Autologe endotheliale stamceller Behandling af diabetisk fod

Undersøgelsesdesign Studiet var et prospektivt, ikke-randomiseret forsøg udført på 2 centre i det østlige Kina - Tiende Folkehospital ved Tongji Universitet og Nanjing Første Hospital. Den etiske komité på hvert center godkendte protokollen, og alle patienter gav skriftligt informeret samtykke. Alle inkluderede patienter blev tildelt CD133+ cellebehandlingsgruppe (CD133+ gruppe) og kontrolgruppe efter eget ønske. Denne undersøgelse skal evaluere effektiviteten og immunregulerende virkning af intraarteriel infusion af autologe CD133+-celler på diabetikere med PAD.

Patientindskrivning og gruppering af diabetiske PAD-patienter i alderen ≥18 år med Rutherford kategori 2 til 5 blev inkluderet for at vurdere egnetheden til denne undersøgelse. Alle patienter, som accepterede at deltage i undersøgelsen, kunne frivilligt vælge, om de ville modtage autolog CD133+ progenitorcellebehandling.

I denne undersøgelse blev CD133+-celler brugt til at stimulere angiogenese og rekonstruere effektiv mikrovaskulær blodforsyning, derfor var ens hæmodynamisk status i hovedgrenen essentiel for at opfylde homogenitet i begge grupper før patientens indtræden. Kandidaterne, som mislykkedes for intraluminal revaskularisering af infra-aorta (iliac og femoral-popliteal) og 1 infra-popliteal (anterior/posterior tibial, fibulær) arterie af det berørte lem, ville blive udelukket fra undersøgelsen.

Andre udelukkelseskriterier var som følger: ① Hæmoglobin < 10 mg/dl, ② kreatininclearance < 30 ml/min, ③ tidligere stam-/stamcelleterapi i anamnesen, ④ lammelse på grund af sygdom i det centrale neurale system, ⑤ utilsigtet amputation eller knoglebrud af mållem på grund af traume efter indtræden, ⑥ stop med trombocythæmmende medicin efter indtræden, ⑦ rygning eller re-rygning efter indrejse, ⑧ ondartet tumor.

Behandling af infra-aorta og infra-popliteal arterielæsion Computertomografisk angiografi (CTA) blev udført for først at analysere tilstanden af ​​vaskulær læsion, og derefter blev digital subtraktionsangiografi (DSA) udført for præcist at identificere læsionerne af infra-aorta og infra-aorta. popliteale arterier før behandling.

Behandlingen af ​​infra-aorta arterielæsion blev i begrænset omfang udført med intraluminal teknik (ballonudvidelse og/eller stentimplantation), ikke desto mindre læsionens grad i henhold til TASC II klassifikation. Den arterielle kappe blev indført i den kontralaterale femorale arterie, og derefter blev revaskulariseringen af ​​mållemmet gennemført ved antegrade tilgang.

Efter den foregående procedure blev læsionerne i de infra-popliteale arterier re-evalueret af DSA. Ved hjælp af ballonudvidelse opnåede mindst én af de forreste/posteriore tibiale og fibulære arterier en tydelig direkte blodtilførsel til foden.

Målet med ovenstående procedurer er fuldstændig at genoprette den normale hovedstammehæmodynamiske status for mållemmet.

Autologe CD133+ celler indsamling og forberedelse Efter vellykket revaskularisering af infra-aorta og infra-popliteal procedure blev 100 ml perifert blod opsamlet gennem femoral arterieskeden hos patienter og sendt til East China Stamcelle Bank for CD133+ celler sortering og berigelse. Mononukleære celler separeres fra fuldblodet ved densitetsgradientcentrifugering med Ficoll-separeringsmedium, derefter udvælges CD133+-celler ved hjælp af magnetisk aktiveret cellesortering. De udvalgte celler blev blandet med 50 ml natriumchloridinjektion, som indeholder humant albumin og heparinnatrium i blodposen, og derefter sendt tilbage til hospitalet opbevaret i 4 ℃. Alle indsamlings- og klargøringsprocedurer blev afsluttet inden for 6 timer.

De udvalgte celler skal også tage en kvalitetstest, ellers ville cellerne blive kasseret, og kildepatienten ville blive udelukket fra undersøgelsen. Kvalitetsstandarderne er som følger: cellenummer ≥ 1×107, intet synligt bundfald i cellesuspension, levedygtig celle ≥90 %, endotoksin ≤ 2EU/ml Celleinfusionsprocedure Et kateter blev indført i popliteal arterie i mållemmet ved tibial plateau niveau. CD133+-cellesuspensionen blev trukket ind i en 50 ml sprøjte og infunderet gennem kateteret ved hjælp af en injektionspumpe med tidsindstilling til 30 minutter.

For kontrolgruppen blev 50 ml cellefri natriumchloridinjektion indeholdende humant albumin og heparinnatrium infunderet gennem kateteret som placebo.

Medicin og livsstilsændring Begge grupper blev bedt om at modtage kontinuerlig medicin mod diabetes, hyperlipidæmi og hypertension efter råd fra specialiserede læger. Anti-blodpladebehandling med 100 mg enterisk coatet aspirin og 75 mg clopidogrel dagligt, samt statiner til stabilisering af den arterielle plak, blev også påkrævet.

Udover disse medikamenter blev alle kandidater begrænset til at holde op med at ryge efter indrejse.

Opfølgning og endepunkter Patienterne blev fulgt op efter 18 måneder. De primære endepunkter blev defineret som forværring af ulcus (udvikling af nye eller større eller dybere ulcus) og amputation (over metatarsal niveau). Heling af sår og amputationsstatus blev observeret månedligt.

Ændringen af ​​Rurtherford-klassificeringen, TcPO2 af dorsum pedis og ABI blev registreret for at evaluere blodperfusionen af ​​lemmen ved 6 og 18 måneder som det andet endepunkt.

Som bevist fremmer stamcellerne angiogenese gennem stimulering af endotelcelleproliferation, migration og overlevelse ved parakrine høje niveauer af vaskulær endotelvækstfaktor (VEGF) [9]. Ud over de regenerative egenskaber har stamceller en immunregulerende kapacitet og inducerer immunsuppressive effekter i en række situationer [10]. Humane stamceller har vist sig at undertrykke Interleukin-6 (IL-6) ekspression i aktiverede makrofager, som spiller en nøglerolle i inflammatorisk respons i sårheling [11]. Således blev serumkoncentrationerne af VEGF og IL-6 før og 1, 2, 4 uger efter CD133+-celleinfusionen testet for at evaluere pro-angiogenese og immunregulerende virkning af proceduren og dens varighed.