Terapia dell'anchilostoma per la malattia celiaca (NainCeD-3)

Questo studio è uno studio clinico di fase 1b multicentrico, multinazionale, randomizzato, in doppio cieco con braccio in singolo cieco e fase di estensione in aperto, controllato con placebo, che valuta la sicurezza e la prevedibilità di un consumo crescente di glutine per attivare la malattia celiaca (CeD) in ( a) una piccola coorte di persone con CeD gestita dalla dieta trattata con un placebo (n=10), e in (b) coorti che seguivano basso (L3-10; n=40) e medio (L3-20; n=10) dose di anchilostomi.

Obiettivo 1 e 2 / Studio clinico: l'esito primario sarà la sicurezza di un'escalation di sfida al glutine di 30 settimane in persone naïve o infette da anchilostomi con CeD a seguito di un'infezione da anchilostomi a dose medio-alta, valutata dal cambiamento dell'altezza dei villi duodenali alla profondità della cripta rapporto (V:C) tra pre-trial (settimana -2) e post-challenge (settimana 42). Questa sarà una variabile binaria definita sicura se il test del glutine è completato e il rapporto V:C > 2,0 e vi è una variazione <20% del suo valore rispetto al basale o fallisce se l'abbandono si verifica prima del completamento del test del glutine o V: Il rapporto C è <2,0 o la sua variazione rispetto al basale è > 20%.

Gli esiti secondari includono la sicurezza dell'infezione da anchilostomi a bassa e media intensità agli endpoint intermedi (12 settimane e 24 settimane) di una crescente sfida al glutine, valutata in base all'incidenza di eventi avversi, eventi avversi gravi e salute generale. Le misure di esito secondarie includono i cambiamenti nel rapporto V:C dal basale agli endpoint intermedi, la progressione attraverso fasi di sfida al glutine riuscite dello studio, inclusa una dieta liberale, conta dei linfociti intraepiteliali della mucosa, Celiac Symptom Index (questionario CSI), Celiac-Quality of Life Score ( QOL questionario) e il livello sierico di immunoglobulina A (IgA) di transglutaminasi tissutale (tTG) di tutte le coorti.

Obiettivi 3 e 4/Misurazioni cellulari in vitro associate e indagini sulla stimolazione della mucosa ex vivo: gli studi associati sono progettati per esplorare più a fondo i processi immunologici alla base dei risultati clinici e per sfruttare il tessuto della mucosa raccolto in eccesso rispetto ai requisiti clinici per testare i singoli componenti di secrezioni di anchilostomi che riteniamo abbiano un grande potenziale come terapie future. Questi esperimenti sono complessi e spesso dipendono dalla qualità del tessuto e delle cellule raccolte.

Procedura dello studio: dopo aver ottenuto il consenso informato scritto alla visita di screening e prima dell'arruolamento, i partecipanti potrebbero richiedere un lavoro ematologico per confermare l'idoneità. I partecipanti verranno randomizzati per ricevere larve di anchilostomi (L3-10 o L3-20) sospese in 2-3 gocce d'acqua applicate sulla pelle e ricoperte con una medicazione leggera, o Salsa Tabasco® in soluzione (Placebo Comparator). Prima dell'inoculazione, ciascun partecipante compilerà un questionario QOL, invierà un campione fecale fresco e si sottoporrà a prelievo di sangue e biopsia duodenale. Successivamente ogni settimana per tutta la durata della partecipazione, verrà presentato un diario alimentare e un questionario CSI. In orari prestabiliti, il glutine verrà introdotto in volumi crescenti. Saranno inoltre raccolte raccolte di sangue, feci e biopsie e un questionario QOL. Per valutare meglio l'effetto indipendente di L3 sull'immunità dell'ospite, la coorte L3-20 verrà sottoposta a un'endoscopia alla settimana 12 al posto dell'intervento della settimana 36.

