自体内皮祖细胞治疗糖尿病足

研究设计 该研究是一项前瞻性、非随机试验，在华东的两个中心——同济大学第十人民医院和南京市第一医院进行。 每个中心的伦理委员会都批准了该方案，所有患者都提供了书面知情同意书。 所有入组患者均自愿分配至CD133+细胞治疗组（CD133+组）和对照组。 本研究旨在评估动脉内输注自体 CD133+ 细胞对患有 PAD 的糖尿病患者的疗效和免疫调节影响。

患者登记和分组 年龄≥18 岁且卢瑟福分类 2 至 5 的糖尿病 PAD 患者被纳入以评估本研究的资格。 所有同意参与研究的患者均可自愿选择是否接受自体CD133+祖细胞治疗。

在这项研究中，CD133+ 细胞被用于刺激血管生成和重建有效的微血管血液供应，因此在患者进入之前，主要分支中相似的血流动力学状态对于满足两组的同质性是必不可少的。 受累肢体的主动脉（髂和股腘动脉）和 1 条腘动脉（前/后胫骨、腓骨）动脉腔内血运重建失败的候选人将被排除在研究之外。

其他排除标准如下：①血红蛋白<10mg/dl，②肌酐清除率<30ml/min，③既往干细胞/祖细胞治疗史，④因中枢神经系统疾病瘫痪，⑤意外截肢或骨折目标肢体因入院后外伤，⑥入院后停用抗血小板药物，⑦入院后吸烟或重新吸烟，⑧恶性肿瘤。

主动脉下、腘下动脉病变的治疗 计算机断层扫描血管造影（CTA）首先分析血管病变情况，然后进行数字减影血管造影（DSA）精确识别主动脉下和下动脉病变。治疗前的腘动脉。

主动脉下动脉病变的治疗仅限于腔内技术（球囊扩张和/或支架植入），但病变等级根据 TASC II 分类。 将动脉鞘引入对侧股动脉，顺行入路完成靶肢的血运重建。

在前面的程序之后，通过 DSA 重新评估腘下动脉的病变。 通过球囊扩张，至少有一条胫腓前/后动脉实现了明显的足部直供血。

上述程序的目标是完全恢复目标肢体正常的主干血流动力学状态。

自体CD133+细胞采集与制备 主动脉下、腘窝下血运重建成功后，经股动脉鞘采集患者外周血100ml，送华东干细胞库进行CD133+细胞分选富集。 使用 Ficoll 分离介质通过密度梯度离心从全血中分离单核细胞，然后使用磁激活细胞分选法选择 CD133+ 细胞。 将筛选出的细胞与含有人白蛋白和肝素钠的氯化钠注射液50ml血袋混合后送回医院4℃保存。 所有收集和准备程序在6小时内完成。

选定的细胞还需要进行质量测试，否则细胞将被丢弃，源患者将被排除在研究之外。 质量标准如下： 细胞数≥1×107，细胞悬液无可见沉淀，活细胞≥90%，内毒素≤2EU/ml 细胞输注步骤 将导管置入目标肢体胫骨平台腘动脉等级。 将 CD133+ 细胞悬浮液吸入 50ml 注射器中，并通过注射泵定时至 30 分钟通过导管注入。

对照组经导管输注含人白蛋白和肝素钠的无细胞氯化钠注射液50ml作为安慰剂。

药物治疗和生活方式改变 两组均在专科医师的指导下接受糖尿病、高血脂和高血压的持续药物治疗。 还需要每天使用 100 毫克肠溶阿司匹林和 75 毫克氯吡格雷进行抗血小板治疗，以及使用他汀类药物来稳定动脉斑块。

除了这些药物外，所有候选人在入境后都被严格要求戒烟。

随访和终点 患者在 18 个月时接受随访。 主要终点定义为溃疡加重（出现新的或更大或更深的溃疡）和截肢（跖骨水平以上）。 每月观察一次溃疡愈合及截肢情况。

记录Rurtherford分级变化、足背TcPO2和ABI，作为第二终点评价肢体在6个月和18个月时的血流灌注情况。

经证实，干细胞通过旁分泌高水平的血管内皮生长因子 (VEGF) 刺激内皮细胞增殖、迁移和存活来促进血管生成 [9]。 除了再生特性外，干细胞还具有免疫调节能力，并在一系列情况下诱导免疫抑制作用 [10]。 已发现人类干细胞可抑制活化巨噬细胞中白细胞介素 6 (IL-6) 的表达，这在伤口愈合的炎症反应中起着关键作用 [11]。 因此，测试了 CD133+ 细胞输注前和输注后 1、2、4 周时 VEGF 和 IL-6 的血清浓度，以评估该程序及其持续时间的促血管生成和免疫调节影响。