根据 CYP3A5 基因型在肾移植受者中分配他克莫司剂量方案的临床试验

客观的

1. 确定基因型指导剂量方案组和常规组之间他克莫司治疗肾移植受者的临床结果
2. 确定 CYP3A5 多态性对肾移植受者临床结果的影响 综述文章 肾移植是终末期肾功能衰竭患者改善生活质量最合适的治疗方法。 泰国国家卫生安全办公室估计，每名患者肾移植的费用约为 25 万至 40 万泰铢。 但患者不得不服用免疫抑制药物如环孢菌素、他克莫司、硫唑嘌呤、霉酚酸酯、泼尼松龙等以预防移植物排斥反应。 他克莫司是一种在世界范围内使用的常见免疫抑制药物。 然而，他克莫司具有狭窄的治疗水平并且需要定期治疗监测，因为剂量方案存在个体间差异。 达到和维持他克莫司的目标浓度与他克莫司的毒性和移植物排斥有关。 不仅年龄、体重和药物相互作用，而且他克莫司代谢途径中的遗传因素在他克莫司血浓度中起重要作用。

细胞色素 P450 3A4 (CYP3A4) 和 CYP3A5 是负责他克莫司代谢的主要酶。 与 CYP3A4 不同，CYP3A5 具有更多的多态性，酶的表达受 CYP3A5 基因变体控制。 CYP3A5*3 是最常见的等位基因变体，内含子 3 内的 A 到 G 转变 (A6986G) 导致截短蛋白质的产生。 从我们小组之前的研究来看，CYP3A5*3 的等位基因频率为 66%，低于高加索人群中报道的频率 (85%)。 在 400 名健康的泰国志愿者中，CYP3A5*1/*1、CYP3A5*1/*3、CYP3A5*3/*3 的患病率分别为 13.75%、42.75% 和 43.50%（未发表数据）。

携带 CYP3A5*1/*1 或 CYP3A5*1/*3 等位基因的患者显示他克莫司清除率高于 CYP3A5*3/*3 患者（0.679 ± 0.195 对比 0.355 ± 0.091 L/h/kg）。 因此，CYP3A5*3/*3 患者接受的他克莫司剂量比 CYP3A5*1/*1 或 CYP3A5*1/*3 患者低 48%，以达到相同的治疗范围。

我们之前的研究表明，在 CYP3A5*1/*1 组中，诱导期所需的他克莫司平均剂量显着更高 (P= 0.006)，为 0.142±0.050 mg/kg/day 比携带 CYP3A5*1/*3 组的患者需要的 0.097±0.040 mg/kg/day 或 CYP3A5*3/*3 组 0.077±0.020 毫克/千克/天。 CYP3A5*1/*1组所需的他克莫司维持剂量为0.12±0.03 mg/kg/day 高出 1.3 倍 (P<0.0001) 比用于 CYP3A5*1/*3 的 0.09±0.03 mg/kg/天，比CYP3A5*3/*3组高2.4倍0.05±0.02 毫克/千克/天。

之前的前瞻性随机研究显示，接受基因型指导的他克莫司给药方案的患者在开始他克莫司治疗后第 3 天达到目标血药浓度的比例高于对照组。 该研究未显示两组之间存在差异的临床结果，并且随访时间很短，只有三个月。 本研究仅在诱导阶段进行调查。

因为大多数研究仅在诱导阶段进行调查，随访时间很短。 本研究将进行一项随机前瞻性研究，以评估在移植后的诱导期和维持期根据 CYP3A5 基因型调整他克莫司剂量是否能够比对照组达到目标浓度。 此外，本研究将探讨 CYP3A5 多态性对肾移植结果的影响。

方法 这项前瞻性、开放标签、随机研究将在泰国孔敬孔敬大学医学院医学系肾脏科进行。 本研究经泰国孔敬大学人类研究伦理委员会批准 (HE551389)

