Traitement des cellules progénitrices endothéliales autologues du pied diabétique

Conception de l'étude L'étude était un essai prospectif non randomisé mené dans 2 centres de l'est de la Chine - le dixième hôpital populaire de l'université de Tongji et le premier hôpital de Nanjing. Le comité d'éthique de chaque centre a approuvé le protocole et tous les patients ont fourni un consentement éclairé écrit. Tous les patients inscrits ont été assignés au groupe de traitement des cellules CD133+ (groupe CD133+) et au groupe témoin de leur propre gré. Cette étude vise à évaluer l'efficacité et l'impact immunorégulateur d'une perfusion intra-artérielle de cellules CD133+ autologues chez des sujets diabétiques atteints d'AOMI.

Recrutement et regroupement des patients Les patients atteints de MAP diabétique âgés de ≥ 18 ans avec les catégories de Rutherford 2 à 5 ont été inclus pour évaluer l'éligibilité à cette étude. Tous les patients, qui ont accepté de participer à l'étude, pouvaient choisir volontairement de recevoir ou non un traitement par cellules progénitrices CD133+ autologues.

Dans cette étude, les cellules CD133+ ont été utilisées pour stimuler l'angiogenèse et reconstruire un apport sanguin microvasculaire efficace. Par conséquent, un statut hémodynamique similaire dans la branche principale était essentiel pour atteindre l'homogénéité dans les deux groupes avant l'entrée du patient. Les candidats en échec pour la revascularisation intraluminale des artères infra-aortique (iliaque et fémoro-poplitée) et 1 infra-poplitée (tibiale antérieure/postérieure, fibulaire) du membre atteint, seraient exclus de l'étude.

Les autres critères d'exclusion étaient les suivants : ① Hémoglobine < 10 mg/dl, ② clairance de la créatinine < 30 ml/min, ③ antécédents de thérapie par cellules souches/progénitrices, ④ paralysie due à une maladie du système neural central, ⑤ amputation accidentelle ou fracture osseuse de membre cible en raison d'un traumatisme après l'entrée, ⑥ arrêt des médicaments antiplaquettaires après l'entrée, ⑦ tabagisme ou re-tabac après l'entrée, ⑧ tumeur maligne.

Traitement des lésions de l'artère infra-aorte et infra-poplitée Une angiographie tomodensitométrique (CTA) a été réalisée pour analyser d'abord l'état de la lésion vasculaire, puis une angiographie numérique par soustraction (DSA) a été réalisée pour identifier précisément les lésions de l'infra-aorte et de l'infra- artères poplitées avant traitement.

Le traitement de la lésion de l'artère sous-aorte a été strictement réalisé avec une technique intraluminale (dilatation par ballonnet et/ou implantation de stent) néanmoins le grade de la lésion selon la classification TASC II. La gaine artérielle a été introduite dans l'artère fémorale controlatérale, puis la revascularisation du membre cible a été réalisée par voie antérograde.

Après la procédure précédente, les lésions des artères sous-poplitées ont été réévaluées par DSA. Au moyen d'une dilatation par ballonnet, au moins une des artères tibiale et fibulaire antérieure/postérieure a réalisé un apport sanguin direct évident au pied.

Le but des procédures ci-dessus est de restaurer complètement l'état hémodynamique normal du tronc principal du membre cible.

Collecte et préparation des cellules autologues CD133+ Après une revascularisation réussie de la procédure infra-aortique et infra-poplitée, 100 ml de sang périphérique ont été prélevés à travers la gaine de l'artère fémorale chez les patients et envoyés à la East China Stem Cell Bank pour le tri et l'enrichissement des cellules CD133+. Les cellules mononucléaires sont séparées du sang total par centrifugation en gradient de densité avec un milieu de séparation Ficoll, puis les cellules CD133+ sont sélectionnées à l'aide d'un tri cellulaire activé magnétiquement. Les cellules sélectionnées ont été mélangées avec une injection de chlorure de sodium de 50 ml, qui contient de l'albumine humaine et de l'héparine sodique dans la poche de sang, puis renvoyées à l'hôpital stockées à 4 ℃. Toutes les procédures de collecte et de préparation ont été terminées en 6 heures.

Les cellules sélectionnées doivent également passer un test de qualité, sinon les cellules seraient jetées et le patient source serait exclu de l'étude. Les normes de qualité sont les suivantes : nombre de cellules ≥ 1 × 107, pas de précipité visible dans la suspension cellulaire, cellule viable ≥ 90 %, endotoxine ≤ 2 EU/ml Procédure de perfusion cellulaire Un cathéter a été introduit dans l'artère poplitée du membre cible au niveau du plateau tibial niveau. La suspension de cellules CD133+ a été aspirée dans une seringue de 50 ml et perfusée à travers le cathéter par une pompe d'injection chronométrée à 30 minutes.

Pour le groupe témoin, une injection de chlorure de sodium acellulaire de 50 ml contenant de l'albumine humaine et de l'héparine sodique a été perfusée à travers le cathéter comme placebo.

Médicaments et changement de style de vie Les deux groupes ont été invités à recevoir des médicaments continus pour le diabète, l'hyperlipidémie et l'hypertension sous les conseils de médecins spécialisés. Un traitement antiplaquettaire avec 100 mg d'aspirine entérosoluble et 75 mg de clopidogrel par jour, ainsi que l'administration de statines pour stabiliser la plaque artérielle, ont également été demandés.

Outre ces médicaments, tous les candidats ont été invités à cesser de fumer après leur entrée.

Suivi et critères d'évaluation Les patients ont été suivis à 18 mois. Les principaux critères d'évaluation ont été définis comme l'aggravation de l'ulcère (développement d'ulcères nouveaux ou plus gros ou plus profonds) et l'amputation (au-dessus du niveau métatarsien). La guérison de l'ulcère et l'état de l'amputation ont été observés mensuellement.

Le changement de classification de Rurtherford, la TcPO2 du dos du pied et l'ICB ont été enregistrés pour évaluer la perfusion sanguine du membre à 6 et 18 mois en tant que deuxième critère d'évaluation.

Comme cela a été prouvé, les cellules souches favorisent l'angiogenèse en stimulant la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales par la paracrine de niveaux élevés de facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) [9]. En plus des propriétés régénératrices, les cellules souches ont une capacité immunorégulatrice et induisent des effets immunosuppresseurs dans une série de situations [10]. Il a été démontré que les cellules souches humaines suppriment l'expression de l'interleukine-6 ​​(IL-6) dans les macrophages activés, qui jouent un rôle clé dans la réponse inflammatoire lors de la cicatrisation des plaies [11]. Ainsi, les concentrations sériques de VEGF et d'IL-6 avant et à 1, 2, 4 semaines après l'infusion de cellules CD133+ ont été testées pour évaluer l'impact pro-angiogenèse et immunorégulateur de la procédure et sa durée.