生育力保存方法：玻璃化冷冻对体外成熟卵母细胞的影响 (OVOMIV)
在过去的几十年里，妇女和青少年的癌症治疗有所改善。 因此说明存活率较高。 然而，癌症治疗可以改变生殖功能并大大缩短成年期的生育能力。 因此，建议在可能的情况下通过卵母细胞玻璃化冷冻进行生育力保存。 玻璃化冷冻是一种冷冻技术，与使用新鲜卵母细胞相比，辅助生殖技术可实现高存活率和类似结果。 最近开发了一种创新的自动玻璃化方法。 通常的方案包括将成熟的卵母细胞玻璃化。 然而，这种策略不能用于激素敏感性癌症或无法进行卵巢刺激的情况。 在这些情况下，可以收集未成熟的卵母细胞。 辅助生殖技术的使用还需要实现体外成熟步骤。
根据最近的文献数据，目前尚不清楚卵母细胞的玻璃化冷冻必须在体外成熟（IVM）之前还是之后进行。 因此，本研究的目的是研究IVM前后进行玻璃化冷冻对卵母细胞结构和功能的影响。 玻璃化将通过半自动方法进行，这是一种创新方法。
研究概览
详细说明
为了进行这项研究，研究者将比较三组。 第1组：IVM前玻璃化未成熟卵母细胞；第2组：IVM后玻璃化未成熟卵母细胞；第 3 组：经 IVM 处理的新鲜未成熟卵母细胞（未玻璃化，对照组）。
未成熟的卵母细胞来自 ICSI 患者。 在常规中，这些卵母细胞（生发泡）通常会被破坏，因为它们不能用于注射。 妇女将给予知情和书面同意。 纳入标准是 37 岁以下无排卵障碍的女性。
玻璃化将使用半自动方法（Gavi，Merck）进行。 将通过延时分析动力学和成熟率（Primovision、Vitrolife） 在成熟的卵母细胞中，肌动蛋白和微管蛋白细胞骨架、纺锤体组织和皮质颗粒将通过免疫荧光和 3D 共聚焦显微镜进行研究。 将通过RT-PCR分析母体因子转录的表达。 倍性将通过 multiFISH 和/或 CGH 阵列进行分析。
研究类型
注册 (预期的)
联系人和位置
学习地点
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Clermont-Ferrand、法国、63003
- CHU clermont-ferrand
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参与标准
资格标准
适合学习的年龄
接受健康志愿者
有资格学习的性别
取样方法
研究人群
描述
纳入标准：
- ICSI治疗
- 未成熟卵母细胞
- 无排卵病症
排除标准：
- 多动卵巢综合征
- 子宫内膜异位症
- 排卵疾病
学习计划
研究是如何设计的？
设计细节
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
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未成熟卵母细胞在体外成熟前玻璃化
未成熟的卵母细胞将使用半自动方法使用封闭系统玻璃化进行玻璃化。
升温后，将在 36 小时内进行成熟培养
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Gavi, Merck ® 允许使用封闭系统进行半自动玻璃化。
第1组：IVM前玻璃化未成熟卵母细胞；第2组：IVM后玻璃化未成熟卵母细胞；第 3 组：经 IVM 处理的新鲜未成熟卵母细胞（未玻璃化，对照组）。
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未成熟卵母细胞在体外成熟后玻璃化
未成熟卵母细胞的成熟培养将在体外进行 36 小时。
IVM后，成熟的卵母细胞将通过半自动方法在封闭系统中玻璃化。
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Gavi, Merck ® 允许使用封闭系统进行半自动玻璃化。
第1组：IVM前玻璃化未成熟卵母细胞；第2组：IVM后玻璃化未成熟卵母细胞；第 3 组：经 IVM 处理的新鲜未成熟卵母细胞（未玻璃化，对照组）。
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新鲜卵母细胞
未成熟卵母细胞的培养将在 36 小时内进行
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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胚胎发育动力学
大体时间：ICSI 后 6 天并完成研究
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根据使用 Time Lapse Primovision 获得的记录，研究人员将能够确定体外成熟后胚胎发育的准确时间。
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ICSI 后 6 天并完成研究
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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成熟卵母细胞中肌动蛋白和微管蛋白细胞骨架和纺锤体组织的分析（中期 II）
大体时间：01/01/2019 - 31/12/2019
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中期 II 期卵母细胞将用于免疫荧光实验，以染色肌动蛋白、微管蛋白和染色体。
将使用共聚焦显微镜对卵母细胞进行成像，以进行高分辨率成像和定量图像分析。
将分析第二个减数分裂纺锤体的长度、位置和方向。
将定量分析肌动蛋白网络和染色体。
将所有测量值与用作对照组的新鲜成熟（中期-II）卵母细胞进行比较。
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01/01/2019 - 31/12/2019
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第一次减数分裂过程中染色体分离的分析
大体时间：01/01/2019 - 31/12/2019
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将执行多荧光原位杂交和/或 CGH 阵列以测量玻璃化后的染色体分离
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01/01/2019 - 31/12/2019
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成熟（中期 II）卵母细胞中皮质颗粒分布的分析。
大体时间：01/01/2019 - 31/12/2019
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凝集素染色将用于标记成熟卵母细胞的皮质颗粒，以观察该方案是否对其空间分布有影响。
为了分析这种染色，研究者将使用定量图像分析方法。
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01/01/2019 - 31/12/2019
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母体因素稳定性分析。
大体时间：01/01/2019 - 31/12/2019
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在卵子发生过程中，作为蛋白质和转录物储存在卵母细胞细胞质中的母体因子对于早期胚胎发育至关重要。
研究者将结合实时 PCR 进行逆转录，以量化从人类卵母细胞数据库中选择的候选基因的转录量。
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01/01/2019 - 31/12/2019
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合作者和调查者
研究记录日期
研究主要日期
学习开始 (预期的)
初级完成 (预期的)
研究完成 (预期的)
研究注册日期
首次提交
首先提交符合 QC 标准的
首次发布 (实际的)
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
上次提交的符合 QC 标准的更新
最后验证
更多信息
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