Diabeettisen jalan autologiset endoteelisolut

Tutkimussuunnitelma Tutkimus oli prospektiivinen, ei-satunnaistettu koe, joka suoritettiin kahdessa Itä-Kiinan keskustassa - Tongjin yliopiston kymmenennessä kansansairaalassa ja Nanjingin ensimmäisessä sairaalassa. Jokaisen keskuksen eettinen komitea hyväksyi protokollan, ja kaikki potilaat antoivat kirjallisen suostumuksen. Kaikki tutkimukseen osallistuneet potilaat jaettiin CD133+-solujen hoitoryhmään (CD133+-ryhmä) ja kontrolliryhmään heidän omasta tahdostaan. Tämän tutkimuksen tarkoituksena on arvioida autologisten CD133+-solujen valtimonsisäisen infuusion tehoa ja immuunisäätelyvaikutusta diabeettisille potilaille, joilla on PAD.

Potilaiden rekisteröinti ja ryhmittely Diabeettiset PAD-potilaat, joiden ikä oli ≥ 18 vuotta ja jotka kuuluvat Rutherfordin luokkiin 2–5, otettiin mukaan arvioimaan kelpoisuutta tähän tutkimukseen. Kaikki potilaat, jotka suostuivat osallistumaan tutkimukseen, saattoivat vapaaehtoisesti valita, saavatko he autologisen CD133+-kantasoluhoidon vai eivät.

Tässä tutkimuksessa CD133+-soluja käytettiin stimuloimaan angiogeneesiä ja rekonstruoimaan tehokasta mikrovaskulaarista verenkiertoa, minkä vuoksi samanlainen hemodynaaminen tila päähaarassa oli välttämätön homogeenisyyden saavuttamiseksi molemmissa ryhmissä ennen potilaan tuloa. Ehdokkaat, joille ei onnistuttu saamaan vaurioituneen raajan infra-aortan (suoliluun ja femoraalin-popliteaalin) ja 1 infra-popliteaalisen (etu-/posteriorinen sääriluun, fibulaarinen) valtimon intraluminaalinen revaskularisaatio, suljettiin pois tutkimuksesta.

Muut poissulkemiskriteerit olivat seuraavat: ① Hemoglobiini < 10 mg/dl, ② kreatiniinipuhdistuma < 30 ml/min, ③ aikaisempi kanta-/esisoluhoito, ④ keskushermoston sairauden aiheuttama halvaus, ⑤ vahingossa tapahtunut amputaatio tai luunmurtuma kohderaaja trauman vuoksi sisääntulon jälkeen, ⑥ verihiutaleiden vastaisen lääkityksen lopettaminen sisääntulon jälkeen, ⑦ tupakointi tai uudelleentupakointi sisääntulon jälkeen, ⑧ pahanlaatuinen kasvain.

Infra-aortan ja infra-popliteaalisen valtimovaurion hoito Tietokonetomografinen angiografia (CTA) suoritettiin ensin verisuonivaurion tilan analysoimiseksi ja sitten digitaalinen vähennysangiografia (DSA) infra-aortan ja infra-aortan leesioiden tunnistamiseksi tarkasti. polvitaipeen valtimot ennen hoitoa.

Infra-aortan valtimoleesion hoito suoritettiin rajoitetusti intraluminaalisella tekniikalla (pallolaajennus ja/tai stentti-istutus), kuitenkin leesion asteella TASC II -luokituksen mukaan. Valtimovaippa vietiin kontralateraaliseen reisivaltimoon, ja sitten kohderaajan revaskularisaatio suoritettiin antegradisella lähestymistavalla.

Edellisen toimenpiteen jälkeen intrapoliittisten valtimoiden vauriot arvioitiin uudelleen DSA:lla. Pallolaajennuksella ainakin yksi anteriorisista/takaisista sääri- ja fibulaarisista valtimoista saavutti ilmeisen suoran verenkierron jalkaan.

Yllä olevien toimenpiteiden tavoitteena on palauttaa kohderaajan normaali rungon hemodynaaminen tila kokonaan.

