Léčba celiakie měchovcem (NainCeD-3)

Tato studie je multicentrická, nadnárodní, randomizovaná, dvojitě zaslepená s jednou zaslepenou větví a otevřenou prodlouženou fází, placebem kontrolovaná, klinická studie hodnotící bezpečnost a předvídatelnost eskalující spotřeby lepku k aktivaci celiakie (CeD) v ( a) malá kohorta lidí s CeD řízenou dietou léčených placebem (n=10) a (b) kohorty po nízké (L3-10; n=40) a střední (L3-20; n=10) dávka inokulum měchovce.

Cíl 1 a 2/Klinická studie: Primárním výsledkem bude bezpečnost eskalující 30týdenní provokace lepkem u lidí, kteří dosud nebyli hákovití, nebo u lidí infikovaných měchovcem s CeD po infekci měchy středně vysokou dávkou, hodnocená změnou výšky duodenálních klků na hloubku krypty poměr (V:C) mezi přípravnou fází (týden -2) a po provokační dávce (42. týden). Bude to binární proměnná definovaná jako bezpečná, pokud je dokončena výzva s lepkem a poměr V:C > 2,0 a dojde k <20% změně její hodnoty od výchozí hodnoty, nebo selže, pokud dojde k výpadku před dokončením výzvy lepkem nebo V: Poměr C je <2,0 nebo jeho změna od výchozí hodnoty je >20 %.

Sekundární výsledky zahrnují bezpečnost infekce měchovcem nízké a střední intenzity ve středních (12 týdnů a 24 týdnech) koncových bodech eskalující glutenové provokační expozice, hodnocené podle výskytu nežádoucích příhod, závažných nežádoucích příhod a také celkového zdravotního stavu. Sekundární ukazatele výsledku zahrnují změny poměru V:C od výchozích ke středním koncovým bodům, progresi úspěšnými fázemi testu s glutenem, včetně liberální diety, slizniční intraepiteliální počet lymfocytů, index příznaků celiakie (dotazník CSI), skóre kvality života celiakie ( QOL dotazník) a hladina sérového imunoglobulinu A (IgA) tkáňové transglutaminázy (tTG) všech kohort.

Cíle 3&4/Přidružená měření buněk in vitro a ex vivo výzkumy stimulace sliznice: Přidružené studie jsou navrženy tak, aby plněji prozkoumávaly imunologické procesy, na nichž jsou založeny klinické výsledky, a aby využily slizniční tkáň odebranou nad rámec klinických požadavků k testování jednotlivých složek sekretů měchovce, které, jak věříme, mají velký potenciál jako budoucí terapie. Tyto experimenty jsou složité a často závisí na kvalitě tkáně a odebraných buněk.

Postup studie: Po obdržení písemného informovaného souhlasu při screeningové návštěvě a před zařazením mohou účastníci vyžadovat hematologické vyšetření k potvrzení způsobilosti. Účastníci budou náhodně vybráni tak, aby obdrželi larvy měchovce (L3-10 nebo L3-20) suspendované ve 2-3 kapkách vody nanesených na kůži a překryté lehkým obvazem nebo omáčkou Tabasco® v roztoku (Placebo Comparator). Před inokulací každý účastník vyplní dotazník QOL, odešle čerstvý vzorek stolice a podstoupí odběr krve a duodenální biopsii. Poté bude každý týden po dobu účasti předkládán jídelní deník a dotazník CSI. V určených časech bude lepek zaváděn ve stupňujících se objemech. Odebrány budou také odběry krve, stolice a biopsie a dotazník QOL. Aby bylo možné lépe vyhodnotit nezávislý účinek L3 na imunitu hostitele, podstoupí kohorta L3-20 endoskopii ve 12. týdnu namísto intervence ve 36. týdnu.

