Presión de oclusión linfática en miembro inferior

Inyección de agente de contraste:

El verde de indocianina (ICG) es un tinte de tricarbocianina que se usa comúnmente para aplicaciones hepáticas, cardiovasculares, de cirugía plástica y oftalmológica. Suele inyectarse por vía intravenosa a una dosis comprendida entre 0,1 y 0,5 mg/kg. Después de la administración, el ICG se une a las proteínas plasmáticas, las lipoproteínas y los lípidos y, posteriormente, el hígado lo elimina rápida y completamente de la sangre. ICG se excita y emite fluorescencia en el infrarrojo cercano (alrededor de 800 nm).

En este estudio, los investigadores suspenderán el ICG en 25 ml de agua pura y posteriormente lo diluirán con agua pura para alcanzar una concentración final de 0,2 mg/ml. Cada sujeto recibirá una inyección intradérmica de 0,5 ml de ICG diluido (p. ej. 100 µg), utilizando una aguja hipodérmica. Los investigadores estandarizarán el punto de inyección e inyectarán ICG por vía intradérmica en el primer espacio interdigital, según el método de inyección utilizado para la linfogammagrafía. De esta forma, los investigadores destacan sistemáticamente la misma zona de la red linfática superficial.

Adquisición de imágenes de fluorescencia:

Después de la inyección, los sitios de inyección se cubrirán con cinta para evitar la sobresaturación de la cámara y para evitar la propagación de ICG en la piel y el fondo fluorescente no deseado en las imágenes. Para obtener imágenes de fluorescencia del flujo linfático de las piernas, se utilizará un sistema de imágenes de fluorescencia de infrarrojo cercano (Photo Dynamic Eye, o cámara PDE de Hamamatsu Photonics - Japón). La cámara se mantiene en una posición fija, 15 cm por encima del campo de investigación, mediante un sistema de sujeción de Noga Tools. La señal analógica amplificada es transformada en señal digital por un convertidor de Terratec (Modelo Grabster AV 450 MX) y transferida a un monitor, que permite visualizar la red linfática y el flujo linfático en tiempo real. Las imágenes se grabarán en una unidad de disco duro externa dedicada Iomega, modelo MDHDU.

La sesión tendrá lugar en una habitación oscura, para permitir la adquisición de imágenes de fluorescencia NIR.

El drenaje linfático manual específico, desarrollado por el primer autor y su equipo bajo la retroalimentación NIRF, se realiza inmediatamente después de la inyección, durante toda la sesión experimental para asegurarse de que los vasos linfáticos examinados contengan linfa de forma permanente. La linfa es impulsada con la mano del operador desde el punto de inyección hasta una línea límite trazada sobre la piel a 5 cm antes del extremo distal del manguito transparente. Este drenaje linfático manual optimizado se realizará durante 3 minutos para detectar fácilmente los vasos linfáticos superficiales en la región distal de la pierna y marcar el área de interés. El MLD está estandarizado por el primer autor para este experimento, y está compuesto por una secuencia continua y repetida, ejecutada de distal a proximal, de 3 maniobras de "llenado" realizadas en el punto de inyección, seguidas de 2 maniobras de "lavado" realizadas desde el punto de inyección hasta la línea límite antes del manguito. Luego, se dibujan dos líneas fluorescentes sobre la piel a una distancia de 50 mm para delimitar el espacio de referencia.

El manguito del esfigmomanómetro transparente se coloca en la parte distal de la pierna, justo por encima del tobillo.

El esfigmomanómetro está conectado a un medidor de presión, que indica mm de mercurio (Manómetro digital Testo® 510 con precisión de 0,1 mmHg.).

La cámara PDE se mantendrá perpendicularmente sobre el eje mayor de la pierna, a la altura de la mitad del manguito.

Para asegurarse de que los vasos linfáticos observados contienen linfa, la linfa fluorescente es impulsada durante toda la experiencia con la mano del operador desde el punto de inyección hasta una línea límite dibujada en la piel a 5 cm antes de la extremidad distal del manguito transparente. .

• Primer paso: como base registramos y observamos el flujo linfático debajo del manguito desinflado.
• Segundo paso: el manguito se infla a 30 mmHg, las imágenes se registran durante tres pasajes de flujo linfático.

Tres observadores independientes están presentes. Controlan los tres pasajes de la linfa para dar el consentimiento para pasar al siguiente paso de presión.

- Tercer paso: Los investigadores aumentan la presión de inflado en pasos de 10 mmHg registrando imágenes en cada aumento (esperando tres pasajes de linfa en cada paso).

El experimento se completa tan pronto como los investigadores observan visualmente la parada completa de la progresión de la linfa debajo del manguito transparente. En ese momento, se reduce la presión en 10 mmHg para validar el retorno del flujo linfático. Después de este paso, los investigadores observan y registran imágenes del vaso linfático desde el punto de inyección hasta la raíz de la extremidad.