纤维肌痛和橄榄油

目的：

本研究的目的是研究两种具有不同抗氧化剂含量的橄榄油对患者心血管危险因素（凝血参数、血小板指数、红细胞计数、炎症标志物、血脂、一氧化氮和皮质醇）的影响诊断为纤维肌痛。 研究人员将确定与血栓形成相关的参数（纤维蛋白原水平、凝血酶原时间、凝血酶原活性、头孢菌素时间、血小板计数、血小板分布宽度 [PDW]、平均血小板体积 [MPV]、血小板压积、红细胞 [RBC] 计数、中性粒细胞-与淋巴细胞的比率 [NLR] 和血小板与淋巴细胞的比率 [PLR]），炎症标志物（白细胞介素 6 [IL-6]、IL-10、C 反应蛋白 [CRP]、红细胞沉降率 (ESR)） 、一氧化氮水平、脂质分布和皮质醇水平。

参加者：

本研究将按照世界医学会赫尔辛基宣言的规定进行。

研究小组将联系西班牙纤维肌痛患者协会 AFIXA（西班牙哈恩纤维肌痛协会）寻找患者参与研究。 研究人员将在哈恩大学（西班牙）健康科学学院的实验室召集患者，以获得一些感兴趣的数据（年龄、BMI、其他慢性疾病、怀孕、哺乳和用药）。 根据这些数据，研究人员将选择纤维肌痛组。 在第二次访问实验室时，所有患者都将签署知情同意书，采集血样并完成几份问卷（纤维肌痛影响问卷、视觉类比量表、简表 12 健康调查）。

患有纤维肌痛的女性之前将由专业风湿病学家诊断为纤维肌痛，并符合美国风湿病学会 (ACR) 的纤维肌痛标准。 排除标准是存在任何其他慢性疾病（糖尿病、高血压、类风湿性关节炎、肝炎、癌症或缺血性心脏病）、血脂异常、妊娠、哺乳期或 II 级肥胖（BMI ≥ 35 kg/m2）。 所有参与者都不会接受抗凝剂、皮质类固醇、雌激素、止痛药或抗炎药的治疗，并且只有在我们的研究开始前至少 2 个月停止使用这些药物的参与者才会被纳入。 没有人会经常饮酒，所有人都是不吸烟者。 所有参与者都将久坐不动。

研究设计：将进行随机、对照、双盲营养试验。 该试验将包括在 3 周内消耗 50 毫升/天的两种具有不同抗氧化剂含量的有机橄榄油之一，EVOO 或 ROO。 与长期试验相比，短期营养试验（例如本试验）可能具有某些优势，因为它允许患者坚持更严格、更受控制的饮食，而不是摄入其他抗氧化剂。 通过这种方式，可以限制其他抗氧化剂的可能干扰，以及患者生活方式可能改变的干扰，这也可能改变结果。

参与者将被随机分配到两组之一：EVOO 和 ROO。 在开始为期 3 周的饮食试验之前，参与者将进行为期 2 周的清除期，在此期间他们食用 ROO（每天 50 毫升，持续 2 周），因为他们属于定期食用橄榄油的人群。 将在 3 周治疗期前后确定每位参与者的生化标志物和临床参数。

有机橄榄油将从 Olifarma S.L. 获得。 （西班牙格拉纳达）。 橄榄油将采用类似的包装，参与者将不知道他们将食用的橄榄油类型。 参与者将食用处理过的生橄榄油，但将使用 ROO 进行烹饪，以保持抗氧化剂摄入量不变。 调查人员将为整个家庭提供足够数量的 ROO 用于烹饪。 研究人员将通过 24 小时回忆来估计参与者的摄入量，他们将在试验开始时完成 3 天（2 个工作日和一天休息日）。 研究人员将使用 3 天内获得的值的平均值来计算参与者的能量摄入量（千卡/天）和大量营养素的摄入量（碳水化合物 [克/天]、脂质 [克/天] 和蛋白质 [克/天]) 和微量营养素，尤其是那些可能具有抗氧化作用的元素，包括维生素 C、维生素 A、铜、锌和硒。 基于这一分析，研究人员将为所有参与者提供饮食建议，重点关注每个人应该改进的方面。 将记录参与者在试验开始和结束时的体重数据。 调查人员将要求参与者在试验结束时归还所有处理过的橄榄油容器（消耗的和未消耗的容器），以控制橄榄油的消耗（即每个参与者将返回的空容器和满容器的数量）。

采血及血样制备：禁食过夜后，于清晨从肘前静脉采静脉血，分别注入装有抗凝剂和不含抗凝剂的试管中。 无抗凝剂管中的血液将在室温下凝结 30 分钟。 然后将抗凝管和无抗凝管在 4°C 下以 3500 rpm 离心 5 分钟，分别获得血浆和血清样品。 血液将始终在一天中的同一时间抽取，以避免昼夜节律变化。 血栓形成相关参数（纤维蛋白原水平、凝血酶原时间、凝血酶原活性、头孢菌素时间、血小板计数、血小板分布宽度 [PDW]、平均血小板体积 [MPV]、血小板压积、红细胞 [RBC] 计数、中性粒细胞与淋巴细胞比值[NLR]、血小板与淋巴细胞的比率 [PLR]) 和红细胞沉降率 (ESR) 在血浆样品中测定。 在血清样本中测量了炎症标志物（白细胞介素 6 [IL-6]、IL-10、C 反应蛋白 [CRP]）、一氧化氮水平、脂质谱和皮质醇水平。