Bezpečnostní parametry/analýza: Obecná hodnocení zdravotního stavu, fyzikální vyšetření a vitální funkce budou získány při screeningu a poté při určených návštěvách kliniky (nebo podle potřeby na základě symptomů). Výskyt a závažnost nežádoucích a vážných příhod, včetně důkazů o intoleranci lepku a komplikacích souvisejících s měchovcem u účastníků, bude formálně hodnocena prostřednictvím strukturovaných dotazníků (CSI týdně a QOL v určených časech), které budou zkontrolovány jmenovanou výzkumnou sestrou, a neformálně prostřednictvím osob iniciovaných účastníkem. kontakt s výzkumnou sestrou nebo klinikem. Krev pro klinickou bezpečnost a histologické výsledky budou rovněž kontrolovány současně (určenou výzkumnou sestrou nebo určeným výzkumníkem) na výskyt a závažnost laboratorních abnormalit. Výsledky krve a skóre symptomů budou před přidáním do zabezpečené databáze s omezeným přístupem kódovány ve znovu identifikovatelném formátu. Screeningové krevní testy, které zahrnují sérový těhotenský test při screeningu (pozitivní test vyřadí účastníka ze vstupu do studie) a těhotenský test z moči, pokud je podezření na těhotenství v průběhu studie. 12měsíční progrese k liberální dietě bude monitorována tTG hodnoceným měsíčně, s měsíčním hodnocením CSI a kontaktem s účastníky.

Laboratorní parametry/analýza: Krevní analýza: Kompletní krevní obraz (CBC), titr IgA-tTG, jaterní a renální testy a testy na železo a screeningový těhotenský test v séru budou provedeny v Sullivan Nicolaides Pathology (SNP) v Austrálii a Canterbury Health Laboratories v Nový Zéland. Ze zbytkové krve budou odebrány mononukleární buňky periferní krve (pokud to okolnosti dovolí) a sérum bude uloženo.

Analýza stolice: Vzorky budou odebírány do anaerobních sběrných vaků s alikvotním podílem, který se přenese do přiložené plastové nádoby se šroubovacím uzávěrem, obě zmrazí na -20 °C pro krátkodobé skladování a přepravu a skladují se dlouhodobě při -80 °C. termín pro analýzu kvantitativní polymerázové řetězové reakce (qPCR) vajíček parazitů, kterou má provádět jmenovaný nezaslepený personál pod dohledem Prof. Jamese McCarthyho v QIMR Berghofer Medical Research Institute, přičemž výsledky zůstávají zaslepené všem ostatním pracovníkům studie. Vzorky stolice budou také uloženy pro budoucí analýzu bakteriálních společenstev (mikrobioty).

Slizniční analýza: Duodenální biopsie (14 pinch biopsií, v souladu s předchozími studiemi) budou odebrány celostátně a zkušebním akreditovaným gastroenterologem podporovaným sedativním lékařem v akreditovaném zařízení. Pro konvenční histologii budou provedeny čtyři biopsie. Pro zajištění standardizace budou použity bioptické kleště Boston Scientific Radial Jaw® 4 - 2,8 mm. Tkáňové řezy zalité v parafínu (3 μm) budou obarveny H&E a anti-shlukem diferenciace 3 (anti-CD3). Klinická histopatologie bude vedena specialistou na gastrointestinální patologii (A/Prof. Andrew Clouston) a současně hlášeny pro klinické účely. Nejlepší reprezentativní snímky pole z každého případu vybere prof. Clouston, poté je zakóduje do znovu identifikovatelného formátu před přidáním do zabezpečené databáze s omezeným přístupem a později vyhodnotí intraepiteliální lymfocyty (IEL) % a V:C jediným patolog (Dr. Greg Miller). V každém časovém bodě budou dva čtyři bioptické vzorky tkáně uloženy při -80 °C v 10% glycerolRNA stabilizačním roztoku pro budoucí genovou expresi a analýzy mikrobioty.

Celkový objem krve: 50 ml na odběr x 6 od týdne mínus 4 do týdne 42. 10 ml za měsíc po dobu 12 měsíců. Celkem 420 ml za 2 roky.

Určení velikosti vzorku: Konzumace lepku je toxická při konzumaci lidmi s CeD. Na rozdíl od konvenční studie, která testuje zásah ke zvrácení onemocnění, tato studie spoléhá na toxicitu lepku, která podporuje aktivitu nemoci. Studie primárně hodnotí bezpečnost expozice lepku u CeD u účastníků infikovaných měchovcem. Navrhovaná eskalující výzva k lepku je bezprecedentní, a zatímco liberální konzumace lepku je konzumována mnoha lidmi s CeD, ať už kvůli neznalosti diagnózy nebo vědomému rozhodnutí nerespektovat lékařskou radu, očekává se, že tato výzva nepříznivě ovlivní nechráněné kontroly placeba. V souladu s touto obavou byla kontrolní kohorta udržována malá. Studie se bude skládat z 60 účastníků, z toho 10 v kontrolní skupině, 40 ve skupině s nízkou dávkou měchovce (L3-10) a 10 ve skupině s měchovcem se střední dávkou (L3-20).