钩虫治疗腹腔疾病 (NainCeD-3)

该试验是一项 1b 期多中心、多国、随机、双盲单盲组和开放标签扩展期、安慰剂对照临床试验，评估不断增加的麸质摄入量以激活腹腔疾病 (CeD) 的安全性和可预测性（ a) 一小群接受安慰剂治疗的饮食管理 CeD 患者 (n=10)，以及 (b) 低 (L3-10; n=40) 和中等 (L3-20; n=10) 队列剂量钩虫接种。

目标 1 和 2/临床研究：主要结果将是中高剂量钩虫感染后钩虫幼稚或钩虫感染的 CeD 患者进行为期 30 周的不断升级的麸质挑战的安全性，通过十二指肠绒毛高度到隐窝深度的变化进行评估试验前（第 -2 周）和攻击后（第 42 周）之间的比率 (V:C)。 这将是一个二元变量，如果面筋挑战完成并且 V:C 比率 >2.0 并且其值相对于基线的变化 <20%，或者如果在完成面筋挑战或 V 之前发生退出则失败： C 比率 <2.0 或其相对于基线的变化 >20%。

次要结果包括在不断升级的麸质挑战的中间（12 周和 24 周）终点时低强度和中强度钩虫感染的安全性，通过不良事件发生率、严重不良事件以及总体健康状况进行评估。 次要结果指标包括 V:C 比率从基线到中间终点的变化、通过试验的成功面筋挑战阶段的进展，包括自由饮食、粘膜上皮内淋巴细胞计数、腹腔症状指数（CSI 问卷）、腹腔生活质量评分（ QOL问卷）和所有队列的血清免疫球蛋白A（IgA）组织转谷氨酰胺酶（tTG）水平。

目标 3 和 4/相关的体外细胞测量和体外粘膜刺激研究：相关研究旨在更全面地探索支撑临床结果的免疫过程，并利用收集的超过临床要求的粘膜组织来测试各个成分我们认为钩虫分泌物具有作为未来疗法的巨大潜力。 这些实验很复杂，通常取决于组织和收集的细胞的质量。

研究程序：在筛选访视时获得书面知情同意书后和入组前 参与者可能需要进行一些血液学工作以确认资格。 参与者将随机接受钩虫幼虫（L3-10 或 L3-20），将钩虫幼虫（L3-10 或 L3-20）悬浮在涂在皮肤上的 2-3 滴水中，并覆盖上一层薄薄的敷料，或溶液中的 Tabasco® 酱汁（安慰剂对照）。 接种前，每位参与者将完成 QOL 问卷，提交新鲜粪便标本，并进行抽血和十二指肠活检。 此后，在参与期间的每周，将提交食物日记和 CSI 调查问卷。 在指定的时间，面筋将以不断增加的量引入。 还将收集血液、粪便和活检样本以及 QOL 问卷。 为了更好地评估 L3 对宿主免疫的独立影响，L3-20 队列将在第 12 周接受内窥镜检查，以代替第 36 周的干预。

安全参数/分析：一般健康评估、身体检查和生命体征将在筛选时和之后在指定的门诊就诊时获得（或根据需要进行症状驱动）。 不良和严重事件的发生率和严重程度，包括参与者的麸质不耐受和钩虫相关并发症的证据，将通过结构化问卷（每周 CSI 和指定时间的 QOL）进行正式评估，由指定的研究护士进行审查，并通过参与者发起的个人调查进行非正式评估与研究护士或临床医生联系。 同样，用于临床安全和组织学结果的血液将同时（由指定的研究护士或指定的研究人员）检查实验室异常的发生率和严重程度。 血液结果和症状评分将以可重新识别的格式进行编码，然后再添加到访问受限的安全数据库中。 筛查血液测试，包括筛查时的血清妊娠试验（阳性试验将参与者排除在试验之外）和尿液妊娠试验（如果在整个试验过程中怀疑怀孕）。 将通过每月评估的 tTG、每月 CSI 评估和参与者联系来监测自由饮食的 12 个月进展情况。

实验室参数/分析：血液分析：全血细胞计数 (CBC)、IgA-tTG 滴度、肝肾功能和铁测试以及筛查血清妊娠试验将在澳大利亚的 Sullivan Nicolaides Pathology (SNP) 和坎特伯雷卫生实验室进行新西兰。 从残留的血液中，收集外周血单个核细胞（在情况允许的情况下）并储存血清。

粪便分析：样本将收集在厌氧收集袋中，等分试样将转移到提供的螺旋盖塑料罐中，两者都冷冻在 -20°C 下进行短期储存和运输，并在 -80°C 下长期储存寄生虫卵定量聚合酶链反应 (qPCR) 分析的术语，由 QIMR Berghofer 医学研究所的 James McCarthy 教授监督的指定非盲人员进行，结果对所有其他试验人员不知情。 粪便样本也将被储存起来，以备将来分析细菌群落（微生物群）之用。

粘膜分析：十二指肠活检（14 个捏取活检，与之前的试验一致）将由国家和试验认可的胃肠病学家在认可机构的镇静师支持下进行。 将为常规组织学进行四次活检。 为确保标准化，将使用 Boston Scientific Radial Jaw® 4 - 2.8mm 活检钳。 石蜡包埋的组织切片 (3 μm) 将用 H&E 和抗分化簇 3（抗 CD3）染色。 临床组织病理学将由胃肠道病理学专家 (A/Prof. Andrew Clouston) 并同时报告了临床目的。 每个病例的最佳代表性视野图像将由 Clouston 教授选择，然后以可重新识别的格式编码，然后添加到访问受限和安全的数据库中，然后由单个人对上皮内淋巴细胞 (IEL)% 和 V:C 进行评分病理学家（Dr. 格雷格·米勒）。 在每个时间点，两个四活检组织样本将被储存在 -80°C 的 10% 甘油 RNA 稳定溶液中，用于未来的基因表达和微生物群分析。

总血量：从第负 4 周到第 42 周，每次收集 50 毫升 x 6。每月 10 毫升，持续 12 个月。 2 年总计 420 毫升。

样本量测定：患有 CeD 的人食用麸质是有毒的。 与测试逆转疾病干预措施的传统试验不同，该试验依赖于麸质毒性来促进疾病活动。 该试验主要评估感染钩虫的参与者在 CeD 中暴露于麸质的安全性。 所提出的不断升级的麸质挑战是前所未有的，尽管许多患有 CeD 的人由于不了解诊断或有意识地决定不遵守医疗建议而大量食用麸质，但预计这一挑战将对无保护的安慰剂对照产生不利影响。 与这种担忧一致，控制队列一直保持较小。 该研究将由 60 名参与者组成，其中对照组 10 名，低剂量钩虫组 (L3-10) 40 名，中剂量钩虫组 (L3-20) 10 名。