Autologisten CD133+-solujen kerääminen ja valmistelu Infra-aortan ja infra-popliteaalisen toimenpiteen onnistuneen revaskularisoinnin jälkeen potilailta kerättiin 100 ml perifeeristä verta reisivaltimon tupen kautta ja lähetettiin Itä-Kiinan kantasolupankkiin CD133+-solujen lajittelua ja rikastamista varten. Mononukleaariset solut erotetaan kokoverestä tiheysgradienttisentrifugoinnilla Ficoll-erotusväliaineella, minkä jälkeen CD133+-solut valitaan käyttämällä magneettiaktivoitua solulajittelua. Valitut solut sekoitettiin 50 ml:aan natriumkloridi-injektiota, joka sisältää ihmisen albumiinia ja hepariininatriumia veripussissa, ja lähetettiin sitten takaisin sairaalaan säilytettynä 4 ℃:ssa. Kaikki keräys- ja valmistustoimenpiteet saatiin päätökseen 6 tunnin kuluessa.

Valituille soluille on myös tehtävä laatutesti, muuten solut hylätään ja lähdepotilas suljettaisiin pois tutkimuksesta. Laatustandardit ovat seuraavat: solujen lukumäärä ≥ 1×107, ei näkyvää sakkaa solususpensiossa, eläviä soluja ≥90 %, endotoksiini ≤ 2EU/ml Soluinfuusiotoimenpiteet Katetri vietiin kohderaajan polvivaltimoon sääriluun tasannelle taso. CD133+-solususpensio vedettiin 50 ml:n ruiskuun ja infusoitiin katetrin läpi injektiopumpulla ajoituksella 30 minuuttia.

Kontrolliryhmälle 50 ml soluvapaata natriumkloridi-injektiota, joka sisälsi ihmisen albumiinia ja hepariininatriumia, infusoitiin katetrin läpi lumelääkkeenä.

Lääkitys ja elämäntapamuutos Molemmissa ryhmissä pyydettiin jatkuvaa lääkitystä diabetekseen, hyperlipidemiaan ja verenpainetautiin erikoislääkärien ohjeiden mukaisesti. Vaadittiin myös verihiutaleiden estohoitoa 100 mg:lla enteropäällystettyä aspiriinia ja 75 mg klopidogreelia päivittäin sekä statiinien antamista valtimoplakin stabiloimiseksi.

Näiden lääkkeiden lisäksi kaikkia ehdokkaita pyydettiin rajoitetusti lopettamaan tupakointi maahantulon jälkeen.

Seuranta ja päätepisteet Potilaita seurattiin 18 kuukauden kuluttua. Ensisijaisiksi päätepisteiksi määriteltiin haavan paheneminen (uusien tai suurempien tai syvempien haavaumien kehittyminen) ja amputaatioksi (jalkapöydän tason yläpuolella). Haavan paranemista ja amputaatiotilaa tarkkailtiin kuukausittain.

Rurtherford-luokituksen muutos, dorsum pediksen TcPO2 ja ABI rekisteröitiin raajan veren perfuusion arvioimiseksi 6 ja 18 kuukauden kohdalla toisiksi päätepisteiksi.

Kuten on todistettu, kantasolut edistävät angiogeneesiä stimuloimalla endoteelisolujen proliferaatiota, migraatiota ja eloonjäämistä parakriinin vaikutuksesta verisuonten endoteelikasvutekijän (VEGF) korkeiden tasojen [9]. Regeneratiivisten ominaisuuksien lisäksi kantasoluilla on immuunisäätelykykyä ja ne aiheuttavat immunosuppressiivisia vaikutuksia useissa tilanteissa [10]. Ihmisen kantasolujen on havaittu suppressoivan interleukiini-6:n (IL-6) ilmentymistä aktivoiduissa makrofageissa, millä on keskeinen rooli tulehdusvasteessa haavan paranemisessa [11]. Siten seerumin VEGF- ja IL-6-pitoisuudet ennen ja 1, 2, 4 viikkoa CD133+-soluinfuusion jälkeen testattiin toimenpiteen pro-angiogeneesin ja immunosäätelyvaikutuksen sekä sen keston arvioimiseksi.