Autologe endoteliale stamceller Behandling av diabetisk fot

Studiedesign Studien var en prospektiv, ikke-randomisert studie utført ved 2 sentre i øst-Kina - Tenth People's Hospital ved Tongji University og Nanjing First Hospital. Den etiske komiteen ved hvert senter godkjente protokollen, og alle pasienter ga skriftlig informert samtykke. Alle pasienter som ble registrert ble tildelt CD133+ cellebehandlingsgruppe (CD133+ gruppe) og kontrollgruppe etter eget ønske. Denne studien skal evaluere effektiviteten og immunregulerende virkningen av intraarteriell infusjon av autologe CD133+-celler på diabetikere med PAD.

Pasientregistrering og gruppering av diabetiske PAD-pasienter i alderen ≥18 år med Rutherford-kategoriene 2 til 5 ble inkludert for å vurdere kvalifiseringen for denne studien. Alle pasienter, som gikk med på å delta i studien, kunne frivillig velge om de skulle motta autolog CD133+ progenitorcellebehandling eller ikke.

I denne studien ble CD133+-celler brukt til å stimulere angiogenese og rekonstruere effektiv mikrovaskulær blodtilførsel, derfor var lignende hemodynamisk status i hovedgrenen avgjørende for å møte homogenitet i begge grupper før pasienten kom inn. Kandidatene, som mislyktes for intraluminal revaskularisering av infra-aorta (iliac og femoral-popliteal) og 1 infra-popliteal (anterior/posterior tibial, fibular) arterier i det berørte lemmet, ville bli ekskludert fra studien.

Andre eksklusjonskriterium var som følger: ① Hemoglobin < 10 mg/dl, ② kreatininclearance < 30 ml/min, ③ tidligere stam-/progenitorcelleterapi i anamnesen, ④ lammelse på grunn av sentralnevrale systemsykdom, ⑤ utilsiktet amputasjon eller benbrudd av mål lem på grunn av traumer etter inntreden, ⑥ stopp av anti-blodplate medisiner etter oppføring, ⑦ røyking eller re-røyking etter oppføring, ⑧ ondartet svulst.

Behandling av infra-aorta og infra-popliteal arterielesjon Computertomografisk angiografi (CTA) ble utført for først å analysere tilstanden til vaskulær lesjon, og deretter ble digital subtraksjonsangiografi (DSA) utført for å nøyaktig identifisere lesjonene i infra-aorta og infra-aorta. popliteale arterier før behandling.

Behandlingen av infra-aorta arterielesjon ble begrenset utført med intraluminal teknikk (ballongdilatasjon og/eller stentimplantasjon), likevel graden av lesjon i henhold til TASC II klassifisering. Den arterielle kappen ble introdusert i den kontralaterale lårarterien, og deretter ble revaskulariseringen av mållemmet utført ved antegrad tilnærming.

Etter den forrige prosedyren ble lesjonene i de infra-popliteale arteriene re-evaluert av DSA. Ved hjelp av ballongdilatasjon oppnådde minst en av de fremre/posteriore tibiale og fibulære arteriene en åpenbar direkte blodtilførsel til foten.

Målet med prosedyrene ovenfor er å fullstendig gjenopprette den normale hemodynamiske statusen for hovedstammen til mållemmet.

Innsamling og klargjøring av autologe CD133+-celler Etter vellykket revaskularisering av infra-aorta og infra-popliteal prosedyre, ble 100 ml perifert blod samlet inn gjennom femoralarterieskjeden hos pasienter og sendt til East China Stem Cell Bank for CD133+-cellesortering og anrikning. Mononukleære celler separeres fra helblodet ved tetthetsgradientsentrifugering med Ficoll-separeringsmedium, deretter velges CD133+-celler ved hjelp av magnetisk aktivert cellesortering. De utvalgte cellene ble blandet med 50 ml natriumkloridinjeksjon, som inneholder humant albumin og heparinnatrium i blodposen, og deretter sendt tilbake til sykehus lagret i 4 ℃. Alle innsamlings- og klargjøringsprosedyrer ble fullført innen 6 timer.

De utvalgte cellene må også ta en kvalitetstest, ellers vil cellene bli kastet og kildepasienten vil bli ekskludert fra studien. Kvalitetsstandardene er som følger: cellenummer ≥ 1×107, ingen synlig utfelling i cellesuspensjon, levedyktig celle ≥90 %, endotoksin ≤ 2EU/ml Celleinfusjonsprosedyre Et kateter ble innført i poplitealarterien til mållemmet ved tibialplatået nivå. CD133+-cellesuspensjonen ble trukket inn i en 50 ml sprøyte og infundert gjennom kateteret ved hjelp av en injeksjonspumpe med timing til 30 minutter.

For kontrollgruppen ble 50 ml cellefri natriumkloridinjeksjon inneholdende humant albumin og heparinnatrium infundert gjennom kateteret som placebo.

Medisinering og livsstilsendring Begge gruppene ble bedt om å motta kontinuerlig medisinering for diabetes, hyperlipidemi og hypertensjon etter råd fra spesialiserte leger. Anti-blodplatebehandling med 100 mg enterisk belagt aspirin og 75 mg klopidogrel daglig, samt administrering av statiner for stabilisering av arteriell plakk, ble også krevd.

Foruten disse medisinene, ble alle kandidater begrenset bedt om å slutte å røyke etter innreise.

Oppfølging og endepunkter Pasientene ble fulgt opp etter 18 måneder. De primære endepunktene ble definert som forverring av sår (utvikling av nye eller større eller dypere sår) og amputasjon (over metatarsalnivå). Sårheling og amputasjonsstatus ble observert månedlig.

Endringen i Rurtherford-klassifiseringen, TcPO2 av dorsum pedis og ABI ble registrert for å evaluere blodperfusjonen av lemmen ved 6 og 18 måneder som andre endepunkt.

Som bevist fremmer stamcellene angiogenese gjennom stimulering av endotelcelleproliferasjon, migrasjon og overlevelse ved parakrine høye nivåer av vaskulær endotelial vekstfaktor (VEGF) [9]. I tillegg til de regenerative egenskapene har stamceller en immunregulerende kapasitet og induserer immunsuppressive effekter i en rekke situasjoner [10]. Humane stamceller har blitt funnet å undertrykke Interleukin-6 (IL-6) uttrykk i aktiverte makrofager, som spiller en nøkkelrolle i inflammatorisk respons i sårheling [11]. Serumkonsentrasjonene av VEGF og IL-6 før og 1, 2, 4 uker etter CD133+-celleinfusjonen ble derfor testet for å evaluere pro-angiogensis og immunoregulatorisk innvirkning av prosedyren og dens varighet.