Parametri / analisi di sicurezza: le valutazioni generali della salute, l'esame fisico e i segni vitali saranno ottenuti allo screening e successivamente alle visite cliniche designate (o guidate dai sintomi come richiesto). L'incidenza e la gravità degli eventi avversi e gravi, inclusa l'evidenza di intolleranza al glutine e complicanze correlate all'anchilostoma dei partecipanti, saranno valutate formalmente attraverso questionari strutturati (CSI settimanali e QOL agli orari designati) che saranno esaminati dall'infermiere ricercatore designato e informalmente attraverso il personale avviato dal partecipante contatto con un infermiere ricercatore o un medico. Inoltre, il sangue per la sicurezza clinica e i risultati istologici saranno esaminati contemporaneamente (da un infermiere ricercatore designato o ricercatore designato) per l'incidenza e la gravità delle anomalie di laboratorio. I risultati del sangue e i punteggi dei sintomi saranno codificati in un formato riidentificabile prima di essere aggiunti a un database sicuro e ad accesso limitato. Analisi del sangue di screening per includere il test di gravidanza su siero allo screening (un test positivo escluderà il Partecipante dall'entrare nello studio) e il test di gravidanza sulle urine se si sospetta una gravidanza durante lo studio. La progressione di 12 mesi verso una dieta liberale sarà monitorata da tTG valutato mensilmente, con valutazione CSI mensile e contatto con il partecipante.

Parametri di laboratorio/Analisi: analisi del sangue: emocromo completo (CBC), titolo IgA-tTG, funzionalità epatica e renale e test del ferro e un test di gravidanza su siero di screening saranno eseguiti presso il Sullivan Nicolaides Pathology (SNP) in Australia e i Canterbury Health Laboratories in Nuova Zelanda. Dal sangue residuo verranno prelevate le cellule mononucleari del sangue periferico (quando le circostanze lo consentiranno) e il siero verrà conservato.

Analisi fecale: i campioni saranno raccolti in sacche di raccolta anaerobiche con un'aliquota da trasferire in un contenitore di plastica con tappo a vite fornito, entrambi da congelare a -20°C per la conservazione e il trasporto a breve termine, e conservati a -80°C per lunghi periodi termine per l'analisi della reazione a catena della polimerasi quantitativa dell'uovo del parassita (qPCR) che deve essere eseguita da personale nominato non in cieco supervisionato dal Prof. James McCarthy presso il QIMR Berghofer Medical Research Institute, con i risultati da rimanere in cieco per tutto il resto del personale della sperimentazione. I campioni fecali verranno inoltre conservati per future analisi delle comunità batteriche (il microbiota).

Analisi della mucosa: le biopsie duodenali (14 pizzico biopsie, coerenti con le prove precedenti) saranno prese da un gastroenterologo accreditato a livello nazionale e di prova supportato da un sedazionista in una struttura accreditata. Quattro biopsie saranno impegnate per l'istologia convenzionale. Per garantire la standardizzazione, le pinze per biopsia da utilizzare saranno Boston Scientific Radial Jaw® 4 - 2,8 mm. Sezioni di tessuto incluse in paraffina (3 μm) saranno colorate con H&E e anti-cluster di differenziazione 3 (anti-CD3). L'istopatologia clinica sarà supervisionata da uno specialista in patologia gastrointestinale (A/Prof. Andrew Clouston) e riportato contemporaneamente a fini clinici. Le migliori immagini di campo rappresentative di ciascun caso saranno selezionate dal Prof. Clouston, quindi codificate in un formato re-identificabile prima di aggiungerle a un database ad accesso limitato e sicuro, e successivamente valutate per i linfociti intraepiteliali (IEL)% e V:C da un singolo patologo (dott. Greg Miller). Ad ogni punto temporale, due quattro campioni di tessuto bioptico verranno conservati a -80 ° C in una soluzione di stabilizzazione di gliceroloRNA al 10% per future analisi di espressione genica e microbiota.

Volume totale di sangue: 50 ml per prelievo x 6 dalla settimana meno 4 alla settimana 42. 10 ml al mese per 12 mesi. Totale 420 ml in 2 anni.

Determinazione della dimensione del campione: il consumo di glutine è tossico se consumato da persone con CeD. A differenza di uno studio convenzionale che testa un intervento per invertire la malattia, questo studio si basa sulla tossicità del glutine per promuovere l'attività della malattia. Lo studio valuta principalmente la sicurezza dell'esposizione al glutine nel CeD nei partecipanti con infezione da anchilostomi. La crescente sfida al glutine proposta non ha precedenti e, sebbene il consumo liberale di glutine sia consumato da molte persone con CeD sia per ignoranza della diagnosi che per decisione consapevole di non rispettare i consigli medici, si prevede che questa sfida influenzerà negativamente i controlli placebo non protetti. Coerentemente con questa preoccupazione, la coorte di controllo è stata mantenuta piccola. Lo studio sarà composto da 60 partecipanti, di cui 10 nel gruppo di controllo, 40 nel gruppo anchilostomi a basso dosaggio (L3-10) e 10 nel gruppo anchilostomi a dose media (L3-20).