糖尿病性足の自家内皮前駆細胞の治療

研究デザイン この研究は、中国東部の 2 つのセンター - 同済大学の第 10 人民病院と南京第一病院で実施された前向き非無作為化試験でした。 各センターの倫理委員会がプロトコルを承認し、すべての患者が書面によるインフォームド コンセントを提供しました。 登録されたすべての患者は、CD133+ 細胞治療群 (CD133+ 群) と対照群に自分の意志で割り当てられました。 この研究は、PADを有する糖尿病患者に対する自己CD133+細胞の動脈内注入の有効性と免疫調節への影響を評価することです。

患者の登録とグループ化 ラザフォード カテゴリー 2 ～ 5 の 18 歳以上の糖尿病 PAD 患者が、この研究の適格性を評価するために含まれました。 研究への参加に同意したすべての患者は、自己 CD133+ 前駆細胞治療を受けるかどうかを任意に選択できました。

この研究では、CD133 + 細胞を使用して血管新生を刺激し、効率的な微小血管の血液供給を再構築したため、患者が入院する前に両方のグループで均一性を満たすために、主枝の同様の血行動態状態が不可欠でした。 大動脈下 (腸骨および大腿膝窩動脈) および 1 つの膝窩下 (前/後脛骨、腓骨) 動脈の管腔内血行再建術に失敗した候補者は、研究から除外されます。

その他の除外基準は、①ヘモグロビン＜10mg/dl、②クレアチニンクリアランス＜30ml/分、③幹細胞・前駆細胞療法の既往、④中枢神経系疾患による麻痺、⑤不慮の切断・骨折。入国後の外傷による対象肢の脱落、⑥入国後の抗血小板薬の中止、⑦入国後の喫煙または再喫煙、⑧悪性腫瘍。

大動脈下および膝窩下動脈病変の治療 コンピュータ断層撮影血管造影法 (CTA) を実行して血管病変の状態を分析し、次にデジタル サブトラクション血管造影法 (DSA) を実行して大動脈下および膝窩下動脈の病変を正確に特定しました。治療前の膝窩動脈。

大動脈下動脈病変の治療は、TASC II分類による病変のグレードにもかかわらず、管腔内技術（バルーン拡張および/またはステント移植）で制限的に行われました。 動脈シースを対側の大腿動脈に導入し、次に順行性アプローチによって標的肢の血行再建を行った。

前の手順の後、膝窩下動脈の病変を DSA で再評価しました。 バルーン拡張により、前/後脛骨動脈および腓骨動脈の少なくとも 1 つが、明らかに足への直接的な血液供給を達成しました。

上記の手順の目標は、対象肢の正常な主幹の血行動態状態を完全に回復することです。

自家 CD133+ 細胞の収集と準備 大動脈下および膝窩下手順の血行再建術が成功した後、患者の大腿動脈鞘から 100ml の末梢血が収集され、CD133+ 細胞の選別と濃縮のために中国東部幹細胞バンクに送られました。 フィコール分離媒体を用いた密度勾配遠心分離により全血から単核細胞を分離し、磁気活性化セルソーティングを使用して CD133+ 細胞を選択します。 選択した細胞は、血液バッグにヒトアルブミンとヘパリンナトリウムを含む50mlの塩化ナトリウム注射液と混合し、4℃で保存して病院に送り返しました。 すべての収集と準備手順は 6 時間以内に終了しました。

選択された細胞も品質テストを受ける必要があります。そうしないと、細胞は破棄され、ソースの患者は研究から除外されます。 品質基準は次のとおりです: 細胞数 ≥ 1×107、細胞懸濁液に目に見える沈殿物がない、生存細胞 ≥90%、エンドトキシン ≤ 2EU/ml 細胞注入手順レベル。 ＣＤ１３３＋細胞懸濁液を５０ｍｌ注射器に吸引し、注射ポンプのタイミングでカテーテルを通して３０分注入した。

対照群には、ヒトアルブミンとヘパリンナトリウムを含む無細胞塩化ナトリウム注射液50mlをプラセボとしてカテーテルから注入した。

投薬とライフスタイルの変更 両方のグループは、専門医のアドバイスの下で、糖尿病、高脂血症、高血圧の継続的な投薬を受けるように求められました。 100mgの腸溶性アスピリンと75mgのクロピドグレルを毎日服用する抗血小板治療と、動脈プラークを安定させるためのスタチン投与も求められました。

これらの投薬に加えて、すべての候補者は、入場後に禁煙するように制限されました.

フォローアップとエンドポイント 患者は 18 か月でフォローアップされました。 主要エンドポイントは、潰瘍の悪化（新しい潰瘍またはより大きな潰瘍またはより深い潰瘍の発症）および切断（中足骨レベルより上）として定義されました。 潰瘍の治癒と切断の状態を毎月観察しました。

ラザフォード分類の変化、足背の TcPO2 および ABI を記録し、2 番目のエンドポイントとして 6 か月および 18 か月で四肢の血液灌流を評価しました。

証明されているように、幹細胞は、高レベルの血管内皮増殖因子 (VEGF) のパラクリンによる内皮細胞の増殖、移動、および生存の刺激を通じて血管新生を促進します [9]。 再生特性に加えて、幹細胞には免疫調節能力があり、一連の状況で免疫抑制効果を誘発します [10]。 ヒト幹細胞は、活性化マクロファージにおけるインターロイキン-6 (IL-6) の発現を抑制することがわかっています。これは、創傷治癒における炎症反応において重要な役割を果たします [11]。 したがって、CD133 + 細胞注入の前と 1、2、4 週間後の VEGF と IL-6 の血清濃度をテストして、手順とその期間の血管新生促進と免疫調節への影響を評価しました。