下肢のリンパ閉塞圧

造影剤の注入:

インドシアニン グリーン (ICG) はトリカルボシアニン染料で、肝臓、心血管、形成外科、眼科の用途に一般的に使用されています。 通常、0.1～0.5 mg/kgの用量で静脈内注射されます。 投与後、ICG は血漿タンパク質、リポタンパク質、および脂質に結合し、その後、肝臓によって急速かつ完全に血液から除去されます。 ICG は励起され、近赤外 (800 nm 付近) で蛍光を発します。

この研究では、研究者はICGを25mlの純水に懸濁し、続いて純水で希釈して最終濃度0.2mg/mlにします。 各被験者は、0.5mlの希釈ICG（e.i. 100µg)、皮下注射針を使用。 調査員は、注射点を標準化し、リンパシンチグラフィーに使用される注射方法に従って、最初の趾間腔に ICG を皮内注射します。 このようにして、研究者は表在リンパネットワークの同じ領域を体系的に強調します。

蛍光画像取得:

注射後、注射部位はテープで覆われ、カメラの過飽和を避け、ICG が皮膚に広がり、画像に望ましくない蛍光背景が映るのを防ぎます。 脚のリンパ流の蛍光画像を取得するために、近赤外蛍光画像システムが使用されます (Photo Dynamic Eye、または浜松ホトニクスの PDE カメラ - 日本)。 カメラは、Noga Tools の保持システムによって、調査フィールドから 15 cm 上の固定位置に維持されます。 増幅されたアナログ信号は、Terratec (Model Grabster AV 450 MX) のコンバーターによってデジタル信号に変換され、モニターに転送されます。これにより、リンパネットワークとリンパの流れをリアルタイムで視覚化できます。 画像は、専用の外付けハードディスク ドライブ Iomega、モデル MHDDU に記録されます。

セッションは、NIR 蛍光画像の取得を可能にするために、暗い部屋で行われます。

最初の著者とNIRFフィードバックの下で彼のチームによって開発された特定の手動リンパドレナージは、検査されたリンパ管にリンパが永久に含まれていることを確認するために、実験セッション全体で注射直後に実行されます。 オペレーターの手で、注入点から透明カフの遠位端の 5 cm 前の皮膚に描かれた限界線まで、リンパ液を推進します。 この最適化された手動リンパドレナージは、脚の遠位領域で表在リンパ管を簡単に検出し、関心のある領域をマークするために 3 分間実行されます。 MLD は、この実験の筆頭著者によって標準化されており、注射点で実現される 3 つの「充填」操作の、遠位から近位まで実行される連続的かつ反復的なシーケンスによって構成され、2 つの「ウォッシュ アウト」操作によって実現されます。注射点をカフ前の限界線まで。 次に、参照空間を制限するために、皮膚上に 50 mm の距離で 2 つの蛍光線が描かれます。

透明な血圧計のカフは、足首のすぐ上の脚の遠位部分に配置されます。

血圧計は圧力計に接続されており、水銀の mm を示します (Testo® 510 デジタル圧力計の精度は 0.1mmHg.)。

PDE カメラは、カフの中央の高さで、脚の長軸に垂直に維持されます。

観察されたリンパ管にリンパ液が確実に含まれていることを確認するために、蛍光リンパ液は、注射点から透明カフの遠位端の5 cm手前で皮膚に描かれた限界線まで、操作者の手ですべての経験の間に推進されます.

• 最初のステップ: ベースラインとして、膨張していないカフの下のリンパの流れを記録して観察します。
• 第 2 ステップ: カフを 30mmHg で膨張させ、3 回のリンパ流通過中に画像を記録します。

3 人の独立したオブザーバーが存在します。 彼らは、次の圧力ステップに進むことに同意するために、リンパの 3 つの通路を制御します。

- 3 番目のステップ: 調査員は、各増加で画像を記録する 10 mmHg の手順で膨張圧力を増加させます (各ステップでリンパ液の 3 つの通過を待ちます)。

実験は、研究者が透明なカフの下でリンパの進行が完全に停止したことを視覚的に確認するとすぐに完了します。 その時点で、リンパの流れが戻ったことを確認するために、圧力を 10mmHg 下げます。 このステップの後、研究者は、注射点から四肢の付け根までのリンパ管の画像を観察および記録します。