Fibromyalgi og olivenolie

Sigte:

Målet med denne undersøgelse er at undersøge virkningerne af to olivenolier med forskelligt antioxidantindhold på kardiovaskulære risikofaktorer (blodkoagulationsparametre, blodpladeindeks, antal røde blodlegemer, inflammatoriske markører, lipidprofil, nitrogenoxid og kortisol) hos patienter diagnosticeret med fibromyalgi. Forskerne vil bestemme tromboserelaterede parametre (fibrinogenniveauer, protrombintid, protrombinaktivitet, cephalintid, trombocyttal, trombocytfordelingsbredde [PDW], gennemsnitlig blodpladevolumen [MPV], blodpladekrit, antal røde blodlegemer [RBC], neutrofil- til-lymfocyt-forhold [NLR] og blodplade-til-lymfocyt-forhold [PLR]), inflammatoriske markører (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP], erytrocytsedimentationshastighed (ESR)) , nitrogenoxidniveauer, lipidprofil og kortisolniveauer.

Deltagere:

Denne undersøgelse vil blive udført i overensstemmelse med bestemmelserne i Helsinki-erklæringen fra World Medical Association.

Forskergruppen vil kontakte en spansk sammenslutning af patienter med fibromyalgi, AFIXA (Association of Fibromyalgia of Jaén, Spanien) for at finde patienter til at deltage i undersøgelsen. Forskerne vil indkalde patienter i laboratoriet på Det Sundhedsvidenskabelige Fakultet ved University of Jaén (Spanien) for at få adskillige data af interesse (alder, BMI, andre kroniske sygdomme, graviditet, amning og medicin). Baseret på disse data vil efterforskerne udvælge fibromyalgigruppen. I et andet besøg på laboratoriet vil alle patienter underskrive en informeret samtykkeformular, blodprøverne vil blive taget, og de vil udfylde adskillige spørgeskemaer (Fibromyalgi Impact Questionnaire, Visual Analogic Scale, Short Form 12 Health Survey).

Kvinderne med fibromyalgi vil tidligere blive diagnosticeret med fibromyalgi af en professionel reumatolog og opfyldt American College of Rheumatology (ACR) kriterier for fibromyalgi. Eksklusionskriterier vil være tilstedeværelsen af ​​enhver anden kronisk sygdom (diabetes mellitus, hypertension, reumatoid arthritis, hepatitis, cancer eller iskæmisk hjertesygdom), dyslipidæmi, graviditet, amning eller grad II fedme (BMI ≥ 35 kg/m2). Ingen af ​​deltagerne vil blive behandlet med antikoagulantia, kortikosteroider, østrogener, analgetika eller antiinflammatoriske lægemidler, og vil kun blive inkluderet, hvis de var stoppet med at bruge dem mindst 2 måneder før starten af ​​vores undersøgelse. Ingen vil indtage alkohol regelmæssigt, og alle vil være ikke-rygere. Alle deltagere vil være stillesiddende.

Studiedesign: Et randomiseret, kontrolleret, dobbeltblindt ernæringsforsøg vil udføre. Forsøget vil bestå af indtagelse af 50 ml/dag af en af ​​de to økologiske olivenolier med forskelligt antioxidantindhold, EVOO eller ROO, over 3 uger. Et kortsigtet ernæringsforsøg, som det nuværende, kan give visse fordele i forhold til et langtidsforsøg, da det giver patienterne mulighed for at overholde en strengere og mere kontrolleret diæt i forhold til indtagelsen af ​​andre antioxidanter. På denne måde kan den mulige interferens af andre antioxidanter begrænses, og det samme kan interferens fra mulige ændringer i patienternes livsstil, hvilket også kan ændre resultaterne.

Deltagerne vil blive tilfældigt tildelt en af ​​de to grupper: EVOO og ROO. Inden påbegyndelsen af ​​det 3-ugers diætforsøg, vil deltagerne gennemføre en 2-ugers udvaskningsperiode, hvor de indtog ROO (50 ml dagligt i 2 uger), fordi de er en del af en befolkning, der indtager olivenolie regelmæssigt. Biokemiske markører og kliniske parametre hos hver deltager vil blive fastlagt før og efter den 3-ugers behandlingsperiode.

