Behandlung des diabetischen Fußes mit autologen endothelialen Vorläuferzellen

Studiendesign Die Studie war eine prospektive, nicht randomisierte Studie, die an zwei Zentren in Ostchina durchgeführt wurde – dem Zehnten Volkskrankenhaus der Tongji-Universität und dem Ersten Krankenhaus von Nanjing. Die Ethikkommission jedes Zentrums genehmigte das Protokoll, und alle Patienten gaben eine schriftliche Einverständniserklärung ab. Alle aufgenommenen Patienten wurden auf eigenen Wunsch der Behandlungsgruppe mit CD133+-Zellen (CD133+-Gruppe) und der Kontrollgruppe zugeordnet. Diese Studie soll die Wirksamkeit und immunregulatorische Wirkung einer intraarteriellen Infusion von autologen CD133+-Zellen bei Diabetikern mit pAVK bewerten.

Patientenrekrutierung und Gruppierung PAD-Patienten mit Diabetes im Alter von ≥ 18 Jahren mit den Rutherford-Kategorien 2 bis 5 wurden eingeschlossen, um die Eignung für diese Studie zu beurteilen. Alle Patienten, die sich bereit erklärten, an der Studie teilzunehmen, konnten freiwillig wählen, ob sie eine Behandlung mit autologen CD133+-Vorläuferzellen erhalten wollten oder nicht.

In dieser Studie wurden CD133+-Zellen verwendet, um die Angiogenese zu stimulieren und eine effiziente mikrovaskuläre Blutversorgung zu rekonstruieren, daher war ein ähnlicher hämodynamischer Status im Hauptast wesentlich, um Homogenität in beiden Gruppen vor dem Eintritt des Patienten zu erreichen. Die Kandidaten, bei denen die intraluminale Revaskularisierung der Infraaorta (Iliakal- und Femoral-Popliteal) und 1 Infrapoplitealarterie (vordere/hintere Tibia, Fibula) der betroffenen Extremität fehlschlug, würden von der Studie ausgeschlossen.

Andere Ausschlusskriterien waren wie folgt: ① Hämoglobin < 10 mg/dl, ② Kreatinin-Clearance < 30 ml/min, ③ Vorgeschichte einer Stamm-/Vorläuferzelltherapie, ④ Lähmung aufgrund einer Erkrankung des zentralen Nervensystems, ⑤ Unfallamputation oder Knochenbruch Zielglied aufgrund eines Traumas nach dem Eintritt, ⑥ Stopp der Thrombozytenaggregationshemmer nach dem Eintritt, ⑦ Rauchen oder Wiederrauchen nach dem Eintritt, ⑧ bösartiger Tumor.

Behandlung von Infraaorta- und Infrapoplitealarterienläsion Eine Computertomographie-Angiographie (CTA) wurde durchgeführt, um zunächst den Zustand der Gefäßläsion zu analysieren, und dann wurde eine digitale Subtraktionsangiographie (DSA) durchgeführt, um die Läsionen der Infraaorta und der Infra- Kniekehlenarterien vor der Behandlung.

Die Behandlung der Arterienläsion infraaorta wurde eingeschränkt mit intraluminaler Technik (Ballondilatation und/oder Stentimplantation) durchgeführt, jedoch mit dem Grad der Läsion gemäß TASC II-Klassifikation. Die Arterienscheide wurde in die kontralaterale Femoralarterie eingeführt, und dann wurde die Revaskularisierung der Zielgliedmaße durch einen antegraden Zugang erreicht.

Nach dem vorherigen Verfahren wurden die Läsionen der Infrapoplitealarterien erneut durch DSA bewertet. Mittels Ballondilatation wird zumindest eine der vorderen/hinteren Schienbein- und Wadenbeinarterien offensichtlich direkt mit Blut versorgt.

Das Ziel der oben genannten Verfahren ist die vollständige Wiederherstellung des normalen hämodynamischen Hauptstammstatus der Zielgliedmaße.

