kg. Após a administração, o ICG liga-se às proteínas plasmáticas, lipoproteínas e lípidos, sendo depois disso rápida e completamente eliminado do sangue pelo fígado. O ICG é excitado e emite fluorescência no infravermelho próximo (cerca de 800 nm).

Neste estudo, os investigadores suspenderão o ICG em 25 ml de água pura e posteriormente diluídos com água pura para atingir uma concentração final de 0,2 mg/ml. Cada indivíduo receberá uma injeção intradérmica de 0,5 ml de ICG diluído (por exemplo, 100µg), utilizando uma agulha hipodérmica. Os investigadores irão padronizar o ponto de injeção e injetar ICG por via intradérmica no primeiro espaço interdigital, de acordo com o método de injeção utilizado para linfocintilografia. Desta forma, os investigadores destacam sistematicamente a mesma área da rede linfática superficial.

Aquisição de imagens de fluorescência:

Após a injeção, os locais de injeção serão cobertos com esparadrapo para evitar supersaturação da câmera e evitar o espalhamento do ICG na pele e o indesejado fundo fluorescente nas imagens. Para obter imagens de fluorescência do fluxo linfático da perna, um sistema de imagens de fluorescência de infravermelho próximo será usado (Photo Dynamic Eye, ou câmera PDE da Hamamatsu Photonics - Japão). A câmera é mantida em posição fixa, 15 cm acima do campo de investigação, por um sistema de fixação da Noga Tools. O sinal analógico amplificado é transformado em sinal digital por um conversor da Terratec (Modelo Grabster AV 450 MX) e transferido para um monitor, que permite visualizar a rede linfática e o fluxo linfático em tempo real. As imagens serão gravadas em um disco rígido externo dedicado Iomega, modelo MDHDU.

A sessão será realizada em sala escura, para permitir a aquisição de imagens de fluorescência NIR.

A drenagem linfática manual específica, desenvolvida pelo primeiro autor e sua equipe sob feedback do NIRF, é realizada imediatamente após a injeção, durante toda a sessão experimental, a fim de garantir que os vasos linfáticos examinados contenham permanentemente linfa. A linfa é impulsionada com a mão do operador desde o ponto de injeção até uma linha limite traçada na pele a 5 cm antes da extremidade distal do balonete transparente. Essa drenagem linfática manual otimizada será realizada por 3 minutos para detectar facilmente os vasos linfáticos superficiais na região distal da perna e marcar a área de interesse. O MLD é padronizado pelo primeiro autor para este experimento, e composto por uma sequência contínua e repetida, executada de distal para proximal, de 3 manobras de "fill up" realizadas no ponto de injeção, seguidas de 2 manobras de "wash out" realizadas a partir o ponto de injeção até a linha limite antes do manguito. Em seguida, duas linhas fluorescentes são desenhadas na pele em uma distância de 50 mm para limitar o espaço de referência.

O manguito do esfigmomanômetro transparente é colocado na parte distal da perna, logo acima do tornozelo.

O esfigmomanômetro é conectado a um medidor de pressão, indicando mm de Mercúrio (Testo® 510 Digital Manometer precisão 0,1mmHg.).

A câmera PDE será mantida perpendicularmente no eixo maior da perna, no nível do meio do manguito.

Para garantir que os vasos linfáticos observados contenham linfa, a linfa fluorescente é impulsionada durante toda a experiência com a mão do operador desde o ponto de injeção até uma linha limite traçada na pele a 5 cm antes da extremidade distal do manguito transparente .

• Primeira etapa: como linha de base, registramos e observamos o fluxo linfático sob o manguito não inflado.
• Segundo passo: o manguito é insuflado a 30mmHg, as imagens são registradas durante três passagens do fluxo linfático.

Três observadores independentes estão presentes. Eles controlam as três passagens da linfa para dar o consentimento para passar para a próxima etapa de pressão.

- Terceiro passo: Os investigadores aumentam a pressão inflada em passos de 10 mmHg registrando imagens a cada aumento (aguardando três passagens de linfa a cada passo).

O experimento é concluído assim que os investigadores observam visualmente a parada completa da progressão da linfa sob o manguito transparente. Nesse momento, a pressão é reduzida em 10mmHg para validar o retorno do fluxo linfático. Após essa etapa, os investigadores observam e registram imagens do vaso linfático desde o ponto de injeção até a raiz do membro.