Tęgoryjcowa terapia celiakii (NainCeD-3)

To badanie jest wieloośrodkowym, międzynarodowym, randomizowanym, podwójnie ślepym badaniem fazy 1b z pojedynczą ślepą próbą i otwartą fazą kontynuacji, kontrolowanym placebo, oceniającym bezpieczeństwo i przewidywalność rosnącego spożycia glutenu w celu aktywacji celiakii (CeD) w ( a) mała kohorta osób z CeD leczonych dietą leczonych placebo (n=10), oraz w (b) kohortach po niskim (L3-10; n=40) i średnim (L3-20; n=10) dawka inokulum tęgoryjca.

Cel 1 i 2/Badanie kliniczne: Głównym wynikiem będzie bezpieczeństwo nasilającej się 30-tygodniowej prowokacji glutenem u osób nieleczonych tęgoryjcem lub zakażonych tęgoryjcem z CeD po zarażeniu tęgoryjcem w średniej dawce, oceniane na podstawie zmiany wysokości kosmków dwunastnicy do głębokości krypty stosunek (V:C) między przed badaniem (tydzień -2) i po prowokacji (tydzień 42). Będzie to zmienna binarna zdefiniowana jako bezpieczna, jeśli prowokacja glutenem zostanie zakończona, a stosunek V:C > 2,0 i nastąpi <20% zmiana jej wartości od wartości wyjściowej lub niepowodzenie, jeśli wypadnięcie nastąpi przed zakończeniem prowokacji glutenem lub V: Współczynnik C wynosi <2,0 lub jego zmiana w stosunku do wartości początkowej wynosi >20%.

Wyniki drugorzędowe obejmują bezpieczeństwo infekcji tęgoryjcem o niskiej i średniej intensywności w pośrednich (12 i 24 tygodnie) punktach końcowych nasilającej się prowokacji glutenem, oceniane na podstawie częstości występowania zdarzeń niepożądanych, poważnych zdarzeń niepożądanych, a także ogólnego stanu zdrowia. Drugorzędowe pomiary wyników obejmują zmiany stosunku V:C od wartości wyjściowych do pośrednich punktów końcowych, przejście przez udane fazy prowokacji glutenem w badaniu, w tym liberalną dietę, liczbę limfocytów śródnabłonkowych błony śluzowej, wskaźnik objawów trzewnych (kwestionariusz CSI), ocenę jakości życia trzewnego ( kwestionariusz QOL) oraz poziom transglutaminazy tkankowej (tTG) immunoglobuliny A (IgA) w surowicy we wszystkich kohortach.

Cele 3 i 4/Powiązane pomiary komórkowe in vitro i badania stymulacji błony śluzowej ex vivo: powiązane badania mają na celu pełniejsze zbadanie procesów immunologicznych leżących u podstaw wyników klinicznych oraz wykorzystanie tkanki śluzówki pobranej w ilości przekraczającej wymagania kliniczne do przetestowania poszczególnych składników wydzielin tęgoryjców, które naszym zdaniem mają ogromny potencjał jako przyszłe terapie. Eksperymenty te są złożone i często zależą od jakości tkanki i zebranych komórek.

Procedura badania: Po uzyskaniu pisemnej świadomej zgody podczas wizyty przesiewowej i przed rejestracją Uczestnicy mogą wymagać pewnych badań hematologicznych w celu potwierdzenia kwalifikowalności. Uczestnicy zostaną losowo przydzieleni do grupy otrzymującej larwy tęgoryjca (L3-10 lub L3-20) zawieszone w 2-3 kroplach wody nałożone na skórę i pokryte lekkim opatrunkiem lub sos Tabasco® w roztworze (Placebo Comparator). Przed szczepieniem każdy Uczestnik wypełni kwestionariusz QOL, przedłoży świeży próbkę kału oraz przejdzie pobranie krwi i biopsję dwunastnicy. Następnie co tydzień przez cały czas trwania uczestnictwa przesyłany będzie dzienniczek żywieniowy i kwestionariusz CSI. W wyznaczonych godzinach gluten będzie wprowadzany w rosnących ilościach. Zostaną również pobrane próbki krwi, kału i biopsji oraz kwestionariusz QOL. Aby lepiej ocenić niezależny wpływ L3 na odporność gospodarza, kohorta L3-20 zostanie poddana endoskopii w 12 tygodniu zamiast interwencji w 36 tygodniu.

