Pression d'occlusion lymphatique dans le membre inférieur

Injection de produit de contraste :

Le vert d'indocyanine (ICG) est un colorant tricarbocyanine couramment utilisé pour les applications hépatiques, cardiovasculaires, de chirurgie plastique et d'ophtalmologie. Il est habituellement injecté par voie intraveineuse à une dose comprise entre 0,1 et 0,5 mg/kg. Après administration, l'ICG se lie aux protéines plasmatiques, aux lipoprotéines et aux lipides, et est ensuite rapidement et complètement éliminé du sang par le foie. L'ICG est excité et émet de la fluorescence dans le proche infrarouge (autour de 800 nm).

Dans cette étude, les chercheurs mettront en suspension l'ICG dans 25 ml d'eau pure et ensuite dilué avec de l'eau pure pour atteindre une concentration finale de 0,2 mg/ml. Chaque sujet recevra une injection intradermique de 0,5 ml d'ICG dilué (e.i. 100µg), à l'aide d'une aiguille hypodermique. Les enquêteurs standardiseront le point d'injection et injecteront l'ICG par voie intradermique dans le premier espace interdigital, selon la méthode d'injection utilisée pour la lymphoscintigraphie. De cette façon, les enquêteurs mettent en évidence systématiquement la même zone du réseau lymphatique superficiel.

Acquisition d'images de fluorescence :

Après l'injection, les sites d'injection seront recouverts de ruban adhésif pour éviter la sursaturation de la caméra et pour éviter la propagation de l'ICG sur la peau et un fond fluorescent indésirable sur les images. Pour obtenir une imagerie par fluorescence du flux lymphatique des jambes, un système d'imagerie par fluorescence dans le proche infrarouge sera utilisé (Photo Dynamic Eye, ou caméra PDE de Hamamatsu Photonics - Japon). La caméra est maintenue en position fixe, à 15 cm au-dessus du champ d'investigation, par un système de maintien de Noga Tools. Le signal analogique amplifié est transformé en signal numérique par un convertisseur de Terratec (Modèle Grabster AV 450 MX) et transféré à un moniteur, ce qui permet de visualiser le réseau lymphatique et le flux lymphatique en temps réel. Les images seront enregistrées sur un disque dur externe dédié Iomega, modèle MDHDU.

La séance se déroulera dans une chambre noire, pour permettre l'acquisition d'images en fluorescence NIR.

Un drainage lymphatique manuel spécifique, développé par le premier auteur et son équipe sous rétroaction NIRF, est réalisé immédiatement après l'injection, pendant toute la séance expérimentale afin de s'assurer que les vaisseaux lymphatiques examinés contiennent en permanence de la lymphe. La lymphe est propulsée avec la main de l'opérateur du point d'injection jusqu'à une ligne limite tracée sur la peau à 5 cm avant l'extrémité distale de la manchette transparente. Ce drainage lymphatique manuel optimisé sera réalisé pendant 3 minutes afin de détecter facilement les vaisseaux lymphatiques superficiels au niveau de la région distale de la jambe et de marquer la zone d'intérêt. La MLD est standardisée par le premier auteur pour cette expérience, et composée d'une séquence continue et répétée, exécutée de distal en proximal, de 3 manœuvres de "fill up" réalisées sur le point d'injection, suivies de 2 manœuvres de "wash out" réalisées à partir de le point d'injection à la ligne limite avant le brassard. Ensuite, deux lignes fluorescentes sont tracées sur la peau à une distance de 50 mm afin de limiter l'espace de référence.

Le brassard du tensiomètre transparent est placé sur la partie distale de la jambe, juste au-dessus de la cheville.

Le sphygmomanomètre est relié à un manomètre, indiquant mm de Mercure (Testo® 510 Digital Manometer précision 0.1mmHg.).

La caméra EDP sera maintenue perpendiculairement au grand axe de la jambe, au niveau du milieu de la manchette.

Afin de s'assurer que les vaisseaux lymphatiques observés contiennent de la lymphe, la lymphe fluorescente est propulsée pendant toute l'expérience avec la main de l'opérateur depuis le point d'injection jusqu'à une ligne limite tracée sur la peau à 5 cm avant l'extrémité distale de la manchette transparente .

• Première étape : comme ligne de base, nous enregistrons et observons le flux lymphatique sous le brassard non gonflé.
• Deuxième étape : le brassard est gonflé à 30 mmHg, les images sont enregistrées lors de trois passages de flux lymphatique.

Trois observateurs indépendants sont présents. Ils contrôlent les trois passages de la lymphe afin de donner le consentement pour passer à l'étape de pression suivante.

- Troisième étape : les enquêteurs augmentent la pression gonflée par paliers de 10 mmHg en enregistrant des images à chaque augmentation (en attendant trois passages de lymphe à chaque palier).

L'expérience est terminée dès que les enquêteurs constatent visuellement l'arrêt complet de la progression lymphatique sous la manchette transparente. A ce moment, la pression est réduite de 10mmHg afin de valider le retour du flux lymphatique. Après cette étape, les enquêteurs observent et enregistrent des images du vaisseau lymphatique depuis le point d'injection jusqu'à la racine du membre.