Fibromialgia e olio d'oliva

Scopo:

L'obiettivo del presente studio è quello di indagare gli effetti di due oli di oliva con diverso contenuto di antiossidanti sui fattori di rischio cardiovascolare (parametri di coagulazione del sangue, indici piastrinici, conta dei globuli rossi, marcatori infiammatori, profilo lipidico, ossido nitrico e cortisolo) nei pazienti diagnosi di fibromialgia. Gli investigatori determineranno i parametri correlati alla trombosi (livelli di fibrinogeno, tempo di protrombina, attività di protrombina, tempo di cefalina, conta piastrinica, larghezza di distribuzione piastrinica [PDW], volume piastrinico medio [MPV], critpiastrinica, conta dei globuli rossi [RBC], neutrofili- rapporto piastrine-linfociti [NLR] e rapporto piastrine-linfociti [PLR]), marcatori infiammatori (interleuchina 6 [IL-6], IL-10, proteina C-reattiva [PCR], velocità di eritrosedimentazione (VES)) , livelli di ossido nitrico, profilo lipidico e livelli di cortisolo.

Partecipanti:

Questo studio sarà condotto in conformità con le disposizioni della Dichiarazione di Helsinki della World Medical Association.

Il gruppo di ricerca contatterà un'associazione spagnola di pazienti con fibromialgia, AFIXA (Associazione di fibromialgia di Jaén, Spagna) per trovare pazienti che partecipino allo studio. I ricercatori convocheranno i pazienti nel laboratorio della Facoltà di Scienze della Salute dell'Università di Jaén (Spagna) per ottenere diversi dati di interesse (età, indice di massa corporea, altre malattie croniche, gravidanza, allattamento e farmaci). Sulla base di questi dati, gli investigatori selezioneranno il gruppo fibromialgia. In una seconda visita al laboratorio, tutti i pazienti firmeranno un modulo di consenso informato, verranno prelevati i campioni di sangue e completeranno diversi questionari (Fibromyalgia Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Le donne con fibromialgia saranno precedentemente diagnosticate con fibromialgia da un reumatologo professionista e soddisferanno i criteri dell'American College of Rheumatology (ACR) per la fibromialgia. I criteri di esclusione saranno la presenza di qualsiasi altra malattia cronica (diabete mellito, ipertensione, artrite reumatoide, epatite, cancro o cardiopatia ischemica), dislipidemia, gravidanza, allattamento o obesità di grado II (BMI ≥ 35 kg/m2). Nessuno dei partecipanti sarà trattato con anticoagulanti, corticosteroidi, estrogeni, analgesici o farmaci antinfiammatori e sarà incluso solo se ne avesse smesso di usarli almeno 2 mesi prima dell'inizio del nostro studio. Nessuno consumerà alcolici regolarmente e tutti saranno non fumatori. Tutti i partecipanti saranno sedentari.

Disegno dello studio: verrà eseguito uno studio nutrizionale randomizzato, controllato, in doppio cieco. La prova consisterà nel consumo di 50 ml/giorno di uno dei due oli di oliva biologici con diverso contenuto di antiossidanti, EVOO o ROO, per 3 settimane. Una sperimentazione nutrizionale a breve termine, come quella in esame, può offrire alcuni vantaggi rispetto a una sperimentazione a lungo termine, in quanto consente ai pazienti di aderire a una dieta più rigorosa e controllata in relazione all'assunzione di altri antiossidanti. In questo modo si può limitare l'eventuale interferenza di altri antiossidanti, così come l'interferenza di eventuali cambiamenti nello stile di vita dei pazienti, che potrebbero anche alterare i risultati.

I partecipanti verranno assegnati in modo casuale a uno dei due gruppi: EVOO e ROO. Prima di iniziare la prova dietetica di 3 settimane, i partecipanti condurranno un periodo di washout di 2 settimane durante il quale hanno consumato ROO (50 ml al giorno per 2 settimane) perché fanno parte di una popolazione che consuma regolarmente olio d'oliva. I marcatori biochimici e i parametri clinici in ciascun partecipante saranno determinati prima e dopo il periodo di trattamento di 3 settimane.

