Células Progenitoras Endoteliais Autólogas Tratamento do Pé Diabético

Desenho do estudo O estudo foi um estudo prospectivo, não randomizado, conduzido em 2 centros no leste da China - Décimo Hospital Popular da Universidade de Tongji e Primeiro Hospital de Nanjing. O comitê de ética de cada centro aprovou o protocolo e todos os pacientes forneceram consentimento informado por escrito. Todos os pacientes inscritos foram designados para o grupo de tratamento com células CD133+ (grupo CD133+) e grupo de controle por sua própria vontade. Este estudo avalia a eficácia e o impacto imunorregulatório da infusão intra-arterial de células CD133+ autólogas em indivíduos diabéticos com DAP.

Inscrição e agrupamento de pacientes Pacientes diabéticos com DAP com idade ≥18 anos com categorias de Rutherford 2 a 5 foram incluídos para avaliar a elegibilidade para este estudo. Todos os pacientes, que concordaram em participar do estudo, poderiam escolher voluntariamente receber ou não tratamento autólogo com células progenitoras CD133+.

Neste estudo, as células CD133+ foram usadas para estimular a angiogênese e reconstruir o suprimento sanguíneo microvascular eficiente, portanto, um estado hemodinâmico semelhante no ramo principal foi essencial para encontrar a homogeneidade em ambos os grupos antes da entrada do paciente. Os candidatos que falhassem na revascularização intraluminal das artérias infra-aorta (ilíaca e femoral-poplítea) e 1 infra-poplítea (tibial anterior/posterior, fibular) do membro acometido seriam excluídos do estudo.

Outros critérios de exclusão foram os seguintes: ① Hemoglobina < 10 mg/dl, ② depuração de creatinina < 30 ml/min, ③ história anterior de terapia com células-tronco/progenitoras, ④ paralisia devido a doença do sistema neural central, ⑤ amputação acidental ou fratura óssea de membro alvo devido a trauma após a entrada, ⑥ interrupção da medicação antiplaquetária após a entrada, ⑦ fumar ou fumar novamente após a entrada, ⑧ tumor maligno.

Tratamento da lesão da artéria infra-aorta e infra-poplítea A angiotomografia computadorizada (CTA) foi realizada primeiro para analisar a condição da lesão vascular e, em seguida, a angiografia por subtração digital (DSA) foi realizada para identificar com precisão as lesões da infra-aorta e do infra- artérias poplíteas antes do tratamento.

O tratamento da lesão da artéria infra-aorta foi restrito pela técnica intraluminal (dilatação com balão e/ou implante de stent), porém o grau da lesão segundo a classificação TASC II. A bainha arterial foi introduzida na artéria femoral contralateral, e então a revascularização do membro alvo foi realizada por via anterógrada.

Após o procedimento anterior, as lesões das artérias infra-poplíteas foram reavaliadas pela DSA. Por meio da dilatação do balão, pelo menos uma das artérias tibial anterior/posterior e fibular conseguiu um suprimento sanguíneo direto óbvio para o pé.

O objetivo dos procedimentos acima é restaurar completamente o estado hemodinâmico normal do tronco principal do membro alvo.

Coleta e preparação de células CD133+ autólogas Após a revascularização bem-sucedida do procedimento infra-aorta e infra-poplíteo, 100ml de sangue periférico foram coletados através da bainha da artéria femoral em pacientes e enviados ao East China Stem Cell Bank para triagem e enriquecimento de células CD133+. As células mononucleares são separadas do sangue total por centrifugação de gradiente de densidade com meio de separação Ficoll, em seguida, as células CD133+ são selecionadas usando classificação de células ativadas por magnetismo. As células selecionadas foram misturadas com 50ml de injeção de cloreto de sódio, que contém albumina humana e heparina sódica na bolsa de sangue, e então enviadas de volta ao hospital armazenadas em 4℃. Todos os procedimentos de coleta e preparação foram concluídos em 6 horas.

As células selecionadas também precisam passar por um teste de qualidade, caso contrário as células seriam descartadas e o paciente fonte seria excluído do estudo. Os padrões de qualidade são os seguintes: número de células ≥ 1×107, nenhum precipitado visível na suspensão de células, células viáveis ​​≥90%, endotoxina ≤ 2EU/ml Procedimento de infusão celular Um cateter foi introduzido na artéria poplítea do membro alvo no planalto tibial nível. A suspensão de células CD133+ foi retirada para uma seringa de 50 ml e infundida através do cateter por uma bomba de injeção cronometrada para 30 minutos.

Para o grupo controle, 50ml de injeção de cloreto de sódio livre de células contendo albumina humana e heparina sódica foram infundidos através do cateter como placebo.

Medicação e mudança de estilo de vida Ambos os grupos foram orientados a receber medicação contínua para diabetes, hiperlipidemia e hipertensão sob orientação de médicos especializados. Também foi solicitado tratamento antiplaquetário com aspirina com revestimento entérico 100mg e clopidogrel 75mg ao dia, bem como administração de estatinas para estabilização da placa arterial.

Além desses medicamentos, todos os candidatos foram restritos a parar de fumar após a entrada.

Acompanhamento e pontos finais Os pacientes foram acompanhados por 18 meses. Os endpoints primários foram definidos como o agravamento da úlcera (desenvolvimento de úlceras novas ou maiores ou mais profundas) e a amputação (acima do nível do metatarso). A cicatrização da úlcera e o estado de amputação foram observados mensalmente.

A alteração da classificação de Rurtherford, TcPO2 do dorso do pé e ITB foram registrados para avaliar a perfusão sanguínea do membro aos 6 e 18 meses como segundo desfecho.

Conforme comprovado, as células-tronco promovem a angiogênese por meio da estimulação da proliferação, migração e sobrevivência das células endoteliais por parácrinas de altos níveis do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) [9]. Além das propriedades regenerativas, as células-tronco possuem capacidade imunorreguladora e induzem efeitos imunossupressores em uma série de situações [10]. Descobriu-se que as células-tronco humanas suprimem a expressão de interleucina-6 (IL-6) em macrófagos ativados, que desempenha um papel fundamental na resposta inflamatória na cicatrização de feridas [11]. Assim, as concentrações séricas de VEGF e IL-6 antes e 1, 2, 4 semanas após a infusão de células CD133+ foram testadas para avaliar o impacto pró-angiogênese e imunorregulador do procedimento e sua duração.