Terapia de ancilostomíase para doença celíaca (NainCeD-3)

Este estudo é um ensaio clínico de fase 1b multicêntrico, multinacional, randomizado, duplo-cego com braço simples-cego e fase de extensão aberta, controlado por placebo, avaliando a segurança e a previsibilidade de um consumo crescente de glúten para ativar a doença celíaca (CeD) em ( a) uma pequena coorte de pessoas com CeD controlada por dieta tratada com placebo (n=10), e em (b) coortes seguindo baixa (L3-10; n=40) e média (L3-20; n=10) dose de inoculação de ancilostomídeos.

Objetivo 1 e 2/Estudo clínico: O resultado primário será a segurança de um desafio crescente de glúten de 30 semanas em ancilostomídeos virgens ou pessoas infectadas com ancilostomíase com CeD após uma infecção de ancilostomíase de dose média-alta, avaliada pela alteração da altura das vilosidades duodenais para a profundidade da cripta relação (V:C) entre pré-teste (semana -2) e pós-desafio (semana 42). Esta será uma variável binária definida como segura se o desafio com glúten for concluído e a relação V:C > 2,0 e houver <20% de alteração em seu valor desde a linha de base ou falha se ocorrer abandono antes da conclusão do desafio com glúten ou V: A razão C é <2,0 ou sua mudança desde a linha de base é >20%.

Os resultados secundários incluem a segurança da infecção por ancilostomídeos de baixa e média intensidade em pontos finais intermediários (12 semanas e 24 semanas) de um desafio crescente de glúten, avaliado pela incidência de eventos adversos, eventos adversos graves, bem como pela saúde geral. As medidas de resultados secundários incluem mudanças na relação V:C desde a linha de base até os desfechos intermediários, progressão através de fases bem-sucedidas de desafio com glúten do estudo, incluindo uma dieta liberal, contagem de linfócitos intraepiteliais da mucosa, índice de sintomas celíacos (questionário CSI), escore de qualidade de vida celíaca ( questionário QOL) e o nível sérico de imunoglobulina A (IgA) tecidual transglutaminase (tTG) de todas as coortes.

Objetivos 3 e 4/Medidas de células in vitro associadas e investigações de estimulação da mucosa ex vivo: Os estudos associados são projetados para explorar mais completamente os processos imunológicos subjacentes aos resultados clínicos e para aproveitar o tecido da mucosa coletado em excesso dos requisitos clínicos para testar componentes individuais de secreções de ancilostomídeos que acreditamos ter grande potencial como terapias futuras. Esses experimentos são complexos e geralmente dependem da qualidade do tecido e das células coletadas.

Procedimento do estudo: Após o consentimento informado por escrito ser obtido na visita de triagem e antes da inscrição, os participantes podem exigir algum trabalho hematológico para confirmar a elegibilidade. Os participantes serão randomizados para receber larvas de ancilostomídeos (L3-10 ou L3-20) suspensas em 2-3 gotas de água aplicadas na pele e cobertas com um curativo leve, ou Tabasco® Sauce em solução (Placebo Comparator). Antes da inoculação, cada participante preencherá um questionário de qualidade de vida, enviará uma amostra fecal fresca e será submetido a uma coleta de sangue e biópsia duodenal. Posteriormente, a cada semana, durante a participação, um diário alimentar e um questionário CSI serão enviados. Em horários designados, o glúten será introduzido em volumes crescentes. Coletas de sangue, fezes e biópsia, e um questionário de qualidade de vida também serão coletados. Para avaliar melhor o efeito independente de L3 na imunidade do hospedeiro, a coorte L3-20 será submetida a uma endoscopia na semana 12 em vez da intervenção da semana 36.