Parametry bezpieczeństwa/analiza: Ogólna ocena stanu zdrowia, badanie fizykalne i parametry życiowe zostaną przeprowadzone podczas badania przesiewowego, a następnie podczas wyznaczonych wizyt w klinice (lub w razie potrzeby w zależności od objawów). Częstość występowania i nasilenie niepożądanych i poważnych zdarzeń, w tym dowody na nietolerancję glutenu i powikłania związane z tęgoryjcem u Uczestników, zostaną ocenione formalnie za pomocą ustrukturyzowanych kwestionariuszy (cotygodniowe CSI i QOL w wyznaczonych godzinach), które zostaną zbadane przez wyznaczoną pielęgniarkę badawczą oraz nieformalnie za pośrednictwem osobistych inicjowanych przez Uczestnika kontakt z pielęgniarką badawczą lub klinicystą. Krew pod kątem bezpieczeństwa klinicznego i wyników badań histologicznych będzie jednocześnie badana (przez wyznaczoną pielęgniarkę badawczą lub wyznaczonego badacza) pod kątem częstości występowania i ciężkości nieprawidłowości laboratoryjnych. Wyniki badań krwi i oceny objawów zostaną zakodowane w formacie umożliwiającym ponowną identyfikację przed dodaniem do zabezpieczonej bazy danych o ograniczonym dostępie. Badania przesiewowe krwi obejmujące test ciążowy z surowicy podczas badania przesiewowego (pozytywny wynik testu wykluczy Uczestnika z udziału w badaniu) oraz test ciążowy z moczu w przypadku podejrzenia ciąży w trakcie trwania badania. 12-miesięczny postęp w kierunku liberalnej diety będzie monitorowany przez comiesięczną ocenę tTG, z comiesięczną oceną CSI i kontaktem z Uczestnikiem.

Parametry laboratoryjne/Analiza: Analiza krwi: Pełna morfologia krwi (CBC), miano IgA-tTG, czynność wątroby i nerek oraz testy na żelazo i przesiewowy test ciążowy z surowicy zostaną przeprowadzone w Sullivan Nicolaides Pathology (SNP) w Australii i Canterbury Health Laboratories w Nowa Zelandia. Z pozostałej krwi zostaną pobrane komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (jeśli pozwolą na to okoliczności) i przechowywana będzie surowica.

Analiza kału: Próbki zostaną pobrane do worków do pobierania próbek beztlenowych, a podwielokrotność zostanie przeniesiona do dostarczonych plastikowych słoików z zakrętką, oba do zamrożenia w temperaturze -20°C do krótkotrwałego przechowywania i transportu oraz do przechowywania w temperaturze -80°C przez długi czas. określenie ilościowej analizy reakcji łańcuchowej polimerazy polimerazy (qPCR) jaj pasożyta, która ma być przeprowadzona przez wyznaczony personel bez zaślepienia, nadzorowany przez prof. Próbki kału będą również przechowywane do przyszłej analizy zbiorowisk bakteryjnych (mikroflory).

Analiza błony śluzowej: Biopsje dwunastnicy (14 biopsji szczyptowych, zgodnie z wcześniejszymi badaniami) zostaną pobrane przez akredytowanego na szczeblu krajowym iw badaniu gastroenterologa wspieranego przez osobę uspokajającą w akredytowanej placówce. Cztery biopsje zostaną przeznaczone do konwencjonalnej histologii. Aby zapewnić standaryzację, używane będą kleszcze do biopsji Boston Scientific Radial Jaw® 4 - 2,8 mm. Skrawki tkankowe zatopione w parafinie (3 μm) zostaną wybarwione H&E i anty-cluster o różnicowaniu 3 (anty-CD3). Histopatologia kliniczna będzie nadzorowana przez specjalistę patologii przewodu pokarmowego (A/prof. Andrew Clouston) i zgłaszane jednocześnie do celów klinicznych. Najlepsze reprezentatywne obrazy terenowe z każdego przypadku zostaną wybrane przez prof. patolog (dr. Grzegorz Miller). W każdym punkcie czasowym dwie cztery próbki tkanki biopsyjnej będą przechowywane w temperaturze -80°C w 10% roztworze stabilizującym glicerolRNA do przyszłych analiz ekspresji genów i mikroflory.

Całkowita objętość krwi: 50 ml na pobranie x 6 od tygodnia minus 4 do tygodnia 42. 10 ml miesięcznie przez 12 miesięcy. Łącznie 420 ml w ciągu 2 lat.

Określenie wielkości próby: Spożycie glutenu jest toksyczne, gdy jest spożywane przez osoby z CeD. W przeciwieństwie do konwencjonalnej próby testującej interwencję mającą na celu odwrócenie choroby, ta próba opiera się na toksyczności glutenu w celu promowania aktywności choroby. Badanie ocenia przede wszystkim bezpieczeństwo ekspozycji na gluten w CeD u uczestników zarażonych tęgoryjcem. Proponowana eskalacja prowokacji glutenem jest bezprecedensowa i chociaż wiele osób z CeD spożywa duże ilości glutenu z powodu nieznajomości diagnozy lub świadomej decyzji nieprzestrzegania zaleceń lekarskich, przewiduje się, że prowokacja ta wpłynie niekorzystnie na niechronioną grupę kontrolną otrzymującą placebo. Zgodnie z tą obawą kohorta kontrolna była niewielka. W badaniu weźmie udział 60 uczestników, w tym 10 w grupie kontrolnej, 40 w grupie otrzymującej niskie dawki tęgoryjca (L3-10) i 10 w grupie otrzymującej średnią dawkę tęgoryjca (L3-20).