Autologe Sammlung und Aufbereitung von CD133+-Zellen Nach erfolgreicher Revaskularisierung der Infraaorta und eines infrapoplitealen Eingriffs wurden 100 ml peripheres Blut durch die femorale Arterienscheide der Patienten entnommen und zur Sortierung und Anreicherung von CD133+-Zellen an die East China Stem Cell Bank geschickt. Mononukleäre Zellen werden durch Dichtegradientenzentrifugation mit Ficoll-Trennmedium vom Vollblut getrennt, dann werden CD133+-Zellen unter Verwendung von magnetisch aktivierter Zellsortierung selektiert. Die ausgewählten Zellen wurden mit 50 ml Natriumchlorid-Injektion gemischt, die menschliches Albumin und Heparin-Natrium im Blutbeutel enthält, und dann bei 4 ° C gelagert ins Krankenhaus zurückgeschickt. Alle Sammel- und Aufbereitungsverfahren waren innerhalb von 6 Stunden abgeschlossen.

Die ausgewählten Zellen müssen außerdem einem Qualitätstest unterzogen werden, andernfalls würden die Zellen verworfen und der Ausgangspatient von der Studie ausgeschlossen. Die Qualitätsstandards sind wie folgt: Zellzahl ≥ 1 × 107, kein sichtbarer Niederschlag in der Zellsuspension, lebensfähige Zellen ≥ 90 %, Endotoxin ≤ 2 EU/ml Zellinfusionsverfahren Ein Katheter wurde in die Kniekehlenarterie der Zielextremität am Tibiaplateau eingeführt eben. Die CD133+-Zellsuspension wurde in eine 50-ml-Spritze aufgezogen und durch den Katheter mit einer Injektionspumpenzeit von 30 Minuten infundiert.

Der Kontrollgruppe wurden 50 ml zellfreie Natriumchlorid-Injektion, die Humanalbumin und Heparin-Natrium enthielt, als Placebo durch den Katheter infundiert.

Medikation und Änderung des Lebensstils Beide Gruppen wurden gebeten, kontinuierliche Medikamente gegen Diabetes, Hyperlipidämie und Bluthochdruck unter den Ratschlägen von spezialisierten Ärzten zu erhalten. Auch eine thrombozytenaggregationshemmende Behandlung mit 100 mg magensaftresistentem Aspirin und 75 mg Clopidogrel täglich sowie die Gabe von Statinen zur Stabilisierung der arteriellen Plaques wurde gefordert.

Neben diesen Medikamenten wurden alle Kandidaten nach der Einreise eingeschränkt aufgefordert, mit dem Rauchen aufzuhören.

Nachsorge und Endpunkte Die Patienten wurden nach 18 Monaten nachuntersucht. Die primären Endpunkte wurden als Verschlimmerung des Geschwürs (Entwicklung neuer, größerer oder tieferer Geschwüre) und Amputation (oberhalb des Mittelfußknochens) definiert. Die Ulkusheilung und der Amputationsstatus wurden monatlich beobachtet.

Als zweite Endpunkte wurden die Änderung der Rurtherford-Klassifikation, TcPO2 des Fußrückens und ABI aufgezeichnet, um die Durchblutung der Extremität nach 6 und 18 Monaten zu bewerten.

Wie bewiesen, fördern die Stammzellen die Angiogenese durch Stimulierung der Proliferation, Migration und des Überlebens von Endothelzellen durch parakrine hohe Spiegel des vaskulären endothelialen Wachstumsfaktors (VEGF) [9]. Neben den regenerativen Eigenschaften haben Stammzellen eine immunregulatorische Kapazität und induzieren in einer Reihe von Situationen immunsuppressive Wirkungen [10]. Es wurde festgestellt, dass menschliche Stammzellen die Interleukin-6 (IL-6)-Expression in aktivierten Makrophagen unterdrücken, die eine Schlüsselrolle bei der Entzündungsreaktion bei der Wundheilung spielt [11]. Daher wurden die Serumkonzentrationen von VEGF und IL-6 vor und 1, 2, 4 Wochen nach der Infusion von CD133+-Zellen getestet, um die pro-angiogenen und immunregulatorischen Auswirkungen des Verfahrens und seiner Dauer zu bewerten.