Økologiske olivenolier vil fås fra Olifarma S.L. (Granada, Spanien). Olivenolierne vil blive pakket på samme måde, og deltagerne vil blive blindet med hensyn til, hvilken type olivenolie de vil indtage. Deltagerne vil indtage behandlingen olivenolie rå, men vil bruge ROO til madlavning for at bevare deres indtagelse af antioxidanter uændret. Efterforskerne vil levere ROO til madlavning i tilstrækkelig mængde til hele familien. Forskerne vil estimere deltagernes indtag ved hjælp af en 24-timers tilbagekaldelse, som de vil gennemføre i 3 dage (2 arbejdsdage og en fridag) i begyndelsen af ​​forsøget. Efterforskerne vil bruge gennemsnittet af de opnåede værdier over de 3 dage til at beregne deltagernes energiindtag (kcal/dag) og indtag af makronæringsstoffer (kulhydrater [g/dag], lipider [g/dag] og protein [g/dag] ]) og mikronæringsstoffer, især dem, der kan have en antioxidantvirkning, herunder C-vitamin, A-vitamin, kobber, zink og selen. Baseret på denne analyse vil efterforskerne give alle deltagere kostanbefalinger med fokus på de aspekter, som hver især bør forbedre. Data om deltagernes vægt ved begyndelsen og slutningen af ​​forsøget vil registrere. Efterforskerne vil anmode deltagerne om at returnere alle behandlede olivenoliebeholdere (de forbrugte og uforbrugte beholdere) ved afslutningen af ​​forsøget for at kontrollere olivenolieforbruget (dvs. en optælling af de tomme og fulde beholdere, hver deltager vil returnere).

Blodopsamling og klargøring af blodprøver: Efter nattens faste tages veneblod tidligt om morgenen fra antecubitalvenen i flere rør med antikoagulant- og antikoagulantfrie rør. Blodet fra de antikoagulantfrie rør får lov til at størkne i 30 minutter ved stuetemperatur. De antikoagulerende og antikoagulant-frie rør vil derefter blive centrifugeret ved 3500 rpm i 5 minutter ved 4°C for at opnå henholdsvis plasma- og serumprøver. Blodet vil altid blive udtaget på samme tidspunkt af dagen for at undgå døgnvariationer. Trombose-relaterede parametre (fibrinogenniveauer, protrombintid, protrombinaktivitet, cephalintid, trombocyttal, trombocytfordelingsbredde [PDW], gennemsnitlig trombocytvolumen [MPV], blodpladekrit, antal røde blodlegemer [RBC], neutrofil-til-lymfocytforhold [NLR] og blodplade-til-lymfocyt-forhold [PLR]) og erythrocytsedimentationshastighed (ESR) blev bestemt i plasmaprøver. Inflammatoriske markører (interleukin 6 [IL-6], IL-10, C-reaktivt protein [CRP]), nitrogenoxidniveauer, lipidprofil og cortisolniveauer blev målt i serumprøver.

Deltageres kliniske karakteristika: Efterforskerne vil indhente demografiske og kliniske data fra deltagernes interview og spørgeskemaer. Den samme specialist vil udføre alle målinger og test under hele undersøgelsen. Spørgeskemaerne vil blive udfyldt umiddelbart efter, at blodet er blevet udtaget. Forskerne vil evaluere funktionel kapacitet i daglige aktiviteter hos patienter med fibromyalgi ved hjælp af den spanske version af Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQ). FIQ-scoren, som er det instrument, der oftest bruges af forskere til at vurdere sværhedsgraden af ​​fibromyalgi, varierer fra 0 til 100. Selvrapporterede muskuloskeletale smerter vil blive vurderet hos fibromyalgipatienter ved en Visual Analogue Scale (VAS; 10 cm). For begge disse instrumenter afspejler højere score værre symptomatologi. Efterforskerne vil vurdere den fysiske (Physical Component Summary, PCS-12) og mentale (Mental Component Summary, MCS-12) helbredsstatus for patienter og kontroller ved hjælp af den spanske version af 12-elements Short-Form Health Survey (SF-12) ). Score varierer fra 0 til 100, med lavere værdier, der afspejler dårligere helbredstilstand.

Bestemmelse af biokemiske parametre

Nitrogenoxid (NO) Måling: NO-produktionen blev indirekte kvantificeret ved at måle nitrat/nitrit og S-nitroseforbindelser (NOx) ved hjælp af en ozonkemiluminescensbaseret metode. De optøede serumalikvoter blev deproteiniseret med NaOH 0,8 N og ZnS04 16% opløsning. Den samlede mængde NOx vil blive bestemt som tidligere beskrevet (Rus et al., 2011) ved brug af rensesystemet fra Sievers Instruments, model NOA 280i (GE Analytical Instruments, Colorado (CO), USA).

Bestemmelse af inflammatoriske markører: IL-6-niveauet vil blive bestemt ved en kemiluminescerende immunoassay under anvendelse af Access Immunoassay Systems (Beckman Coulter). Niveauer af IL-10 vil blive målt ved et kemiluminescerende immunoenzymatisk assay under anvendelse af et MLX™ luminometer (Dynex Technologies, Chantilly, VA). CRP vil blive målt ved hjælp af en AU 5800 analysator (Beckman Coulter).

