Autologní endoteliální progenitorové buňky Léčba diabetické nohy

Design studie Studie byla prospektivní, nerandomizovaná studie provedená ve 2 centrech ve východní Číně – Desátá lidová nemocnice Tongji University a Nanjing First Hospital. Etická komise v každém centru schválila protokol a všichni pacienti poskytli písemný informovaný souhlas. Všichni zařazení pacienti byli zařazeni do skupiny léčené buňkami CD133+ (skupina CD133+) a kontrolní skupiny podle vlastní vůle. Tato studie má vyhodnotit účinnost a imunoregulační dopad intraarteriální infuze autologních CD133+ buněk na diabetické subjekty s PAD.

Zařazování pacientů a seskupování pacientů s diabetem PAD ve věku ≥ 18 let s Rutherfordovou kategorií 2 až 5 byli zahrnuti k posouzení způsobilosti pro tuto studii. Všichni pacienti, kteří souhlasili s účastí ve studii, se mohli dobrovolně rozhodnout, zda dostanou léčbu autologními CD133+ progenitorovými buňkami či nikoli.

V této studii byly CD133+ buňky použity ke stimulaci angiogeneze a rekonstrukci účinného mikrovaskulárního krevního zásobení, proto byl podobný hemodynamický stav v hlavní větvi nezbytný pro dosažení homogenity v obou skupinách před vstupem pacienta. Kandidáti, u kterých selhala intraluminální revaskularizace infraaorty (iliakální a femorálně-popliteální) a 1 infrapopliteální (přední/zadní tibiální, fibulární) tepny postižené končetiny, budou ze studie vyloučeni.

Další vylučovací kritéria byla následující: ① Hemoglobin < 10 mg/dl, ② clearance kreatininu < 30 ml/min, ③ předchozí léčba kmenovými/progenitorovými buňkami, ④ paralýza v důsledku onemocnění centrálního nervového systému, ⑤ náhodná amputace nebo zlomenina kosti cílová končetina v důsledku traumatu po vstupu, ⑥ zastavení antiagregační léčby po vstupu, ⑦ kouření nebo opětovné kouření po vstupu, ⑧ maligní nádor.

Léčba léze infraaorty a infra-popliteální arterie Byla provedena počítačová tomografická angiografie (CTA) za účelem nejprve analyzovat stav vaskulární léze a poté byla provedena digitální subtrakční angiografie (DSA) k přesné identifikaci lézí infraaorty a infra-aorty. podkolenní tepny před léčbou.

Léčba léze infraaorty byla omezena intraluminální technikou (balónková dilatace a/nebo implantace stentu), nicméně stupeň léze podle klasifikace TASC II. Arteriální pouzdro bylo zavedeno do kontralaterální femorální arterie a poté byla provedena revaskularizace cílové končetiny antegrádním přístupem.

Po předchozím výkonu byly léze infrapopliteálních tepen přehodnoceny pomocí DSA. Pomocí balónkové dilatace dosáhla alespoň jedna z předních/zadních tibiálních a fibulárních tepen zřejmého přímého prokrvení nohy.

Cílem výše uvedených postupů je úplné obnovení normálního hemodynamického stavu hlavního trupu cílové končetiny.

Odběr a příprava autologních CD133+ buněk Po úspěšné revaskularizaci infraaorty a infrapopliteálního postupu bylo pacientům odebráno 100 ml periferní krve přes pochvu femorální artérie a odesláno do East China Stem Cell Bank pro třídění a obohacení CD133+ buněk. Mononukleární buňky jsou separovány z plné krve centrifugací v hustotním gradientu s Ficoll separačním médiem, poté jsou CD133+ buňky selektovány pomocí magneticky aktivovaného třídění buněk. Vybrané buňky byly smíchány s 50 ml injekce chloridu sodného, ​​který obsahuje lidský albumin a heparin sodný v krevním vaku, a poté odeslány zpět do nemocnice skladované při 4 °C. Všechny postupy odběru a přípravy byly dokončeny do 6 hodin.

Vybrané buňky musí také projít testem kvality, jinak by byly buňky vyřazeny a zdrojový pacient by byl vyloučen ze studie. Standardy kvality jsou následující: počet buněk ≥ 1 × 107, žádná viditelná sraženina v buněčné suspenzi, životaschopná buňka ≥ 90 %, endotoxin ≤ 2 EU/ml Postup buněčné infuze Katétr byl zaveden do popliteální arterie cílové končetiny v tibiálním plató úroveň. Suspenze CD133+ buněk byla natažena do 50ml injekční stříkačky a infundována přes katétr injekční pumpou načasovanou na 30 minut.

Kontrolní skupině bylo katetrem jako placebo infundováno 50 ml injekce chloridu sodného bez buněk obsahující lidský albumin a heparin sodný.

Medikace a změna životního stylu Obě skupiny byly požádány, aby dostávaly kontinuální medikaci na diabetes, hyperlipidémii a hypertenzi podle doporučení specializovaných lékařů. Požadována byla i protidestičková léčba 100 mg enterosolventního aspirinu a 75 mg klopidogrelu denně a podávání statinů ke stabilizaci arteriálního plátu.

Kromě těchto léků byli všichni kandidáti omezeně požádáni, aby po vstupu přestali kouřit.

Sledování a koncové body Pacienti byli sledováni po 18 měsících. Primární cílové parametry byly definovány jako zhoršení vředu (vznik nových nebo větších nebo hlubších vředů) a amputace (nad úrovní metatarzu). Hojení vředu a stav amputace byly sledovány měsíčně.

Změna Rurtherfordovy klasifikace, TcPO2 dorsum pedis a ABI byly zaznamenány pro hodnocení krevní perfuze končetiny v 6. a 18. měsíci jako druhý cíl.

Jak bylo prokázáno, kmenové buňky podporují angiogenezi prostřednictvím stimulace proliferace, migrace a přežití endoteliálních buněk pomocí parakrinních vysokých hladin vaskulárního endoteliálního růstového faktoru (VEGF) [9]. Kromě regeneračních vlastností mají kmenové buňky imunoregulační schopnost a vyvolávají imunosupresivní účinky v řadě situací [10]. Bylo zjištěno, že lidské kmenové buňky potlačují expresi interleukinu-6 (IL-6) v aktivovaných makrofázích, který hraje klíčovou roli v zánětlivé odpovědi při hojení ran [11]. Byly tedy testovány sérové ​​koncentrace VEGF a IL-6 před a 1, 2, 4 týdny po infuzi buněk CD133+, aby se vyhodnotil proangiogenetický a imunoregulační dopad postupu a jeho trvání.