Parâmetros/Análise de Segurança: Avaliações gerais de saúde, exame físico e sinais vitais serão obtidos na triagem e posteriormente em visitas clínicas designadas (ou baseadas em sintomas, conforme necessário). A incidência e a gravidade dos Eventos Adversos e Graves, incluindo evidências de intolerância ao glúten e complicações relacionadas à ancilostomose dos Participantes, serão avaliadas formalmente por meio de questionários estruturados (CSI semanalmente e QOL nos horários designados) a serem examinados pela enfermeira de pesquisa designada e informalmente por meio de pessoal iniciado pelo Participante contato com um enfermeiro pesquisador ou clínico. Além disso, o sangue para segurança clínica e resultados histológicos será examinado simultaneamente (por uma enfermeira de pesquisa designada ou pesquisador designado) para a incidência e gravidade de anormalidades laboratoriais. Resultados de sangue e pontuações de sintomas serão codificados em um formato reidentificável antes de serem adicionados a um banco de dados seguro e com acesso restrito. Exames de sangue de triagem para incluir teste de gravidez sérico na triagem (um teste positivo excluirá o participante de entrar no estudo) e teste de gravidez de urina se houver suspeita de gravidez durante o estudo. A evolução de 12 meses para uma dieta liberal será monitorada por tTG avaliada mensalmente, com avaliação mensal do CSI e contato com o participante.

Parâmetros/Análise de Laboratório: Análise de sangue: Hemograma completo (CBC), título de IgA-tTG, função hepática e renal e testes de ferro e um teste de triagem de gravidez serão realizados no Sullivan Nicolaides Pathology (SNP) na Austrália e Canterbury Health Laboratories em Nova Zelândia. Do sangue residual, células mononucleares do sangue periférico serão coletadas (quando as circunstâncias permitirem) e o soro será armazenado.

Análise fecal: As amostras serão coletadas em sacos de coleta anaeróbica com uma alíquota a ser transferida para um frasco plástico com tampa de rosca fornecido, ambos para serem congelados a -20°C para armazenamento e transporte de curto prazo, e armazenados a -80°C por muito tempo. termo para análise de reação em cadeia da polimerase quantitativa de ovo de parasita (qPCR) a ser realizada por pessoal não cego supervisionado pelo Prof. James McCarthy no QIMR Berghofer Medical Research Institute, com os resultados permanecendo cegos para todos os outros funcionários do estudo. Amostras fecais também serão armazenadas para análise futura de comunidades bacterianas (a microbiota).

Análise da mucosa: Biópsias duodenais (14 biópsias em pinça, consistentes com estudos anteriores) serão realizadas por um gastroenterologista credenciado nacionalmente e pelo estudo, apoiado por um sedativo em uma instalação credenciada. Quatro biópsias serão encaminhadas para histologia convencional. Para garantir a padronização, a pinça de biópsia a ser utilizada será a Boston Scientific Radial Jaw® 4 - 2,8mm. Seções de tecido embebidas em parafina (3 μm) serão coradas com H&E e anti-cluster de diferenciação 3 (anti-CD3). A histopatologia clínica será supervisionada por um especialista em patologia gastrointestinal (A/Prof. Andrew Clouston) e relatados contemporaneamente para fins clínicos. As melhores imagens de campo representativas de cada caso serão selecionadas pelo Prof. Clouston, então codificadas em formato reidentificável antes de serem adicionadas a um banco de dados seguro e com acesso restrito, e posteriormente pontuadas para linfócitos intraepiteliais (IEL)% e V:C por um único patologista (Dr. Greg Miller). Em cada ponto de tempo, duas amostras de tecido de quatro biópsias serão armazenadas a -80 ° C em solução de estabilização de glicerolRNA a 10% para futuras análises de expressão gênica e microbiota.

Volume total de sangue: 50 ml por coleta x 6 da semana menos 4 à semana 42. 10 ml por mês durante 12 meses. Total de 420 ml em 2 anos.

Determinação do tamanho da amostra: O consumo de glúten é tóxico quando consumido por pessoas com CeD. Ao contrário de um estudo convencional que testa uma intervenção para reverter a doença, este estudo se baseia na toxicidade do glúten para promover a atividade da doença. O estudo avalia principalmente a segurança da exposição ao glúten no CeD em participantes infectados por ancilostomíase. O crescente desafio do glúten proposto não tem precedentes e, embora o consumo liberal de glúten seja consumido por muitas pessoas com CeD, seja por ignorância do diagnóstico ou por uma decisão consciente de não seguir o conselho médico, prevê-se que esse desafio afete adversamente os controles placebo desprotegidos. Consistente com essa preocupação, a coorte de controle foi mantida pequena. O estudo será composto por 60 participantes, sendo 10 no grupo controle, 40 no grupo de baixa dose de ancilostomídeos (L3-10) e 10 no grupo de média dose de ancilostomídeos (L3-20).