Gli oli di oliva biologici saranno ottenuti da Olifarma S.L. (Granada, Spagna). Gli oli d'oliva saranno confezionati in modo simile e i partecipanti saranno accecati dal tipo di olio d'oliva che consumeranno. I partecipanti consumeranno il trattamento olio d'oliva crudo ma useranno ROO per cucinare al fine di mantenere inalterata la loro ingestione di antiossidanti. Gli investigatori forniranno ROO per cucinare in quantità sufficiente per tutta la famiglia. I ricercatori stimeranno l'assunzione dei partecipanti mediante un richiamo di 24 ore che completeranno per 3 giorni (2 giorni lavorativi e un giorno libero) all'inizio della sperimentazione. Gli investigatori utilizzeranno la media dei valori ottenuti nei 3 giorni per calcolare l'apporto energetico dei partecipanti (kcal/giorno) e l'assunzione di macronutrienti (carboidrati [g/giorno], lipidi [g/giorno] e proteine ​​[g/giorno] ]) e micronutrienti, in particolare quelli che possono avere un effetto antiossidante, tra cui vitamina C, vitamina A, rame, zinco e selenio. Sulla base di questa analisi, i ricercatori forniranno a tutti i partecipanti raccomandazioni dietetiche, concentrandosi sugli aspetti che ciascuno dovrebbe migliorare. Verranno registrati i dati del peso dei partecipanti all'inizio e alla fine della prova. Gli investigatori chiederanno ai partecipanti di restituire tutti i contenitori di olio d'oliva di trattamento (i contenitori consumati e non consumati) alla fine della prova per il controllo del consumo di olio d'oliva (ovvero, un conteggio dei contenitori vuoti e pieni che ogni partecipante restituirà).

Raccolta del sangue e preparazione dei campioni di sangue: Dopo il digiuno notturno, il sangue venoso verrà prelevato al mattino presto dalla vena antecubitale in diverse provette con anticoagulanti e provette prive di anticoagulanti. Il sangue delle provette prive di anticoagulanti verrà lasciato coagulare per 30 minuti a temperatura ambiente. Le provette anticoagulanti e prive di anticoagulanti saranno quindi centrifugate a 3500 rpm per 5 minuti a 4°C per ottenere rispettivamente campioni di plasma e siero. Il sangue verrà prelevato sempre alla stessa ora del giorno per evitare variazioni circadiane. Parametri correlati alla trombosi (livelli di fibrinogeno, tempo di protrombina, attività di protrombina, tempo di cefalina, conta piastrinica, larghezza di distribuzione piastrinica [PDW], volume piastrinico medio [MPV], critpiastrinico, conta dei globuli rossi [RBC], rapporto neutrofili-linfociti [NLR], il rapporto tra piastrine e linfociti [PLR]) e la velocità di eritrosedimentazione (VES) sono stati determinati in campioni di plasma. Marcatori infiammatori (interleuchina 6 [IL-6], IL-10, proteina C-reattiva [CRP]), livelli di ossido nitrico, profilo lipidico e livelli di cortisolo sono stati misurati in campioni di siero.

Caratteristiche cliniche dei partecipanti: gli investigatori otterranno dati demografici e clinici dall'intervista e dai questionari dei partecipanti. Lo stesso specialista eseguirà tutte le misurazioni e i test durante lo studio. I questionari saranno compilati immediatamente dopo il prelievo del sangue. I ricercatori valuteranno la capacità funzionale nelle attività della vita quotidiana nei pazienti con fibromialgia utilizzando la versione spagnola del Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). Il punteggio FIQ, che è lo strumento più spesso utilizzato dai ricercatori per stimare la gravità della fibromialgia, varia da 0 a 100. Il dolore muscoloscheletrico auto-riferito sarà valutato nei pazienti con fibromialgia mediante una scala analogica visiva (VAS; 10 cm). Per entrambi questi strumenti, i punteggi più alti riflettono una sintomatologia peggiore. Gli investigatori valuteranno lo stato di salute fisica (Fisical Component Summary, PCS-12) e mentale (Mental Component Summary, MCS-12) dei pazienti e dei controlli utilizzando la versione spagnola del 12-Item Short-Form Health Survey (SF-12 ). I punteggi vanno da 0 a 100, con valori più bassi che riflettono uno stato di salute peggiore.

Determinazione dei parametri biochimici

Misurazione dell'ossido di azoto (NO): la produzione di NO è stata quantificata indirettamente misurando i composti di nitrato/nitrito e S-nitrosio (NOx) utilizzando un metodo basato sulla chemiluminescenza dell'ozono. Le aliquote di siero scongelate sono state deproteinizzate con soluzioni di NaOH 0,8 N e ZnSO4 16%. La quantità totale di NOx sarà determinata come precedentemente descritto (Rus et al., 2011) utilizzando il sistema di spurgo di Sievers Instruments, modello NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Determinazione dei marcatori infiammatori: Il livello di IL-6 sarà determinato mediante un test immunologico chemiluminescente utilizzando Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). I livelli di IL-10 saranno misurati mediante un saggio immunoenzimatico chemiluminescente utilizzando un luminometro MLX™ (Dynex Technologies, Chantilly, VA). La PCR sarà misurata utilizzando un analizzatore AU 5800 (Beckman Coulter).