Kortisolmåling: Kortisolniveauet vil blive bestemt i serumprøver ved en fluorescenspolarisationsimmunoassay ved hjælp af en AxSYM-analysator (Abbott Laboratories, Illinois (IL), USA).

Bestemmelse af lipidprofil: Serumlipidprofil (total kolesterol, high-density lipoprotein [HDL]-kolesterol, triglycerider, apolipoprotein A1 og apolipoprotein B) vil blive målt ved en spektrofotometrisk procedure under anvendelse af en OLYMPUS AU 5400 analysator (Beckman Coulter). Low-density lipoprotein (LDL)-kolesterolniveauer vil blive estimeret indirekte med Friedewald-ligningen. Niveauet af homocystein vil blive bestemt ved en fluorescenspolarisationsimmunoassay ved anvendelse af en AxSYM analysator (Abbott Laboratories). Forskerne vil bestemme lipidperoxidation ved at måle thiobarbitursyrereaktive stoffer (TBARS), som er en god indikator for lipidperoxidation, en vigtig markør for oxidativt stress. TBARS vil blive bestemt spektrofotometrisk i plasmaprøver efter producentens anbefalinger (TBARS Assay Kit, OXItek, Catalog. 0801192).

Bestemmelse af tromboserelaterede parametre: Blodkoagulationsparametre (fibrinogenniveauer, protrombintid, protrombinaktivitet og cephalintid) bestemmes i plasmaprøver ved hjælp af BCS XP-analysatoren (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland). Forskerne vil måle determinanter for trombocytfunktion (trombocyttal, trombocytfordelingsbredde [PDW] og gennemsnitlig blodpladevolumen [MPV]) og antal røde blodlegemer (RBC), neutrofil- og lymfocyttal i plasmaprøver ved flowcytometri ved hjælp af ADVIA 2120 analysator (Siemens Healthineers, Erlangen, Tyskland).

Prøvestørrelsesvurdering: Prøvestørrelsen er blevet estimeret ved hjælp af Ene 3.0-softwaren (GlaxoSmithKline). Prøvestørrelsen er blevet estimeret ud fra niveauerne af malondialdehyd (Gassió et al., 2008). Med en ensidig hypotese, antaget en sandsynlighed for type I fejl på 5 %, en β-risiko på 0,10, med en standardafvigelse af effekten på 1,4, anses 10 patienter for nødvendige pr. gren af ​​undersøgelsen, det vil sige i alt 20 patienter. Hvis 10 % af patienttab antages, vil der være behov for en minimal stikprøvestørrelse på 24 patienter, 12 for hver gren af ​​undersøgelsen.

Statistisk analyse: Den statistiske analyse af dataene vil blive udført ved hjælp af den statistiske pakke IBM SPSS Statistics 24 for Windows (SPSS Inc, Chicago, IL). Kolmogorov-Smirnov-testen og Levenne-testen vil blive udført for at teste henholdsvis normalitet og homoskedasticitet.

For at analysere effekten af ​​hver olivenolie mellem præ- og postmålinger blev dataene, der fulgte en normalfordeling og princippet om homoskedasticitet af varianser, testet med en tovejs ANOVA. Den statistiske signifikans vil blive fastslået ved at anvende en uparret Students t-test for at sammenligne forskelle mellem middelværdier. Data, der ikke fulgte en normalfordeling eller princippet om homoskedasticitet, vil blive testet ved hjælp af Scheirer-Ray-Hare-testen, den ikke-parametriske ækvivalent for to-vejs ANOVA. Den statistiske signifikans vil blive fastslået ved at anvende Mann-Whitney U-testen til at sammenligne forskelle mellem middelværdier.

For at analysere effekten af ​​typen af ​​olivenolie vil alle værdier blive konverteret til delta-scores (dvs. post-pre-værdier) og derefter testet ved uparret Student's t-test eller Mann-Whitney U-test baseret på normalitet og homoskedasticitet af data.

Effektstørrelsen vil blive beregnet ved hjælp af Cohen's d for parametriske test og eta squared (η²) for ikke-parametriske test. Værdier af Cohens d på 0,2, 0,5 og 0,8 svarer til de klassiske Cohen-bånd for fortolkning af effektstørrelsen som henholdsvis lille, medium og stor. Værdier af η² på 0,02, 0,13 og 0,26 svarer til henholdsvis lille, medium og stor effektstørrelse. Efterforskerne satte niveauet for statistisk signifikans til p < 0,05.