参与者的临床特征：研究人员将从参与者的访谈和问卷中获得人口统计学和临床​​数据。 同一位专家将在整个研究过程中进行所有测量和测试。 问卷将在抽血后立即完成。 研究人员将使用西班牙语版的纤维肌痛影响问卷 (FIQ) 评估纤维肌痛患者日常生活活动中的功能能力。 FIQ 评分是研究人员最常用于估计纤维肌痛严重程度的工具，范围从 0 到 100。 纤维肌痛患者自我报告的肌肉骨骼疼痛将通过视觉模拟量表（VAS；10 厘米）进行评估。 对于这两种工具，较高的分数反映较差的症状。 研究人员将使用西班牙语版本的 12 项短期健康调查 (SF-12) 评估患者和对照组的身体（物理成分摘要，PCS-12）和心理（心理成分摘要，MCS-12）健康状况). 分数范围从 0 到 100，较低的值反映较差的健康状况。

生化参数的测定

一氧化氮 (NO) 测量：通过使用基于臭氧化学发光的方法测量硝酸盐/亚硝酸盐和 S-亚硝基化合物 (NOx)，间接量化 NO 的产生。 解冻的血清等分试样用 NaOH 0.8 N 和 ZnSO4 16% 溶液脱蛋白。 NOx 的总量将如前所述（Rus 等人，2011 年）使用 Sievers Instruments NOA 280i 型（GE Analytical Instruments，科罗拉多州（科罗拉多州），美国）的吹扫系统进行测定。

炎症标志物的测定：IL-6水平将通过使用Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter)的化学发光免疫测定来测定。 将使用 MLX™ 发光计（Dynex Technologies, Chantilly, VA）通过化学发光免疫酶测定来测量 IL-10 的水平。 CRP 将使用 AU 5800 分析仪 (Beckman Coulter) 测量。

皮质醇测量：使用 AxSYM 分析仪（Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA）通过荧光偏振免疫测定法测定血清样品中的皮质醇水平。

脂质谱的测定：血清脂质谱（总胆固醇、高密度脂蛋白[HDL]-胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白A1和载脂蛋白B）将使用OLYMPUS AU 5400分析仪（Beckman Coulter）通过分光光度法测量。 将使用 Friedewald 方程间接估计低密度脂蛋白 (LDL)-胆固醇水平。 同型半胱氨酸的水平将使用 AxSYM 分析仪 (Abbott Laboratories) 通过荧光偏振免疫测定来确定。 研究人员将通过测量硫代巴比妥酸反应物质 (TBARS) 来确定脂质过氧化，TBARS 是脂质过氧化的良好指标，是氧化应激的主要标志。 将按照制造商的建议（TBARS 检测试剂盒，OXItek，目录。 0801192）。

血栓形成相关参数的测定：血液凝固参数（纤维蛋白原水平、凝血酶原时间、凝血酶原活性和脑磷脂时间）将使用 BCS XP 分析仪（Siemens Healthineers，Erlangen，Germany）测定血浆样品。 研究人员将使用 ADVIA 2120 通过流式细胞术测量血浆样本中血小板功能的决定因素（血小板计数、血小板分布宽度 [PDW] 和平均血小板体积 [MPV]）以及红细胞 (RBC)、中性粒细胞和淋巴细胞计数分析仪 (Siemens Healthineers, Erlangen, Germany)。

样本量评估：使用 Ene 3.0 软件 (GlaxoSmithKline) 估计样本量。 样本量是根据丙二醛的水平估算的（Gassió 等人，2008 年）。 采用单边假设，假设 I 类错误的概率为 5%，β 风险为 0.10，效应的标准差为 1.4，则认为每个研究分支需要 10 名患者，即总共 20 名患者病人。 如果假设 10% 的患者流失，则需要 24 名患者的最小样本量，每个研究分支需要 12 名患者。

统计分析：将使用统计包 IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL) 对数据进行统计分析。 将执行 Kolmogorov-Smirnov 检验和 Levenne 检验以分别检验正态性和同方差性。

为了分析每种橄榄油在前后测量之间的影响，采用双向方差分析对遵循正态分布和方差同方差原则的数据进行了测试。 统计显着性将通过应用未配对的学生 t 检验来比较平均值之间的差异来确定。 不遵循正态分布或同方差性原则的数据将使用 Scheirer-Ray-Hare 检验（双向方差分析的非参数等价物）进行检验。 将通过应用 Mann-Whitney U 检验比较均值之间的差异来确定统计显着性。

为了分析橄榄油类型的影响，所有值都将转换为增量分数（即后置前值），然后通过未配对的学生 t 检验或基于正态性和同方差性的 Mann-Whitney U 检验进行测试数据的。

对于参数检验，将使用 Cohen's d 计算效果大小，对于非参数检验，将使用 eta 平方 (η²) 来计算。 0.2、0.5 和 0.8 的科恩 d 值分别对应于将效应大小解释为小、中和大的经典科恩带。 0.02、0.13 和 0.26 的 η² 值分别对应于小、中和大效应大小。 研究人员将统计显着性水平设置为 p < 0.05。