Misurazione del cortisolo: il livello di cortisolo sarà determinato nei campioni di siero mediante un saggio immunologico di polarizzazione della fluorescenza utilizzando un analizzatore AxSYM (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Determinazione del profilo lipidico: Il profilo lipidico sierico (colesterolo totale, lipoproteine ​​ad alta densità [HDL]-colesterolo, trigliceridi, apolipoproteina A1 e apolipoproteina B) sarà misurato mediante una procedura spettrofotometrica utilizzando un analizzatore OLYMPUS AU 5400 (Beckman Coulter). I livelli di colesterolo LDL saranno stimati indirettamente con l'equazione di Friedewald. Il livello di omocisteina sarà determinato mediante immunodosaggio di fluorescenza polarizzata utilizzando un analizzatore AxSYM (Abbott Laboratories). I ricercatori determineranno la perossidazione lipidica misurando le sostanze reattive dell'acido tiobarbiturico (TBARS), che sono un buon indicatore della perossidazione lipidica, un importante indicatore dello stress ossidativo. I TBARS saranno determinati spettrofotometricamente nei campioni di plasma seguendo le raccomandazioni del produttore (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Determinazione dei parametri correlati alla trombosi: I parametri della coagulazione del sangue (livelli di fibrinogeno, tempo di protrombina, attività di protrombina e tempo di cefalina) saranno determinati in campioni di plasma utilizzando l'analizzatore BCS XP (Siemens Healthineers, Erlangen, Germania). I ricercatori misureranno i determinanti della funzione piastrinica (conta piastrinica, larghezza di distribuzione piastrinica [PDW] e volume medio piastrinico [MPV]) e conta di globuli rossi (RBC), neutrofili e linfociti in campioni di plasma mediante citometria a flusso utilizzando ADVIA 2120 analizzatore (Siemens Healthineers, Erlangen, Germania).

Valutazione della dimensione del campione: la dimensione del campione è stata stimata utilizzando il software Ene 3.0 (GlaxoSmithKline). La dimensione del campione è stata stimata sulla base dei livelli di malondialdeide (Gassió et al., 2008). Con un'ipotesi unilaterale, assumendo una probabilità di errore di tipo I del 5%, un rischio β di 0,10, con una deviazione standard dell'effetto di 1,4, si considerano necessari 10 pazienti per ramo dello studio, cioè un totale di 20 pazienti. Se si assume il 10% delle perdite di pazienti, sarà necessaria una dimensione minima del campione di 24 pazienti, 12 per ogni ramo dello studio.

Analisi statistica: l'analisi statistica dei dati verrà eseguita utilizzando il pacchetto statistico IBM SPSS Statistics 24 per Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Il test di Kolmogorov-Smirnov e il test di Levenne saranno eseguiti rispettivamente per testare la normalità e l'omoschedasticità.

Per analizzare l'effetto di ciascun olio d'oliva tra le misure pre e post, i dati che seguivano una distribuzione normale e il principio di omoscedasticità delle varianze sono stati testati da un'ANOVA a due vie. La significatività statistica sarà stabilita applicando un test t di Student per dati non appaiati per confrontare le differenze tra le medie. I dati che non seguono una distribuzione normale o il principio di omoschedasticità saranno testati utilizzando il test di Scheirer-Ray-Hare, l'equivalente non parametrico per l'ANOVA a due vie. La significatività statistica sarà stabilita applicando il Mann-Whitney U-test per confrontare le differenze tra le medie.

Per analizzare l'effetto del tipo di olio d'oliva, tutti i valori saranno convertiti in punteggi delta (cioè valori post-pre) e successivamente saranno testati dal test t di Student non appaiato o dal test U di Mann-Whitney basato su normalità e omoscedasticità di dati.

La dimensione dell'effetto sarà calcolata utilizzando la d di Cohen per i test parametrici e l'eta al quadrato (η²) per i test non parametrici. I valori di d di Cohen di 0,2, 0,5 e 0,8 corrispondono alle classiche bande di Cohen di interpretazione della dimensione dell'effetto rispettivamente come piccola, media e grande. I valori di η² di 0,02, 0,13 e 0,26 corrispondono rispettivamente alla dimensione dell'effetto piccola, media e grande. I ricercatori hanno fissato il livello di significatività statistica a p <0,05.