Autológ endothel progenitor sejtek diabéteszes láb kezelése

A vizsgálat felépítése A tanulmány egy prospektív, nem véletlenszerű vizsgálat volt, amelyet két kelet-kínai központban – a Tongji Egyetem Tizedik Népi Kórházában és a Nanjing Első Kórházban – végeztek. Az egyes központok etikai bizottsága jóváhagyta a protokollt, és minden beteg írásos beleegyezését adta. Minden bevont beteget saját elhatározása szerint besoroltak a CD133+ sejtekkel kezelt csoportba (CD133+ csoport) és a kontrollcsoportba. Ez a tanulmány az autológ CD133+ sejtek intraartériás infúziójának hatékonyságát és immunszabályozó hatását kívánja értékelni PAD-ban szenvedő cukorbeteg alanyokon.

Betegek besorolása és csoportosítása A 2–5. Rutherford kategóriájú, 18 év feletti diabéteszes PAD-betegeket bevontuk a vizsgálatba való alkalmasság értékelésére. Minden beteg, aki beleegyezett, hogy részt vegyen a vizsgálatban, önként választhatott, hogy részesül-e autológ CD133+ progenitor sejt kezelésben vagy sem.

Ebben a vizsgálatban CD133+ sejteket használtunk az angiogenezis serkentésére és a hatékony mikrovaszkuláris vérellátás rekonstrukciójára, ezért a fő ág hasonló hemodinamikai státusza elengedhetetlen volt ahhoz, hogy mindkét csoportban homogenitást biztosítsunk a betegbelépés előtt. Azokat a jelölteket, akiknél nem sikerült az érintett végtag infra-aortájának (iliaca és femoralis-poplitealis) és 1 infra-poplitealis (anterior/posterior tibialis, fibularis) artériának intraluminalis revaszkularizációja, kizárásra kerültek a vizsgálatból.

További kizárási kritériumok a következők voltak: ① hemoglobin < 10 mg/dl, ② kreatinin clearance < 30 ml/perc, ③ korábbi őssejt/progenitor sejt terápia, ④ központi idegrendszeri betegség miatti bénulás, ⑤ véletlen amputáció vagy csonttörés célvégtag belépés utáni trauma miatt, ⑥ belépés után a vérlemezke-ellenes gyógyszer szedésének abbahagyása, ⑦ dohányzás vagy újradohányzás belépés után, ⑧ rosszindulatú daganat.

Infra-aorta és infra-poplitealis lézió kezelése Első lépésben a vaszkuláris lézió állapotának elemzésére számítógépes tomográfiás angiográfiát (CTA), majd digitális kivonásos angiográfiát (DSA) végeztünk az infra-aorta és az infravörös léziók pontos azonosítására. poplitealis artériák kezelés előtt.

Az artéria infra-aorta léziójának kezelése korlátozottan intraluminális technikával (ballontágítás és/vagy stent beültetés) történt, ennek ellenére a lézió TASC II besorolás szerinti fokozata. Az artériás hüvelyt az ellenoldali femoralis artériába vezettük be, majd antegrád megközelítéssel a célvégtag revaszkularizációját végeztük el.

Az előző eljárás után az infra-poplitealis artériák elváltozásait DSA-val újraértékeltük. A ballonos tágítás révén az anterior/posterior tibialis és fibularis artériák közül legalább az egyik nyilvánvaló közvetlen vérellátást ért el a lábban.

A fenti eljárások célja a célvégtag normál főtörzs hemodinamikai állapotának teljes helyreállítása.

Autológ CD133+ sejtek gyűjtése és előkészítése Az infra-aorta és infra-poplitealis sikeres revascularisatiója után 100 ml perifériás vért gyűjtöttünk a femoralis artéria hüvelyen keresztül, és elküldtük a Kelet-Kínai Őssejtbankba CD133+ sejtek válogatása és dúsítása céljából. A mononukleáris sejteket a teljes vértől sűrűséggradiens centrifugálással választjuk el Ficoll elválasztó tápközeggel, majd a CD133+ sejteket mágnesesen aktivált sejtválogatással szelektáljuk. A kiválasztott sejteket összekevertük 50 ml nátrium-klorid injekcióval, amely humán albumint és heparin-nátriumot tartalmaz a vérzsákban, majd visszaküldtük a kórházba 4 C-on tárolva. Minden begyűjtési és előkészítési eljárás 6 órán belül befejeződött.

A kiválasztott sejteknek minőségi tesztet is el kell végezniük, különben a sejteket eldobnák, és a kiindulási beteget kizárnák a vizsgálatból. A minőségi szabványok a következők: sejtszám ≥ 1×107, nincs látható csapadék a sejtszuszpenzióban, életképes sejt ≥90%, endotoxin ≤ 2EU/ml Sejtinfúziós eljárás A célvégtag popliteális artériájába katétert vezettünk be a tibia platóján szint. A CD133+ sejtszuszpenziót egy 50 ml-es fecskendőbe szívtuk, és a katéteren keresztül infundáltuk egy injekciós pumpa segítségével 30 percre.

A kontrollcsoport számára 50 ml sejtmentes, humán albumint és heparin-nátriumot tartalmazó nátrium-klorid injekciót adtunk be a katéteren keresztül placeboként.

Gyógyszerkezelés és életmódváltás Mindkét csoportot folyamatos gyógyszeres kezelésre kérték a cukorbetegség, a hiperlipidémia és a magas vérnyomás kezelésére szakorvosok tanácsára. A vérlemezke-aggregáció elleni kezelést napi 100 mg bélben oldódó aszpirinnel és 75 mg klopidogrellel, valamint az artériás plakk stabilizálására szolgáló sztatinok adását is igényelték.

Ezeken a gyógyszereken kívül minden jelöltet korlátozott számban kértek a dohányzás abbahagyására a belépés után.

Nyomon követés és végpontok A betegeket 18 hónapos korban követték nyomon. Az elsődleges végpontok a fekély súlyosbodása (új vagy nagyobb vagy mélyebb fekélyek kialakulása) és az amputáció (a lábközépcsont szint felett) voltak. A fekély gyógyulását és az amputáció állapotát havonta figyelték meg.

Második végpontként a Rurtherford-osztályozás változását, a dorsum pedis TcPO2-jét és az ABI-t rögzítettük a végtag vérperfúziójának értékelésére a 6. és a 18. hónapban.

Bizonyított, hogy az őssejtek elősegítik az angiogenezist azáltal, hogy stimulálják az endothelsejtek proliferációját, migrációját, valamint a magas szintű vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) parakrin általi túlélését [9]. A regeneratív tulajdonságok mellett az őssejtek immunszabályozó képességgel is rendelkeznek, és számos helyzetben immunszuppresszív hatást váltanak ki [10]. Azt találták, hogy a humán őssejtek elnyomják az interleukin-6 (IL-6) expresszióját az aktivált makrofágokban, ami kulcsszerepet játszik a sebgyógyulásban a gyulladásos válaszban [11]. Így a VEGF és az IL-6 szérumkoncentrációit a CD133+ sejtinfúzió előtt és után 1, 2, 4 héttel teszteltük, hogy értékeljük az eljárás pro-angiogenezist és immunregulációs hatását, valamint időtartamát.