患者将随机分配接受固定剂量（常规组）或基因型指导剂量组的他克莫司。

1. 诱导期（0-4 周） 分配到常规组的患者将接受他克莫司 0.1 mg/kg/天。 基因型指导组中的患者将根据 CYP3A5 基因型接受他克莫司治疗。 CYP3A5*1/*1 患者将接受他克莫司 0.125 mg/kg/天。 CYP3A5*1/*3 患者将接受他克莫司 0.1 mg/kg/天。 CYP3A5*3/*3 患者将接受他克莫司 0.08 mg/kg/天。 此阶段的他克莫司目标水平为 5-8 ng/ml。
2. 维持阶段（5-24 周） 常规组患者将接受他克莫司 0.08 mg/kg/天。 基因型指导组中的患者将根据 CYP3A5 基因型接受他克莫司治疗。 CYP3A5*1/*1 患者将接受他克莫司 0.12 mg/kg/天。 CYP3A5*1/*3 患者将接受他克莫司 0.08 mg/kg/天。 CYP3A5*3/*3 患者将接受他克莫司 0.04 mg/kg/天。 此阶段的他克莫司目标水平为 3-5 ng/ml。

患者将在移植前随机分组，根据四台计算机生成的随机分组。 患者将被随访 6 个月，除非他们退出研究或失访

1. 年龄 > 18 岁
2. 将在泰国孔敬孔敬大学医学院 Srinagarind 医院进行肾移植
3. 将进行第一次肾移植
4. 将接受他克莫司作为免疫抑制剂以防止移植物排斥
5. 天冬氨酸转氨酶和丙氨酸转氨酶 < 正常水平的 2 倍，总胆红素 <1.5 mg/dl，直接胆红素在正常范围内
6. 自愿参与本研究并签署知情同意书 排除标准 肾移植受者

1. 拒绝参加本研究 2. 有他克莫司药物过敏史 3. 是否干预妊娠和哺乳期 所有肾移植候补患者将被邀请参加本研究并签署知情同意书。 将被纳入本研究的患者将抽取 6 毫升血液进行 CYP3A5 基因型测定。

进行肾移植并参加本研究的患者将在移植前一小时和移植后随机分配相同数量的患者接受表 1 中的他克莫司剂量。 他克莫司血浓度，血尿素氮（BUN）/肌酐（Cr），在诱导期（肾移植后第1-4周）第1、3、4、5、7、14、28天定期检测。 此外，移植后第7、14、28天尿24小时Cr、蛋白均有表现。 医生会根据他们的实践修改他克莫司的每日剂量，以达到谷浓度的目标范围 (5-8 ng/ml)。 作为一般做法，患者将接受其他免疫抑制药物，如皮质类固醇、吗替麦考酚酯。

维持期（肾移植后第5-24周）他克莫司剂量调整见表1。5、8、12、16、20日检测他克莫司血浓度、尿素氮/肌酐和24小时尿肌酐和蛋白。 ，移植后24岁。 医生会根据他们的实践修改他克莫司的每日剂量，以达到谷浓度的目标范围 (3-5 ng/ml)。

DNA 提取和基因分型 外周血样本将从个体受试者中收集。 基因组 DNA 样本将通过 QIAamp® DNA Blood Mini 试剂盒从血沉棕黄层中提取。 CYP3A5 基因型将通过实时聚合酶链反应（实时 PCR）进行检查。 CYP3A5*3 的分析将在 ABI PRISM® 7500 实时 PCR 系统（Applied Biosystem，Foster city，California）上使用 Custom TaqMan® Single nucleotide polymorphism Genotyping Assay（Applied Biosystem，Foster city，California）进行。 简而言之，25 μl 反应混合物将包含 100 ng 基因组 DNA、TaqMan® Universal PCR Master Mix 和 TaqMan® MGB 引物以及特异性 CYP3A5*3 探针。 有义引物为 5'- CGAATGCTCTACTGTCATTTCTAACCA -3'，反义引物为 5'- TGAAGGGTAATGTGGTCCAAACAG -3'。 CYP3A5*1 探针是用 6-羧基荧光素 (FAM) 标记的 5'- TTTGTCTTTCAATATCTC -3'，CYP3A5*3 探针是用 50-荧光素 (VIC) 标记的 5'- TTTGTCTTTTCAGTATCTC -3'。 对于 AmpErase® 尿嘧啶 N-糖基化酶 (UNG)，反应混合物将在 50oC 下孵育 2 分钟。 UNG 降解任何残留的 DNA 污染，然后在 95 摄氏度下激活 AmpliTaq® Gold 酶 10 分钟。 扩增将进行 40 个循环，其中每个循环包括在 92 摄氏度下变性 15 秒，然后在 60 摄氏度下退火和引物延伸 1 分钟。 实时PCR碱基序列将通过基因测序来确认。