Autologe endotheliale voorlopercellen Behandeling van diabetische voet

Onderzoeksopzet Het onderzoek was een prospectieve, niet-gerandomiseerde studie die werd uitgevoerd in 2 centra in Oost-China: het Tenth People's Hospital van de Tongji University en het Nanjing First Hospital. De ethische commissie in elk centrum keurde het protocol goed en alle patiënten gaven schriftelijke geïnformeerde toestemming. Alle ingeschreven patiënten werden uit eigen beweging toegewezen aan de behandelingsgroep met CD133+-cellen (CD133+-groep) en de controlegroep. Deze studie is bedoeld om de werkzaamheid en de immuunregulerende impact van intra-arteriële infusie van autologe CD133+-cellen op diabetespatiënten met PAD te evalueren.

Inschrijving en groepering van patiënten Diabetische PAD-patiënten van ≥18 jaar met Rutherford-categorieën 2 tot 5 werden opgenomen om te beoordelen of ze in aanmerking kwamen voor dit onderzoek. Alle patiënten die ermee instemden om aan het onderzoek deel te nemen, konden vrijwillig kiezen of ze al dan niet autologe CD133+ progenitorcelbehandeling zouden krijgen.

In deze studie werden CD133+-cellen gebruikt om angiogenese te stimuleren en efficiënte microvasculaire bloedtoevoer te reconstrueren, daarom was een vergelijkbare hemodynamische status in de hoofdtak essentieel om homogeniteit in beide groepen te bereiken voordat de patiënt binnenkwam. De kandidaten, die faalden voor intraluminale revascularisatie van infra-aorta (iliacale en femorale-popliteale) en 1 infra-popliteale (anterieure/posterieure tibiale, fibulaire) slagaders van het aangedane ledemaat, zouden van het onderzoek worden uitgesloten.

Andere uitsluitingscriteria waren als volgt: ① hemoglobine < 10 mg/dl, ② creatinineklaring < 30 ml/min, ③ voorgeschiedenis van therapie met stamcellen/voorlopercellen, ④ verlamming vanwege een ziekte van het centrale zenuwstelsel, ⑤ accidentele amputatie of botbreuk van doelwit ledemaat vanwege trauma na binnenkomst, ⑥ stoppen van bloedplaatjesaggregatieremmers na binnenkomst, ⑦ roken of opnieuw roken na binnenkomst, ⑧ kwaadaardige tumor.

Behandeling van infra-aorta & infra-popliteale slagaderlaesie Computertomografische angiografie (CTA) werd uitgevoerd om eerst de toestand van vasculaire laesie te analyseren en vervolgens werd digitale subtractie-angiografie (DSA) uitgevoerd om de laesies van infra-aorta en de infra-aorta nauwkeurig te identificeren. arteria poplitea vóór de behandeling.

De behandeling van aorta-infra-aorta-laesie werd beperkt uitgevoerd met intraluminale techniek (ballondilatatie en/of stentimplantatie), maar de graad van de laesie volgens TASC II-classificatie. De arteriële huls werd ingebracht in de contralaterale dijbeenslagader en vervolgens werd de revascularisatie van het doellidmaat tot stand gebracht door antegrade benadering.

Na de vorige procedure werden de laesies van de infra-popliteale slagaders opnieuw beoordeeld door DSA. Door middel van ballondilatatie bereikte ten minste één van de voorste/achterste tibiale en fibulaire slagaders een duidelijke directe bloedtoevoer naar de voet.

Het doel van de bovenstaande procedures is om de normale hemodynamische status van de doelledemaat volledig te herstellen.

Verzameling en bereiding van autologe CD133+-cellen Na succesvolle revascularisatie van de infra-aorta- en infra-popliteale procedure, werd 100 ml perifeer bloed verzameld via de schede van de dijbeenslagader bij patiënten en naar de Oost-Chinese stamcelbank gestuurd voor sortering en verrijking van CD133+-cellen. Mononucleaire cellen worden gescheiden van het volbloed door dichtheidsgradiëntcentrifugatie met Ficoll-scheidingsmedium, vervolgens worden CD133+-cellen geselecteerd met behulp van magnetisch geactiveerde celsortering. De geselecteerde cellen werden gemengd met 50 ml natriumchloride-injectie, die humaan albumine en heparine-natrium in de bloedzak bevat, en vervolgens teruggestuurd naar het ziekenhuis, opgeslagen bij 4 ℃. Alle verzamel- en voorbereidingsprocedures waren binnen 6 uur voltooid.

De geselecteerde cellen moeten ook een kwaliteitstest ondergaan, anders zouden de cellen worden weggegooid en zou de bronpatiënt worden uitgesloten van het onderzoek. De kwaliteitsnormen zijn als volgt: celaantal ≥ 1×107, geen zichtbaar neerslag in celsuspensie, levensvatbare cel ≥90%, endotoxine ≤ 2EU/ml Celinfusieprocedure Er werd een katheter ingebracht in de arteria poplitea van de doelledemaat op het tibiaplateau niveau. De suspensie van CD133+-cellen werd in een injectiespuit van 50 ml gezogen en door de katheter geïnfundeerd door een injectiepomp met een timing tot 30 minuten.

Voor de controlegroep werd 50 ml celvrije natriumchloride-injectie met humaan albumine en heparine-natrium door de katheter geïnfundeerd als placebo.

Medicatie en verandering van levensstijl Beide groepen werd gevraagd om op advies van gespecialiseerde artsen continu medicatie te krijgen voor diabetes, hyperlipidemie en hypertensie. Antibloedplaatjesbehandeling met 100 mg enterisch omhulde aspirine en 75 mg clopidogrel per dag, evenals toediening van statines voor het stabiliseren van de arteriële plaque, was ook vereist.

Naast deze medicijnen werd alle kandidaten beperkt gevraagd om na binnenkomst te stoppen met roken.

Follow-up en eindpunten De patiënten werden na 18 maanden opgevolgd. De primaire eindpunten werden gedefinieerd als de verergering van de zweer (het ontwikkelen van nieuwe of grotere of diepere zweren) en de amputatie (boven middenvoetniveau). De genezing van de zweer en de status van de amputatie werden maandelijks geobserveerd.

De verandering van de Rurtherford-classificatie, TcPO2 van dorsum pedis en ABI werden geregistreerd om de bloedperfusie van het ledemaat na 6 en 18 maanden als tweede eindpunt te evalueren.

Zoals bewezen, bevorderen de stamcellen angiogenese door stimulatie van endotheelcelproliferatie, migratie en overleving door paracriene hoge niveaus van vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF) [9]. Naast de regeneratieve eigenschappen hebben stamcellen een immuunregulerende capaciteit en induceren ze immunosuppressieve effecten in een reeks van situaties [10]. Er is gevonden dat menselijke stamcellen de expressie van Interleukine-6 ​​(IL-6) in geactiveerde macrofagen onderdrukken, wat een sleutelrol speelt bij de ontstekingsreactie bij wondgenezing [11]. Aldus werden de serumconcentraties van VEGF en IL-6 vóór en 1, 2, 4 weken na de infusie van CD133+-cellen getest om de pro-angiogenese en immunoregulerende impact van de procedure en de duur ervan te evalueren.